JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
의학

חקירת ההשפעות המגינות של Platycodin D על מחלת כבד שומני שאינה אלכוהולית במודל מבחנה המושרה על ידי חומצה פלמיטית

Published: December 02, 2022
doi:
10.3791/64816
, , , , , , ,
1Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, 2Bioengineering College of Chongqing University

Summary

פרוטוקול זה חוקר את ההשפעות המגינות של platycodin D על מחלת כבד שומני לא אלכוהולי במודל המושרה על ידי חומצה פלמיטית במבחנה .

Abstract

ההופעה של מחלת כבד שומני לא אלכוהולי (NAFLD) עולה בקצב מדאיג ברחבי העולם. Platycodon grandiflorum נמצא בשימוש נרחב כתרופה אתנו-רפואית מסורתית לטיפול במחלות שונות והוא מזון פונקציונלי טיפוסי שניתן לשלב בתזונה היומיומית. מחקרים הראו כי platycodin D (PD), אחד המרכיבים הפעילים העיקריים של Platycodon grandiflorum, יש זמינות ביולוגית גבוהה וממתן באופן משמעותי את ההתקדמות של NAFLD, אבל המנגנון הבסיסי של זה עדיין לא ברור. מחקר זה נועד לחקור את ההשפעה הטיפולית של פרקינסון נגד NAFLD במבחנה. תאי AML-12 טופלו בחומצה פלמיטית (PA) של 300 מיקרומטר במשך 24 שעות כדי למדל NAFLD במבחנה. לאחר מכן, התאים טופלו בפרקינסון או שלא קיבלו טיפול בפרקינסון במשך 24 שעות. רמות מיני החמצן הריאקטיבי (ROS) נותחו באמצעות צביעה של 2′,7′-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA), ופוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית נקבע על ידי שיטת הצביעה JC-1. יתר על כן, רמות ביטוי החלבונים של LC3-II/LC3-I ו- p62/SQSTM1 בליזטים של התא נותחו על ידי כתם מערבי. נמצא כי PD מפחית באופן משמעותי את רמות הפוטנציאל של ROS וקרום המיטוכונדריה בקבוצה שטופלה ב-PA בהשוואה לקבוצת הביקורת. בינתיים, PD העלה את רמות LC3-II/LC3-I והוריד את רמות p62/SQSTM1 בקבוצה שטופלה ב-PA בהשוואה לקבוצת הביקורת. התוצאות הצביעו על כך שמחלת פרקינסון שיפרה את NAFLD במבחנה על-ידי הפחתת עקה חמצונית וגירוי אוטופגיה. מודל זה במבחנה הוא כלי שימושי לחקר התפקיד של PD ב- NAFLD.

Introduction

Platycodon grandiflorus (PG), שהוא השורש המיובש של Platycodon grandiflorus (Jacq.) A.DC., משמש ברפואה סינית מסורתית (TCM). הוא מיוצר בעיקר באזורים הצפון-מזרחיים, הצפוניים, המזרחיים, המרכזיים והדרום-מערביים של סין1. רכיבי PG כוללים ספונינים טריטרפנואידים, רב-סוכרים, פלבנואידים, פוליפנולים, פוליאתילן גליקול, שמנים נדיפים ומינרלים2. ל-PG יש היסטוריה ארוכה של שימוש כמזון וכצמחי מרפא באסיה. באופן מסורתי, צמח זה שימש לייצור תרופות נגד מחלות ריאה. פרמקולוגיה מודרנית מספקת גם ראיות ליעילות של PG לטיפול במחלות אחרות. מחקרים הראו כי ל-PG יש השפעה טיפולית על מגוון מודלים של פגיעה בכבד הנגרמת על ידי תרופות. תוספי תזונה של תמציות PG או platycodin יכולים להקל על השמנת יתר עתירת שומן הנגרמת על ידי דיאטה ומחלות מטבוליות הקשורות אליה 3,4,5. פוליסכרידים מ-PG יכולים לשמש לטיפול בפגיעה חריפה בכבד הנגרמת על ידי LPS/D-GalN בעכברים6. יתר על כן, ספונינים משורשי PG משפרים סטיאטוהפטיטיס לא אלכוהולית הנגרמת על ידי דיאטה עתירת שומן (NASH)7. יתר על כן, platycodin D (PD), אחד המרכיבים הטיפוליים החשובים ביותר של PG, יכול לשפר ביטוי קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה וספיגת ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה בתאי קרצינומה הפטוצלולרית אנושית (HepG2)8. יתר על כן, פרקינסון יכול גם לגרום לאפופטוזיס ולעכב הידבקות, נדידה ופלישה בתאי HepG2 9,10. לפיכך, במחקר זה, תאי הפטומה AML-12 של עכברים משמשים לבניית מודל במבחנה וכדי להמשיך לחקור את ההשפעות הפרמקולוגיות ואת המנגנונים הבסיסיים של PD במודל זה.

המונח מחלת כבד שומני לא אלכוהולי (NAFLD) מתייחס לקבוצה של מחלות כבד הכוללת סטאטוזיס פשוט, NASH, שחמת הכבד וקרצינומה הפטוצלולרית11. למרות שהפתוגנזה של NAFLD אינה מובנת לחלוטין, מהתיאוריה הקלאסית של “שתי מכות” ועד לתיאוריית “ריבוי המכות” הנוכחית, עמידות לאינסולין נחשבת מרכזית בפתוגנזה של NAFLD12,13,14. מחקרים הראו כי עמידות לאינסולין בהפטוציטים עלולה להוביל לעלייה בחומצות שומן חופשיות, היוצרות טריגליצרידים המופקדים בכבד וגורמים לכבד להיות שומני15,16. הצטברות שומן עלולה להוביל לרעילות ליפוטוקסית, תפקוד לקוי של המיטוכונדריה כתוצאה מעקה חמצונית, עקה אנדופלסמית ברשתית ושחרור ציטוקינים דלקתיים, וכתוצאה מכך פתוגנזה והתקדמות של NAFLD17,18. בנוסף, אוטופגיה גם ממלאת תפקיד בפתוגנזה של NAFLD, שכן היא מעורבת בוויסות רגישות לאינסולין תאי, מטבוליזם שומנים בתאים, פגיעה בהפטוציטים וחסינות מולדת 19,20,21.

מגוון מודלים של בעלי חיים ומודלים תאיים הוקמו כדי לספק בסיס לחקר הפתוגנזה והמטרות הטיפוליות האפשריות של NAFLD22,23. עם זאת, מודלים של בעלי חיים בודדים אינם יכולים לחקות באופן מלא את כל התהליכים הפתולוגיים של NAFLD24. הבדלים אינדיבידואליים בין בעלי חיים מובילים לתכונות פתולוגיות שונות. שימוש בקווי תאי כבד או בהפטוציטים ראשוניים במחקרי מבחנה של NAFLD מבטיח עקביות מרבית בתנאי הניסוי. חוסר ויסות מטבוליזם של שומנים בכבד יכול להוביל לרמות גבוהות יותר של הצטברות טיפות שומנים בכבד ב- NAFLD25. חומצות שומן חופשיות כגון חומצה אולאית ושמן דקלים שימשו במודל in vitro כדי לחקות NAFLD הנגרמת על ידי דיאטה עתירת שומן26,27. קו תאי הפטובלסטומה האנושי HepG2 משמש לעתים קרובות לבניית מודלים של NAFLD במבחנה, אבל, בתור קו תאי גידול, חילוף החומרים של תאי HepG2 שונה באופן משמעותי מזה של תאי כבד בתנאים פיזיולוגיים רגילים28. לכן, שימוש בהפטוציטים ראשוניים או בהפטוציטים ראשוניים של עכברים לבניית מודל NAFLD במבחנה לבדיקת תרופות הוא יתרון גדול יותר מאשר שימוש בקווי תאים סרטניים. בהשוואה לבחינה סינרגטית של השפעות תרופתיות ומטרות טיפוליות הן במודלים של בעלי חיים והן במודלים של הפטוציטים במבחנה, נראה כי לשימוש בהפטוציטים של עכברים לבניית מודל NAFLD במבחנה יש פוטנציאל יישום טוב יותר.

חומצות שומן חופשיות הנכנסות לכבד מחומצנות כדי לייצר אנרגיה או מאוחסנות כטריגליצרידים. באופן משמעותי, חומצות שומן חופשיות יש lipotoxicity מסוים עלול לגרום תפקוד לקוי של התאים אפופטוזיס12. חומצה פלמיטית (PA) היא חומצת השומן הרוויה הנפוצה ביותר בפלזמה האנושית29. כאשר תאים ברקמה שאינה שומן נחשפים לריכוזים גבוהים של PA במשך זמן רב, הדבר ממריץ את הייצור של מיני חמצן תגובתי (ROS) וגורם לעקה חמצונית, הצטברות שומנים ואפילו אפופטוזיס30. לכן, חוקרים רבים משתמשים ב-PA כגורם מעורר תאי כבד לייצר ROS, ובכך בונים את מודל מחלת הכבד השומני במבחנה ומעריכים את ההשפעות המגינות של חומרים פעילים מסוימים על תאים31,32,33,34. מחקר זה מציג פרוטוקול לחקירת ההשפעות המגינות של פרקינסון על מודל תאי של NAFLD המושרה על ידי הרשות הפלסטינית.

Protocol

תאי AML-12 (קו תאי הפטוציטים רגיל של עכבר) משמשים למחקרים מבוססי תאים. התאים מתקבלים ממקור מסחרי (ראה טבלת חומרים). 1. טיפול מקדים בתאי AML-12 כדי למדל NAFLD במבחנה שמור על התאים במדיה רגילה של תרבית תאים (DMEM בתוספת Ham’s F12 [1:1] המכילים 0.005 מ”ג/מ”ל אינסולין, 5 נ”ג/?…

Representative Results

ROS תוך-תאי בתאיםתאי AML-12 הושרו עם PA של 300 מיקרומטר למשך 24 שעות, ומודל תאי NAFLD הוקם. לאחר מכן, התאים טופלו במחלת פרקינסון במשך 24 שעות. התאים סומנו בבדיקה פלואורסצנטית DCFH-DA, וייצור ROS נצפה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. התוצאות של צביעת DCFH-DA של ROS תוך-תאי בתאים מוצגות באיור 1…

Discussion

מחקרים הדגישו את העובדה כי NAFLD היא תסמונת קליניתפתולוגית, החל כבד שומני NASH, שיכול להתקדם שחמת הכבד וסרטן הכבד51. תזונה עתירת שומן ואורח חיים לא פעיל הם גורמי סיכון אופייניים ל-NAFLD. הן טיפולים שאינם תרופתיים והן טיפולים תרופתיים לטיפול ב- NAFLD נחקרו51,52,53<sup class="xref"…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מהוועדה למדע וטכנולוגיה של צ’ונגצ’ינג (cstc2020jxjl-jbky10002, jbky20200026, cstc2021jscx-dxwtBX0013 ו- jbky20210029) והקרן למדע פוסט-דוקטורט בסין (מס ‘2021MD703919).

Materials

5% BSA Blocking Buffer Solarbio, Beijing, China SW3015
AML12 (alpha mouse liver 12) cell line Procell Life Science&Technology Co., Ltd, China AML12
Beyo ECL Plus Beyotime, Shanghai, China P0018S
Bio-safety cabinet Esco Micro Pte Ltd, Singapore AC2-5S1 A2 
cellSens Olympus, Tokyo, Japan 1.8
Culture CO2 Incubator Esco Micro Pte Ltd, Singapore CCL-170B-8
Dexamethasone Beyotime, Shanghai, China ST125
Dimethyl sulfoxide Solarbio, Beijing, China D8371
DMEM/F12 Hyclone, Logan, UT, USA SH30023.01
Foetal Bovine Serum Hyclone, Tauranga, New Zealand SH30406.05
Graphpad software GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA 8.0
HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L) ABclonal, Wuhan, China AS003
Hydrophobic PVDF Transfer Membrane Merck, Darmstadt, Germany IPFL00010
Insulin, Transferrin, Selenium Solution, 100× Beyotime, Shanghai, China C0341
MAP LC3β Antibody Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd SC-376404
Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1 Solarbio, Beijing, China M8650
Olympus Inverted Microscope IX53 Olympus, Tokyo, Japan IX53
Palmitic Acid Sigma, Germany P0500
Penicillin-Streptomycin Solution (100x) Hyclone, Logan, UT, USA SV30010
Phenylmethanesulfonyl fluoride Beyotime, Shanghai, China ST506
Phosphate Buffered Solution Hyclone, Logan, UT, USA BL302A
Platycodin D Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd, China CSA: 58479-68-8
Protease inhibitor cocktail for general use, 100x Beyotime, Shanghai, China P1005
Protein Marker Solarbio, Beijing, China PR1910
Reactive Oxygen Species Assay Kit Solarbio, Beijing, China CA1410
RIPA Lysis Buffer Beyotime, Shanghai, China P0013E
SDS-PAGE Gel Quick Preparation Kit Beyotime, Shanghai, China P0012AC
SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 5x Beyotime, Shanghai, China P0015
Sigma Centrifuge Sigma, Germany 3K15
SQSTM1/p62 Antibody Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd SC-28359
Tecan Infinite 200 PRO   Tecan Austria GmbH, Austria 1510002987
WB Transfer Buffer,10x Solarbio, Beijing, China D1060
β-Actin Mouse mAb ABclonal, Wuhan, China AC004
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Xunyan, X. Y., Fang, X. M. The effect of Platycodon grandiflorum and its historical change in the clinical application of Platycodonis radix. Zhonghua Yi Shi Za Shi. 51 (3), 167-176 (2021).
  2. Ma, X., et al. Platycodon grandiflorum extract: Chemical composition and whitening, antioxidant, and anti-inflammatory effects. RSC Advances. 11 (18), 10814-10826 (2021).
  3. Ke, W., et al. Dietary Platycodon grandiflorus attenuates hepatic insulin resistance and oxidative stress in high-fat-diet induced non-alcoholic fatty liver disease. Nutrients. 12 (2), 480 (2020).
  4. Kim, Y. J., et al. Platycodon grandiflorus root extract attenuates body fat mass, hepatic steatosis and insulin resistance through the interplay between the liver and adipose tissue. Nutrients. 8 (9), 532 (2016).
  5. Park, H. M., et al. Mass spectrometry-based metabolomic and lipidomic analyses of the effects of dietary Platycodon grandiflorum on liver and serum of obese mice under a high-fat diet. Nutrients. 9 (1), 71 (2017).
  6. Qi, C., et al. Platycodon grandiflorus polysaccharide with anti-apoptosis, anti-oxidant and anti-inflammatory activity against LPS/D-GalN induced acute liver injury in mice. Journal of Polymers and the Environment. 29 (12), 4088-4097 (2021).
  7. Choi, J. H., et al. Saponins from the roots of Platycodon grandiflorum ameliorate high fat diet-induced non-alcoholic steatohepatitis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 86, 205-212 (2017).
  8. Choi, Y. J., et al. Platycodin D enhances LDLR expression and LDL uptake via down-regulation of IDOL mRNA in hepatic cells. Scientific Reports. 10, 19834 (2020).
  9. Li, T., et al. Platycodin D triggers autophagy through activation of extracellular signal-regulated kinase in hepatocellular carcinoma HepG2 cells. European Journal of Pharmacology. 749, 81-88 (2015).
  10. Lu, J. -. J., et al. Proteomic analysis of hepatocellular carcinoma HepG2 cells treated with platycodin D. Chinese Journal of Natural Medicines. 13 (9), 673-679 (2015).
  11. Neuschwander-Tetri, B. A. Therapeutic landscape for NAFLD in 2020. Gastroenterology. 158 (7), 1984-1998 (2020).
  12. Friedman, S. L., Neuschwander-Tetri, B. A., Rinella, M., Sanyal, A. J. Mechanisms of NAFLD development and therapeutic strategies. Nature Medicine. 24 (7), 908-922 (2018).
  13. Bessone, F., Razori, M. V., Roma, M. G. Molecular pathways of nonalcoholic fatty liver disease development and progression. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (1), 99-128 (2019).
