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생물학

머드 크랩의 난소 성숙을 증가시키는 눈썹 절제

Published: March 31, 2023
doi:
10.3791/65039
, , , , ,
1Higher Institution Centre of Excellence (HICoE), Institute of Tropical Aquaculture and Fisheries,Universiti Malaysia Terengganu, 2Centre for Chemical Biology,Universiti Sains Malaysia, 3Department of Aquaculture, Faculty of Fisheries,Kasetsart University, 4School of Biological Sciences,Universiti Sains Malaysia, 5International Research Center for Marine Biosciences, Ministry of Science and Technology,Shanghai Ocean University

Summary

마취된 암컷 게에 대해 두 가지 안구 절제 프로토콜(즉, 소작 및 수술 접근법)을 수행했습니다. 진흙 게의 눈썹 절제는 생존율을 감소시키지 않으면서 난소의 숙성을 앞당겼습니다.

Abstract

머드 크랩(Scylla spp.)은 인도-서태평양 지역에서 볼 수 있는 상업적으로 중요한 갑각류 종입니다. 배양 중에 난소 성숙의 유도는 성숙한 머드 크랩에 대한 소비자 수요를 충족시키고 종자 생산을 촉진하는 데 중요합니다. 눈썹 절제술은 진흙 게의 난소 성숙을 향상시키는 효과적인 도구입니다. 그러나 진흙 게의 눈웍 절제에 대한 표준 프로토콜은 없습니다. 이 연구에서는 소작(마취된 게의 눈줄기를 제거하기 위해 뜨거운 금속을 사용하는 것)과 수술(수술용 가위를 사용하여 눈줄기를 제거하는 것)의 두 가지 안자 절제 기술에 대해 설명합니다. 안자 절제 전에 성적으로 성숙한 여성(CW > 86mm)을 바닷물과 함께 얼음 주머니(-20°C)를 사용하여 마취했습니다. 수온이 4°C에 도달했을 때, 얼음 주머니를 물에서 제거하였다. 흐르는 바닷물(주위온도: 28°C)은 안쌥절제 직후 마취 회복을 위해 사용하였다. 사망률은 안구 절제 과정 중 또는 이후에 발생하지 않았습니다. 여기에 제시된 안대 절제 프로토콜은 진흙 게의 난소 성숙을 가속화했습니다.

Introduction

Scylla 속에 속하는 4 종의 머드 크랩 종은 모두 양식업에서 상업적으로 중요한 갑각류 종입니다 1,2. 진흙 게를 포함한 갑각류의 성장과 미숙 (아성체 또는 사춘기) 단계에서 성적으로 성숙한 (성체) 단계로의 전환은 오래되고 작은 외골격을 주기적으로 흘리는 탈피 과정을 통해 발생합니다. 갑각 너비(CW), chelipeds 및 복부 플랩 형태는 Scyll a spp.의 성적 성숙도를 결정하는 데 널리 사용됩니다. 3,4,5. 털갈이 과정은 다양한 호르몬의 작용에 의해 조절되며 엄청난 양의 에너지가 필요합니다6. 정상적인 털갈이 과정 외에도, 자발적으로 또는 외부 요인에 의해 유발 된 팔다리의 손실은 생존율에 영향을 미치지 않으면 서 게의 털갈이를 촉진합니다 7,8,9. 따라서 사지 자율절제술은 연질 껍질 머드 크랩 양식 산업 7,9에서 털갈이 유도에 일반적으로 사용됩니다.

