アレルギー性接触皮膚炎評価のためのマウス耳モデル

Summary

ここでは、1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNFB)によるマウス耳のアレルギー性接触皮膚炎の誘発方法と、アレルギー性接触皮膚炎の重症度を評価する方法について説明します。

Abstract

皮膚は人体の最初の防衛線であり、環境化学物質に最もさらされている臓器の1つです。アレルギー性接触皮膚炎(ACD)は、局所的な発疹、発赤、および皮膚病変として現れる一般的な皮膚疾患です。ACDの発生と発症は、遺伝的要因と環境要因の両方の影響を受けます。近年、多くの学者がACDの一連のモデルを構築していますが、これらのモデルの実験プロトコルはすべて異なるため、読者がそれらをうまく確立することは困難です。したがって、安定した効率的な動物モデルは、アトピー性皮膚炎の病態をさらに研究するために非常に重要です。本研究では、マウスの耳にACD様症状を誘発するための1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNFB)を用いたモデリング手法を詳述し、モデリング中に皮膚炎の重症度を評価するためのいくつかの方法について説明します。この実験プロトコルは、いくつかの実験でうまく適用されており、ACD研究の分野で一定の促進的役割を果たしています。

Introduction

アレルギー性接触皮膚炎(ACD)は、接触部位の湿疹様症状、中等症の場合は浮腫および紅斑、重症の場合は丘疹、びらん、滲出、さらには大規模な瘢痕を特徴とする一般的な皮膚疾患です¹。それは人口の最大20%に影響を及ぼし、あらゆる年齢の人々に影響を与える可能性があります²。ACDは、アレルