JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
의학

Palmitik Asit Kaynaklı In Vitro Modelde Platycodin D'nin Alkolsüz Yağlı Karaciğer Hastalığı Üzerindeki Koruyucu Etkilerinin İncelenmesi

Published: December 02, 2022
doi:
10.3791/64816
, , , , , , ,
1Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, 2Bioengineering College of Chongqing University

Summary

Bu protokol, palmitik asit kaynaklı in vitro modelde platikodin D’nin alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı üzerindeki koruyucu etkilerini araştırmaktadır.

Abstract

Alkolsüz yağlı karaciğer hastalığının (NAFLD) görülmesi dünya çapında endişe verici bir oranda artmaktadır. Platycodon grandiflorum , çeşitli hastalıkların tedavisi için geleneksel bir etnotilaç olarak yaygın olarak kullanılmaktadır ve günlük diyete dahil edilebilecek tipik bir fonksiyonel besindir. Çalışmalar, Platycodon grandiflorum’daki ana aktif bileşenlerden biri olan platycodin D’nin (PD) yüksek biyoyararlanıma sahip olduğunu ve NAFLD’nin ilerlemesini önemli ölçüde azalttığını ileri sürmüştür, ancak bunun altında yatan mekanizma hala belirsizdir. Bu çalışma, PD’nin NAFLD’ye karşı terapötik etkisini in vitro olarak araştırmayı amaçlamaktadır. AML-12 hücreleri, NAFLD’yi in vitro olarak modellemek için 24 saat boyunca 300 μM palmitik asit (PA) ile ön işlemden geçirildi. Daha sonra, hücreler ya PD ile tedavi edildi ya da 24 saat boyunca PD tedavisi almadı. Reaktif oksijen türlerinin (ROS) seviyeleri 2′,7′-dikloro-dihidro-floresein diasetat (DCFH-DA) boyaması kullanılarak analiz edildi ve mitokondriyal membran potansiyeli JC-1 boyama yöntemi ile belirlendi. Ayrıca, hücre lizatlarındaki LC3-II / LC3-I ve p62 / SQSTM1 protein ekspresyon seviyeleri batı lekelenmesi ile analiz edildi. PD’nin, PA ile tedavi edilen grupta ROS ve mitokondriyal membran potansiyel düzeylerini kontrol grubuna göre anlamlı derecede azalttığı bulundu. Bu arada, PD, kontrol grubuna kıyasla PA ile tedavi edilen grupta LC3-II / LC3-I seviyelerini arttırdı ve p62 / SQSTM1 seviyelerini düşürdü. Sonuçlar, PD’nin oksidatif stresi azaltarak ve otofajiyi uyararak NAFLD’yi in vitro olarak iyileştirdiğini göstermiştir. Bu in vitro model, NAFLD’de PD’nin rolünü incelemek için yararlı bir araçtır.