일방적 또는 양측 눈썹 절제술은 생식선 성숙 및 종자 생산을 위해 민물 새우와 해양 새우에서 주로 인기가 있습니다10,11,12,13. 갑각류의 일반적인 안자 절제 기술은 다음을 포함한다: (i) 끈을 이용한 안자 기저부에서의 결찰14,15; (ii) 고온 집게 또는 전기 소작 장치(16)를 사용한 안자의 소작; (iii) 열린 상처를 남기기 위해 눈썹을 제거하거나 직접 꼬집는 단계(12); 및 (iv) 면도칼로 눈의 말단부를 절단한 후 절개를 통해 안자 내용물을 제거하는 단계(17). 눈썹 X 기관은 갑각류 고혈당 호르몬 (CHH), 털갈이 억제 호르몬 (MIH) 및 vitellogenes-inhibiting hormones (VIH)를 조절하기 때문에 갑각류의 중요한 내분비 기관입니다 6,18,19,20,21,22. 눈줄기 X-기관(또는 부비동 샘 복합체)은 신경펩티드 호르몬 계열에 속하는 성선 형성 억제 호르몬(VIH)이라고도 하는 생식선 억제 호르몬(GIH)을 합성하고 방출한다6. 편측성 또는 양측성 안켠 절제술은 GIH 합성을 감소시켜 자극 호르몬(즉, 생식선 자극 호르몬, GSH)의 우세와 갑각류의 난소 성숙 과정을 가속화한다23,24,25,26. 눈 줄기 절제 후 GIH의 영향이 없는 암컷 갑각류는 난소 발달에 에너지를 쏟는다27. 일방적인 안대 절제술은 갑각류의 난소 성숙을 유도하기에 충분하며11 새우와 게의 절제된 안자즙은 여러 번의 탈피 후에 재생될 수 있음이 밝혀졌다28. Scylla spp.에는 4개의 난소 발달 단계가 기록되어 있습니다: i) 미성숙(1기), ii) 조기 성숙(2기), iii) 미성숙(3단계), iv) 완전 성숙(4단계)29,30. 미성숙 난소 단계는 미성숙 여성에서 발견됩니다. 사춘기 털갈이와 짝짓기 후, 미성숙 난소는 발달을 시작하고 산란하기 전에 마침내 성숙 (4 단계)31.

눈썹 절제 프로토콜은 머드 크랩 어미의 발달과 종자 생산에 필수적입니다. 세계 식품 시장에서는 근육 함량이 높은 게보다는 완전히 성숙한 난소 (4 단계)를 가진 성숙한 머드 크랩이 소비자에 의해 선호되므로 큰 수컷보다 상업적 가치가 높습니다. 진흙 게의 눈썹 절제에 대한 완전한 프로토콜은 없습니다. 이 작업의 안자 절제 프로토콜은 완전히 마취된 게를 사용하여 스트레스를 최소화하고 게에 물린 사람의 신체적 부상을 최소화합니다. 이 프로토콜은 쉽고 비용 효율적입니다. 여기에서 우리는 생식선의 성숙을 유도할 수 있는 Scylla spp.의 안자 절제에 대한 프로토콜을 제시합니다. 두 가지 안자 절제 기술(소작 및 수술)을 테스트하고 암컷 진흙 게의 생식선 발달 속도를 기반으로 효율성을 비교했습니다.

Protocol

이 프로토콜은 말레이시아 실험동물과학협회(Laboratory Animal Science Association of Malaysia)에서 규정한 과학적 목적을 위한 동물 관리 및 사용에 대한 말레이시아 실행 강령을 따릅니다. 실험 샘플의 희생은 National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 8023, revised 1978)에 따라 수행되었다. 성적으로 미성숙한 암컷 머드 크랩(오렌지 머드 크랩 S. olivacea)은 말레이시아 ?…

Representative Results

생식선 성숙크림색의 흰색 난소 조직(미성숙 난소, 1기)은 안자 절제술을 수행하기 전에 해부된 암컷(n = 6)의 100%에서 발견되었습니다(그림 2). 눈썹 절제술을 받은 암컷 게(n=63; 소작 기법을 적용한 암컷 31마리, 수술 기법을 사용한 암컷 32마리)의 생식선 성숙률은 개별 사육 30일 후 안대 절제술을 받지 않은 암컷 게(n=31)에 비해 더 높았다(그림 3<…

Discussion

이 프로토콜은 머드 크랩 Scylla spp.의 안구 절제를 위해 개발되었으며 생식선 성숙을 유도하는 효율적인 방법으로 적용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 머드 크랩의 상업적 난소 성숙을 위해 쉽게 복제할 수 있으며 머드 크랩 종자 생산에서 잠복기(산란에서 다른 산란까지의 시간)를 줄이기 위해 구현할 수 있습니다.