  14. Buzzetti, E., Pinzani, M., Tsochatzis, E. A. The multiple-hit pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Metabolism. 65 (8), 1038-1048 (2016).
  15. Watt, M. J., Miotto, P. M., De Nardo, W., Montgomery, M. K. The liver as an endocrine organ-Linking NAFLD and insulin resistance. Endocrine Reviews. 40 (5), 1367-1393 (2019).
  16. Khan, R. S., Bril, F., Cusi, K., Newsome, P. N. Modulation of insulin resistance in nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology. 70 (2), 711-724 (2019).
  17. Karkucinska-Wieckowska, A., et al. Mitochondria, oxidative stress and nonalcoholic fatty liver disease: A complex relationship. European Journal of Clinical Investigation. 52 (3), 13622 (2022).
  18. Tilg, H., Adolph, T. E., Dudek, M., Knolle, P. Non-alcoholic fatty liver disease: The interplay between metabolism, microbes and immunity. Nature Metabolism. 3 (12), 1596-1607 (2021).
  19. Qian, H., et al. Autophagy in liver diseases: A review. Molecular Aspects of Medicine. 82, 100973 (2021).
  20. Du, J., Ji, Y., Qiao, L., Liu, Y., Lin, J. Cellular endo-lysosomal dysfunction in the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease. Liver International. 40 (2), 271-280 (2020).
  21. Allaire, M., Rautou, P. E., Codogno, P., Lotersztajn, S. Autophagy in liver diseases: Time for translation. Journal of Hepatology. 70 (5), 985-998 (2019).
  22. Kanuri, G., Bergheim, I. In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11963-11980 (2013).
  23. Lau, J. K., Zhang, X., Yu, J. Animal models of non-alcoholic fatty liver disease: Current perspectives and recent advances. The Journal of Pathology. 241 (1), 36-44 (2017).
  24. Reimer, K. C., Wree, A., Roderburg, C., Tacke, F. New drugs for NAFLD: Lessons from basic models to the clinic. Hepatology International. 14 (1), 8-23 (2020).
  25. Carpino, G., et al. Increased liver localization of lipopolysaccharides in human and experimental NAFLD. Hepatology. 72 (2), 470-485 (2020).
  26. Vergani, L. Fatty acids and effects on in vitro and in vivo models of liver steatosis. Current Medicinal Chemistry. 26 (19), 3439-3456 (2019).
  27. Scorletti, E., Carr, R. M. A new perspective on NAFLD: Focusing on lipid droplets. Journal of Hepatology. 76 (4), 934-945 (2022).
  28. Green, C. J., Pramfalk, C., Morten, K. J., Hodson, L. From whole body to cellular models of hepatic triglyceride metabolism: Man has got to know his limitations. American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (1), 1-20 (2015).
  29. Gambino, R., et al. Different serum free fatty acid profiles in NAFLD subjects and healthy controls after oral fat load. International Journal of Molecular Sciences. 17 (4), 479 (2016).
  30. Marra, F., Svegliati-Baroni, G. Lipotoxicity and the gut-liver axis in NASH pathogenesis. Journal of Hepatology. 68 (2), 280-295 (2018).
  31. Zhang, J., Zhang, H., Deng, X., Zhang, Y., Xu, K. Baicalin protects AML-12 cells from lipotoxicity via the suppression of ER stress and TXNIP/NLRP3 inflammasome activation. Chemico-Biological Interactions. 278, 189-196 (2017).
  32. Liang, Y., et al. γ-Linolenic acid prevents lipid metabolism disorder in palmitic acid-treated alpha mouse liver-12 cells by balancing autophagy and apoptosis via the LKB1-AMPK-mTOR pathway. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 69 (29), 8257-8267 (2021).
  33. Peng, Z., et al. Nobiletin alleviates palmitic acid-induced NLRP3 inflammasome activation in a sirtuin 1dependent manner in AML12 cells. Molecular Medicine Reports. 18 (6), 5815-5822 (2018).
  34. Xu, T., et al. Ferulic acid alleviates lipotoxicity-induced hepatocellular death through the SIRT1-regulated autophagy pathway and independently of AMPK and Akt in AML-12 hepatocytes. Nutrition & Metabolism. 18 (1), 13 (2021).
  35. Aranda, A., et al. Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) assay: A quantitative method for oxidative stress assessment of nanoparticle-treated cells. Toxicology in Vitro. 27 (2), 954-963 (2013).
  36. Eruslanov, E., Kusmartsev, S. Identification of ROS using oxidized DCFDA and flow-cytometry. Methods in Molecular Biology. 594, 57-72 (2010).
  37. Bankhead, P. . Analyzing Fluorescence Microscopy Images with ImageJ. , (2014).
  38. Wiesmann, V., et al. Review of free software tools for image analysis of fluorescence cell micrographs. Journal of Microscopy. 257 (1), 39-53 (2015).
  39. Lugli, E., Troiano, L., Cossarizza, A. Polychromatic analysis of mitochondrial membrane potential using JC-1. Current Protocols in Cytometry. , (2007).
  40. Sivandzade, F., Bhalerao, A., Cucullo, L. Analysis of the mitochondrial membrane potential using the cationic JC-1 dye as a sensitive fluorescent probe. Bio-protocol. 9 (1), 3128 (2019).
  41. Chazotte, B. Labeling mitochondria with JC-1. Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (9), (2011).
  42. Walker, J. M. The bicinchoninic acid (BCA) assay for protein quantitation. The Protein Protocols Handbook. , 11-15 (2009).
  43. Goldman, A., Ursitti, J. A., Mozdzanowski, J., Speicher, D. W. Electroblotting from polyacrylamide gels. Current Protocols in Protein Science. 82, 1-16 (2015).
  44. Mozdzanowski, J., Speicher, D. W. Proteins from polyacrylamide gels onto PVDF membranes. Current Research in Protein Chemistry. , 87 (2012).
  45. Taylor, S. C., Posch, A. The design of a quantitative western blot experiment. Biomed Research International. 2014, 361590 (2014).
  46. Motulsky, H. J. Graphpad Statistics Guide. Options for multiple t tests. Graphpad. , (2020).
  47. Poltorak, A. Cell death: All roads lead to mitochondria. Current Biology. 32 (16), 891-894 (2022).
  48. Dadsena, S., Jenner, A., García-Sáez, A. J. Mitochondrial outer membrane permeabilization at the single molecule level. Cellular and Molecular Life Sciences. 78 (8), 3777-3790 (2021).
  49. Green, D. R., Kroemer, G. The pathophysiology of mitochondrial cell death. Science. 305 (5684), 626-629 (2004).
  50. Lange, N. F., Radu, P., Dufour, J. F. Prevention of NAFLD-associated HCC: Role of lifestyle and chemoprevention. Journal of Hepatology. 75 (5), 1217-1227 (2021).
  51. Liu, X., Zhang, Y., Ma, C., Lin, J., Du, J. Alternate-day fasting alleviates high fat diet induced non-alcoholic fatty liver disease through controlling PPARalpha/Fgf21 signaling. Molecular Biology Reports. 49 (4), 3113-3122 (2022).
  52. Romero-Gomez, M., Zelber-Sagi, S., Trenell, M. Treatment of NAFLD with diet, physical activity and exercise. Journal of Hepatology. 67 (4), 829-846 (2017).
  53. Mizushima, N., Levine, B. Autophagy in human diseases. New England Journal of Medicine. 383 (16), 1564-1576 (2020).
  54. Cui, B., Yu, J. M. Autophagy: A new pathway for traditional Chinese medicine. Journal of Asian Natural Products Research. 20 (1), 14-26 (2018).
  55. Law, B. Y., et al. New potential pharmacological functions of Chinese herbal medicines via regulation of autophagy. Molecules. 21 (3), 359 (2016).
  56. Zhou, H., et al. Research progress in use of traditional Chinese medicine monomer for treatment of non-alcoholic fatty liver disease. European Journal of Pharmacology. 898, 173976 (2021).
  57. Zhang, L., Yao, Z., Ji, G. Herbal extracts and natural products in alleviating non-alcoholic fatty liver disease via activating autophagy. Frontiers in Pharmacology. 9, 1459 (2018).
  58. Zhang, X., et al. C-X-C motif chemokine 10 impairs autophagy and autolysosome formation in non-alcoholic steatohepatitis. Theranostics. 7 (11), 2822-2836 (2017).
  59. Li, C. X., et al. Allyl isothiocyanate ameliorates lipid accumulation and inflammation in nonalcoholic fatty liver disease via the Sirt1/AMPK and NF-kappaB signaling pathways. World Journal of Gastroenterology. 25 (34), 5120-5133 (2019).
  60. Li, S., et al. Sirtuin 3 acts as a negative regulator of autophagy dictating hepatocyte susceptibility to lipotoxicity. Hepatology. 66 (3), 936-952 (2017).
  61. Farrell, G. C., Teoh, N. C., McCuskey, R. S. Hepatic microcirculation in fatty liver disease. The Anatomical Record. 291 (6), 684-692 (2008).
  62. Milner, E., et al. Emerging three-dimensional hepatic models in relation to traditional two-dimensional in vitro assays for evaluating drug metabolism and hepatoxicity. Medicine in Drug Discovery. 8, 100060 (2020).
  63. Zhang, X., Jiang, T., Chen, D., Wang, Q., Zhang, L. W. Three-dimensional liver models: State of the art and their application for hepatotoxicity evaluation. Critical Reviews in Toxicology. 50 (4), 279-309 (2020).
  64. Bilson, J., Sethi, J. K., Byrne, C. D. Non-alcoholic fatty liver disease: A multi-system disease influenced by ageing and sex, and affected by adipose tissue and intestinal function. Proceedings of the Nutrition Society. 81 (2), 146-161 (2022).

Tags

AML-12 CellsNon-alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD)Platycodin DPalmitic AcidCell ModelIn VitroOxidative StressMitochondrial Membrane PotentialMicroscopy
check_url/kr/64816?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Wen, X., Wang, J., Fan, J., Chu, R., Chen, Y., Xing, Y., Li, N., Wang, G. Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model. J. Vis. Exp. (190), e64816, doi:10.3791/64816 (2022).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image