Introduction

Platycodon grandiflorus (PG), Platycodon grandiflorus’un (Jacq.) kurutulmuş köküdür. A.DC., geleneksel Çin tıbbında (TCM) kullanılır. Esas olarak Çin1’in kuzeydoğu, kuzey, doğu, orta ve güneybatı bölgelerinde üretilmektedir. PG bileşenleri arasında triterpenoid saponinler, polisakkaritler, flavonoidler, polifenoller, polietilen glikoller, uçucu yağlar ve mineraller2 bulunur. PG, Asya’da gıda ve bitkisel ilaç olarak kullanılma konusunda uzun bir geçmişe sahiptir. Geleneksel olarak, bu bitki akciğer hastalıklarına karşı ilaç yapmak için kullanılmıştır. Modern farmakoloji ayrıca PG’nin diğer hastalıkların tedavisinde etkinliğine dair kanıtlar sağlar. Çalışmalar, PG’nin çeşitli ilaca bağlı karaciğer hasarı modelleri üzerinde terapötik bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. PG veya platikodin ekstraktlarının diyet takviyesi, yüksek yağlı diyete bağlı obeziteyi ve buna bağlı metabolik hastalıkları iyileştirebilir 3,4,5. PG’den polisakkaritler, farelerde LPS / D-GalN’nin neden olduğu akut karaciğer hasarının tedavisi için kullanılabilir6. Ayrıca, PG köklerinden gelen saponinler, yüksek yağlı diyete bağlı alkolsüz steatohepatiti (NASH) iyileştirir7. Ayrıca, PG’nin en önemli terapötik bileşenlerinden biri olan platikodin D (PD), insan hepatosellüler karsinom (HepG2) hücrelerinde düşük yoğunluklu lipoprotein reseptör ekspresyonunu ve düşük yoğunluklu lipoprotein alımını artırabilir8. Ayrıca, PD ayrıca apoptozu indükleyebilir ve HepG2 hücrelerinde adezyon, migrasyon ve invazyonu inhibe edebilir 9,10. Bu nedenle, bu çalışmada, fare hepatoma AML-12 hücreleri in vitro model yapımında ve bu modelde PD’nin farmakolojik etkilerini ve altta yatan mekanizmalarını daha fazla incelemek için kullanılmıştır.

Alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) terimi, basit steatoz, NASH, siroz ve hepatosellüler karsinom11’i içeren bir grup karaciğer hastalığını ifade eder. NAFLD’nin patogenezi tam olarak anlaşılamamış olsa da, klasik “iki isabetli” teoriden mevcut “çoklu vuruş” teorisine kadar, insülin direncinin NAFLD patogenezinde merkezi olduğu düşünülmektedir12,13,14. Çalışmalar, hepatositlerdeki insülin direncinin, karaciğerde biriken trigliseritleri oluşturan ve karaciğerin yağlı olmasına neden olan serbest yağ asitlerinin artmasına neden olabileceğini göstermiştir15,16. Yağ birikimi lipotoksisiteye, oksidatif strese bağlı mitokondriyal disfonksiyona, endoplazmik retikulum stresine ve inflamatuar sitokin salınımına yol açarak NAFLD17,18’in patogenezine ve ilerlemesine neden olabilir. Ek olarak, otofaji, hücresel insülin duyarlılığını, hücresel lipid metabolizmasını, hepatosit hasarını ve doğuştan gelen bağışıklığı düzenlemede rol oynadığı için NAFLD’nin patogenezinde de rol oynar 19,20,21.

NAFLD22,23’ün patogenezini ve potansiyel terapötik hedeflerini araştırmak için bir temel oluşturmak üzere çeşitli hayvan modelleri ve hücresel modeller oluşturulmuştur. Bununla birlikte, tek hayvan modelleri NAFLD24’ün tüm patolojik süreçlerini tam olarak taklit edemez. Hayvanlar arasındaki bireysel farklılıklar farklı patolojik özelliklere yol açar. NAFLD’nin in vitro çalışmalarında karaciğer hücre hatlarının veya primer hepatositlerin kullanılması, deneysel koşullarda maksimum tutarlılık sağlar. Hepatik lipid metabolizması disregülasyonu, NAFLD25’te daha yüksek seviyelerde hepatosit lipid damlacık birikimine yol açabilir. Oleik asit ve palmiye yağı gibi serbest yağ asitleri, in vitro modelde, yüksek yağlı bir diyetin neden olduğu NAFLD’yi taklit etmek için kullanılmıştır26,27. İnsan hepatoblastoma hücre hattı HepG2, in vitro NAFLD modellerinin yapımında sıklıkla kullanılır, ancak bir tümör hücre hattı olarak, HepG2 hücrelerinin metabolizması normal fizyolojik koşullar altında karaciğer hücrelerininkinden önemli ölçüde farklıdır28. Bu nedenle, ilaç taraması için in vitro NAFLD modelini oluşturmak için primer hepatositleri veya fare primer hepatositlerini kullanmak, tümör hücre hatlarını kullanmaktan daha avantajlıdır. Hem hayvan modellerinde hem de in vitro hepatosit modellerinde ilaç etkilerinin ve terapötik hedeflerin sinerjik incelemesi karşılaştırıldığında, in vitro NAFLD modelini oluşturmak için fare hepatositlerinin kullanılmasının daha iyi uygulama potansiyeline sahip olduğu görülmektedir.