갑각류(즉, 민물 새우, 해양 새우)의 눈썹 절제는 일반?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 연구는 말레이시아 테렝가누 대학교(Universiti Malaysia Terengganu)의 열대 양식 및 수산 연구소(Institute of Tropical Aquaculture and Fisheries)의 인증을 받은 말레이시아 HICoE(Higher Institution Centre of Excellence) 프로그램에 따라 말레이시아 교육부의 지원을 받았습니다(투표 번호 63933 및 투표 번호 56048). 우리는 Universiti Malaysia Terengganu 및 Sayap Jaya Sdn. Bhd. 민간 파트너십 연구 보조금 (Vot. No. 55377)을 통해 . Universiti Sains Malaysia에서 Khor Waiho 및 Hanafiah Fazhan에 이르는 겸임 학술 펠로우 직책도 인정됩니다.

Materials

Aeration tube  Ming Yu Three N/A aquarium and pet shop
Airstone Ming Yu Three N/A aquarium and pet shop
Autoclave machine HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION N/A MADE IN JAPAN
Bleaching powder (Hi-Chlon 70%) Nippon Soda Co.Ltd,Japan N/A N/A
Blow torch  MR D.I.Y. Group Berhad N/A N/A
Circular tank (32L) BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.  N/A N/A
Cotton hand gloves (thick)  MR D.I.Y. Group Berhad N/A N/A
Cotton towel MR D.I.Y. Group Berhad N/A N/A
Digital thermometer Hanna Instrument HI9814 Hanna Instruments GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814
Digital Vernier Caliper INSIZE Co., Ltd. N/A
Dissecting tray Hatcheri AKUATROP  N/A Research Center of Universiti Malaysia Terengganu
Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper Shopee Malaysia N/A N/A
Ethanol 70% Thermo Scientific Chemicals 033361.M1 Diluted to 70% using double distilled water
Fiberglass tank (1 ton) Hatcheri AKUATROP  N/A Research Center of Universiti Malaysia Terengganu
Fine sand N/A N/A collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu
First Aid Kits Watsons Malaysia N/A N/A
Flat head nickel steel metal rod (Screw driver) MR D.I.Y. Group Berhad N/A N/A
Formaldehyde Thermo Scientific Chemicals 119690010
Gas cylinder (butane gas) for blow  torch MR D.I.Y. Group Berhad N/A N/A
Gas lighter gun (long head) MR D.I.Y. Group Berhad N/A N/A
Glass beaker (100 mL)) Corning Life Sciences 1000-100
Ice bag  Watsons Malaysia N/A N/A
Perforated plastic baskets  Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd. N/A N/A
PVC pipe 15mm Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ) N/A N/A
Refractometer ATAGO CO.,LTD.
Refrigerator Sharp Corporation Japan N/A Chest Freezer SHARP 110L – SJC 118
Scoop net MR D.I.Y. Group Berhad N/A
Seawater Hatcheri AKUATROP  N/A Research Center of Universiti Malaysia Terengganu
Siphoning pipe MR D.I.Y. Group Berhad N/A N/A
Spray bottle Mr. DIY Sdn Bhd N/A N/A
Stainless surgical forceps  N/A N/A N/A
Stainless surgical scissors  N/A N/A N/A
Submersible water pump  AS N/A model: Astro 4000
Tincture of iodine solution  (Povidone Iodine) Farmasi Fajr Sdn Bhd N/A N/A
Tissue paper  N/A N/A
Transparent plastic aquarium Ming Yu Three N/A aquarium and pet shop
Waterproof table Hatcheri AKUATROP  N/A Research Center of Universiti Malaysia Terengganu
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References

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Keywords: Eyestalk AblationMud CrabOvarian MaturationStress MinimizationAnesthesiaCauterizationSurgical AblationOvarian Maturation Stages
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Asmat-Ullah, M., Rozaimi, R., Fazhan, H., Shu-Chien, A. C., Wang, Y., Waiho, K. Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs. J. Vis. Exp. (193), e65039, doi:10.3791/65039 (2023).
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