Karaciğere giren serbest yağ asitleri enerji üretmek için oksitlenir veya trigliseritler olarak depolanır. Önemli ölçüde, serbest yağ asitleri belirli bir lipotoksisiteye sahiptir ve hücresel disfonksiyon ve apoptozu indükleyebilir12. Palmitik asit (PA), insan plazmasında en bol bulunan doymuş yağ asididir29. Yağ dışı dokudaki hücreler uzun süre yüksek konsantrasyonlarda PA’ya maruz kaldığında, bu reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimini uyarır ve oksidatif strese, lipit birikimine ve hatta apoptoza neden olur30. Bu nedenle, birçok araştırmacı PA’yı karaciğer hücrelerini ROS üretmeye teşvik etmek için bir indükleyici olarak kullanır ve böylece in vitro yağlı karaciğer hastalığı modelini oluşturur ve bazı aktif maddelerin hücreler üzerindeki koruyucu etkilerini değerlendirir31,32,33,34. Bu çalışma, PD’nin PA tarafından indüklenen NAFLD’nin bir hücre modeli üzerindeki koruyucu etkilerini araştırmak için bir protokol sunmaktadır.

Protocol

AML-12 hücreleri (normal bir fare hepatosit hücre hattı) hücre bazlı çalışmalar için kullanılır. Hücreler ticari bir kaynaktan elde edilir (bakınız Malzeme Tablosu). 1. NAFLD’yi in vitro modellemek için AML-12 hücrelerinin ön muamelesi Hücreleri normal hücre kültürü ortamında (DMEM artı Ham’ın F12 [1:1], 0.005 mg/mL insülin, 5 ng/mL selenyum, 0.005 mg/mL transferrin, 40 ng/mL deksametazon ve fetal sığır seru…

Representative Results

Hücrelerde hücre içi ROSAML-12 hücreleri 24 saat boyunca 300 μM PA ile indüklendi ve bir NAFLD hücre modeli oluşturuldu. Daha sonra, hücreler 24 saat boyunca PD ile tedavi edildi. Hücreler bir DCFH-DA floresan probu ile etiketlendi ve bir floresan mikroskobu altında ROS üretimi gözlendi. Hücrelerdeki hücre içi ROS’un DCFH-DA boyamasının sonuçları Şekil 1’de gösterilmiştir. Sonuçlar, PD’nin 300 μM PA (P < 0.01) ile inkübe edilen hücrele…

Discussion

Çalışmalar, NAFLD’nin yağlı karaciğerden NASH’ye kadar değişen, siroz ve karaciğer kanserine ilerleyebilen klinikopatolojik bir sendrom olduğu gerçeğini vurgulamıştır51. Yüksek yağlı bir diyet ve aktif olmayan bir yaşam tarzı NAFLD için tipik risk faktörleridir. NAFLD tedavisi için hem ilaç dışı tedaviler hem de ilaç tedavileriaraştırılmıştır 51,52,53. Bununla birlikte, N…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma, Chongqing Bilim ve Teknoloji Komisyonu (cstc2020jxjl-jbky10002, jbky20200026, cstc2021jscx-dxwtBX0013 ve jbky20210029) ve Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (No. 2021MD703919) tarafından desteklenmektedir.

Materials

5% BSA Blocking Buffer Solarbio, Beijing, China SW3015
AML12 (alpha mouse liver 12) cell line Procell Life Science&Technology Co., Ltd, China AML12
Beyo ECL Plus Beyotime, Shanghai, China P0018S
Bio-safety cabinet Esco Micro Pte Ltd, Singapore AC2-5S1 A2 
cellSens Olympus, Tokyo, Japan 1.8
Culture CO2 Incubator Esco Micro Pte Ltd, Singapore CCL-170B-8
Dexamethasone Beyotime, Shanghai, China ST125
Dimethyl sulfoxide Solarbio, Beijing, China D8371
DMEM/F12 Hyclone, Logan, UT, USA SH30023.01
Foetal Bovine Serum Hyclone, Tauranga, New Zealand SH30406.05
Graphpad software GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA 8.0
HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L) ABclonal, Wuhan, China AS003
Hydrophobic PVDF Transfer Membrane Merck, Darmstadt, Germany IPFL00010
Insulin, Transferrin, Selenium Solution, 100× Beyotime, Shanghai, China C0341
MAP LC3β Antibody Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd SC-376404
Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1 Solarbio, Beijing, China M8650
Olympus Inverted Microscope IX53 Olympus, Tokyo, Japan IX53
Palmitic Acid Sigma, Germany P0500
Penicillin-Streptomycin Solution (100x) Hyclone, Logan, UT, USA SV30010
Phenylmethanesulfonyl fluoride Beyotime, Shanghai, China ST506
Phosphate Buffered Solution Hyclone, Logan, UT, USA BL302A
Platycodin D Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd, China CSA: 58479-68-8
Protease inhibitor cocktail for general use, 100x Beyotime, Shanghai, China P1005
Protein Marker Solarbio, Beijing, China PR1910
Reactive Oxygen Species Assay Kit Solarbio, Beijing, China CA1410
RIPA Lysis Buffer Beyotime, Shanghai, China P0013E
SDS-PAGE Gel Quick Preparation Kit Beyotime, Shanghai, China P0012AC
SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 5x Beyotime, Shanghai, China P0015
Sigma Centrifuge Sigma, Germany 3K15
SQSTM1/p62 Antibody Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd SC-28359
Tecan Infinite 200 PRO   Tecan Austria GmbH, Austria 1510002987
WB Transfer Buffer,10x Solarbio, Beijing, China D1060
β-Actin Mouse mAb ABclonal, Wuhan, China AC004
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Xunyan, X. Y., Fang, X. M. The effect of Platycodon grandiflorum and its historical change in the clinical application of Platycodonis radix. Zhonghua Yi Shi Za Shi. 51 (3), 167-176 (2021).
  2. Ma, X., et al. Platycodon grandiflorum extract: Chemical composition and whitening, antioxidant, and anti-inflammatory effects. RSC Advances. 11 (18), 10814-10826 (2021).
  3. Ke, W., et al. Dietary Platycodon grandiflorus attenuates hepatic insulin resistance and oxidative stress in high-fat-diet induced non-alcoholic fatty liver disease. Nutrients. 12 (2), 480 (2020).
  4. Kim, Y. J., et al. Platycodon grandiflorus root extract attenuates body fat mass, hepatic steatosis and insulin resistance through the interplay between the liver and adipose tissue. Nutrients. 8 (9), 532 (2016).
  5. Park, H. M., et al. Mass spectrometry-based metabolomic and lipidomic analyses of the effects of dietary Platycodon grandiflorum on liver and serum of obese mice under a high-fat diet. Nutrients. 9 (1), 71 (2017).
  6. Qi, C., et al. Platycodon grandiflorus polysaccharide with anti-apoptosis, anti-oxidant and anti-inflammatory activity against LPS/D-GalN induced acute liver injury in mice. Journal of Polymers and the Environment. 29 (12), 4088-4097 (2021).
  7. Choi, J. H., et al. Saponins from the roots of Platycodon grandiflorum ameliorate high fat diet-induced non-alcoholic steatohepatitis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 86, 205-212 (2017).
  8. Choi, Y. J., et al. Platycodin D enhances LDLR expression and LDL uptake via down-regulation of IDOL mRNA in hepatic cells. Scientific Reports. 10, 19834 (2020).
  9. Li, T., et al. Platycodin D triggers autophagy through activation of extracellular signal-regulated kinase in hepatocellular carcinoma HepG2 cells. European Journal of Pharmacology. 749, 81-88 (2015).
  10. Lu, J. -. J., et al. Proteomic analysis of hepatocellular carcinoma HepG2 cells treated with platycodin D. Chinese Journal of Natural Medicines. 13 (9), 673-679 (2015).
  11. Neuschwander-Tetri, B. A. Therapeutic landscape for NAFLD in 2020. Gastroenterology. 158 (7), 1984-1998 (2020).
  12. Friedman, S. L., Neuschwander-Tetri, B. A., Rinella, M., Sanyal, A. J. Mechanisms of NAFLD development and therapeutic strategies. Nature Medicine. 24 (7), 908-922 (2018).
  13. Bessone, F., Razori, M. V., Roma, M. G. Molecular pathways of nonalcoholic fatty liver disease development and progression. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (1), 99-128 (2019).
  14. Buzzetti, E., Pinzani, M., Tsochatzis, E. A. The multiple-hit pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Metabolism. 65 (8), 1038-1048 (2016).
  15. Watt, M. J., Miotto, P. M., De Nardo, W., Montgomery, M. K. The liver as an endocrine organ-Linking NAFLD and insulin resistance. Endocrine Reviews. 40 (5), 1367-1393 (2019).
  16. Khan, R. S., Bril, F., Cusi, K., Newsome, P. N. Modulation of insulin resistance in nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology. 70 (2), 711-724 (2019).
  17. Karkucinska-Wieckowska, A., et al. Mitochondria, oxidative stress and nonalcoholic fatty liver disease: A complex relationship. European Journal of Clinical Investigation. 52 (3), 13622 (2022).
  18. Tilg, H., Adolph, T. E., Dudek, M., Knolle, P. Non-alcoholic fatty liver disease: The interplay between metabolism, microbes and immunity. Nature Metabolism. 3 (12), 1596-1607 (2021).
  19. Qian, H., et al. Autophagy in liver diseases: A review. Molecular Aspects of Medicine. 82, 100973 (2021).
  20. Du, J., Ji, Y., Qiao, L., Liu, Y., Lin, J. Cellular endo-lysosomal dysfunction in the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease. Liver International. 40 (2), 271-280 (2020).
  21. Allaire, M., Rautou, P. E., Codogno, P., Lotersztajn, S. Autophagy in liver diseases: Time for translation. Journal of Hepatology. 70 (5), 985-998 (2019).
  22. Kanuri, G., Bergheim, I. In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11963-11980 (2013).
  23. Lau, J. K., Zhang, X., Yu, J. Animal models of non-alcoholic fatty liver disease: Current perspectives and recent advances. The Journal of Pathology. 241 (1), 36-44 (2017).
  24. Reimer, K. C., Wree, A., Roderburg, C., Tacke, F. New drugs for NAFLD: Lessons from basic models to the clinic. Hepatology International. 14 (1), 8-23 (2020).
  25. Carpino, G., et al. Increased liver localization of lipopolysaccharides in human and experimental NAFLD. Hepatology. 72 (2), 470-485 (2020).
  26. Vergani, L. Fatty acids and effects on in vitro and in vivo models of liver steatosis. Current Medicinal Chemistry. 26 (19), 3439-3456 (2019).
  27. Scorletti, E., Carr, R. M. A new perspective on NAFLD: Focusing on lipid droplets. Journal of Hepatology. 76 (4), 934-945 (2022).
  28. Green, C. J., Pramfalk, C., Morten, K. J., Hodson, L. From whole body to cellular models of hepatic triglyceride metabolism: Man has got to know his limitations. American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (1), 1-20 (2015).
  29. Gambino, R., et al. Different serum free fatty acid profiles in NAFLD subjects and healthy controls after oral fat load. International Journal of Molecular Sciences. 17 (4), 479 (2016).
  30. Marra, F., Svegliati-Baroni, G. Lipotoxicity and the gut-liver axis in NASH pathogenesis. Journal of Hepatology. 68 (2), 280-295 (2018).
  31. Zhang, J., Zhang, H., Deng, X., Zhang, Y., Xu, K. Baicalin protects AML-12 cells from lipotoxicity via the suppression of ER stress and TXNIP/NLRP3 inflammasome activation. Chemico-Biological Interactions. 278, 189-196 (2017).
  32. Liang, Y., et al. γ-Linolenic acid prevents lipid metabolism disorder in palmitic acid-treated alpha mouse liver-12 cells by balancing autophagy and apoptosis via the LKB1-AMPK-mTOR pathway. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 69 (29), 8257-8267 (2021).
  33. Peng, Z., et al. Nobiletin alleviates palmitic acid-induced NLRP3 inflammasome activation in a sirtuin 1dependent manner in AML12 cells. Molecular Medicine Reports. 18 (6), 5815-5822 (2018).
  34. Xu, T., et al. Ferulic acid alleviates lipotoxicity-induced hepatocellular death through the SIRT1-regulated autophagy pathway and independently of AMPK and Akt in AML-12 hepatocytes. Nutrition & Metabolism. 18 (1), 13 (2021).
  35. Aranda, A., et al. Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) assay: A quantitative method for oxidative stress assessment of nanoparticle-treated cells. Toxicology in Vitro. 27 (2), 954-963 (2013).
  36. Eruslanov, E., Kusmartsev, S. Identification of ROS using oxidized DCFDA and flow-cytometry. Methods in Molecular Biology. 594, 57-72 (2010).
  37. Bankhead, P. . Analyzing Fluorescence Microscopy Images with ImageJ. , (2014).
  38. Wiesmann, V., et al. Review of free software tools for image analysis of fluorescence cell micrographs. Journal of Microscopy. 257 (1), 39-53 (2015).
  39. Lugli, E., Troiano, L., Cossarizza, A. Polychromatic analysis of mitochondrial membrane potential using JC-1. Current Protocols in Cytometry. , (2007).
  40. Sivandzade, F., Bhalerao, A., Cucullo, L. Analysis of the mitochondrial membrane potential using the cationic JC-1 dye as a sensitive fluorescent probe. Bio-protocol. 9 (1), 3128 (2019).
  41. Chazotte, B. Labeling mitochondria with JC-1. Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (9), (2011).
  42. Walker, J. M. The bicinchoninic acid (BCA) assay for protein quantitation. The Protein Protocols Handbook. , 11-15 (2009).
  43. Goldman, A., Ursitti, J. A., Mozdzanowski, J., Speicher, D. W. Electroblotting from polyacrylamide gels. Current Protocols in Protein Science. 82, 1-16 (2015).
  44. Mozdzanowski, J., Speicher, D. W. Proteins from polyacrylamide gels onto PVDF membranes. Current Research in Protein Chemistry. , 87 (2012).
  45. Taylor, S. C., Posch, A. The design of a quantitative western blot experiment. Biomed Research International. 2014, 361590 (2014).
  46. Motulsky, H. J. Graphpad Statistics Guide. Options for multiple t tests. Graphpad. , (2020).
  47. Poltorak, A. Cell death: All roads lead to mitochondria. Current Biology. 32 (16), 891-894 (2022).
  48. Dadsena, S., Jenner, A., García-Sáez, A. J. Mitochondrial outer membrane permeabilization at the single molecule level. Cellular and Molecular Life Sciences. 78 (8), 3777-3790 (2021).
  49. Green, D. R., Kroemer, G. The pathophysiology of mitochondrial cell death. Science. 305 (5684), 626-629 (2004).
  50. Lange, N. F., Radu, P., Dufour, J. F. Prevention of NAFLD-associated HCC: Role of lifestyle and chemoprevention. Journal of Hepatology. 75 (5), 1217-1227 (2021).
  51. Liu, X., Zhang, Y., Ma, C., Lin, J., Du, J. Alternate-day fasting alleviates high fat diet induced non-alcoholic fatty liver disease through controlling PPARalpha/Fgf21 signaling. Molecular Biology Reports. 49 (4), 3113-3122 (2022).
  52. Romero-Gomez, M., Zelber-Sagi, S., Trenell, M. Treatment of NAFLD with diet, physical activity and exercise. Journal of Hepatology. 67 (4), 829-846 (2017).
  53. Mizushima, N., Levine, B. Autophagy in human diseases. New England Journal of Medicine. 383 (16), 1564-1576 (2020).
  54. Cui, B., Yu, J. M. Autophagy: A new pathway for traditional Chinese medicine. Journal of Asian Natural Products Research. 20 (1), 14-26 (2018).
  55. Law, B. Y., et al. New potential pharmacological functions of Chinese herbal medicines via regulation of autophagy. Molecules. 21 (3), 359 (2016).
  56. Zhou, H., et al. Research progress in use of traditional Chinese medicine monomer for treatment of non-alcoholic fatty liver disease. European Journal of Pharmacology. 898, 173976 (2021).
  57. Zhang, L., Yao, Z., Ji, G. Herbal extracts and natural products in alleviating non-alcoholic fatty liver disease via activating autophagy. Frontiers in Pharmacology. 9, 1459 (2018).
  58. Zhang, X., et al. C-X-C motif chemokine 10 impairs autophagy and autolysosome formation in non-alcoholic steatohepatitis. Theranostics. 7 (11), 2822-2836 (2017).
  59. Li, C. X., et al. Allyl isothiocyanate ameliorates lipid accumulation and inflammation in nonalcoholic fatty liver disease via the Sirt1/AMPK and NF-kappaB signaling pathways. World Journal of Gastroenterology. 25 (34), 5120-5133 (2019).
  60. Li, S., et al. Sirtuin 3 acts as a negative regulator of autophagy dictating hepatocyte susceptibility to lipotoxicity. Hepatology. 66 (3), 936-952 (2017).
  61. Farrell, G. C., Teoh, N. C., McCuskey, R. S. Hepatic microcirculation in fatty liver disease. The Anatomical Record. 291 (6), 684-692 (2008).
  62. Milner, E., et al. Emerging three-dimensional hepatic models in relation to traditional two-dimensional in vitro assays for evaluating drug metabolism and hepatoxicity. Medicine in Drug Discovery. 8, 100060 (2020).
  63. Zhang, X., Jiang, T., Chen, D., Wang, Q., Zhang, L. W. Three-dimensional liver models: State of the art and their application for hepatotoxicity evaluation. Critical Reviews in Toxicology. 50 (4), 279-309 (2020).
  64. Bilson, J., Sethi, J. K., Byrne, C. D. Non-alcoholic fatty liver disease: A multi-system disease influenced by ageing and sex, and affected by adipose tissue and intestinal function. Proceedings of the Nutrition Society. 81 (2), 146-161 (2022).

Tags

AML-12 CellsNon-alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD)Platycodin DPalmitic AcidCell ModelIn VitroOxidative StressMitochondrial Membrane PotentialMicroscopy
check_url/kr/64816?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Wen, X., Wang, J., Fan, J., Chu, R., Chen, Y., Xing, Y., Li, N., Wang, G. Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model. J. Vis. Exp. (190), e64816, doi:10.3791/64816 (2022).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image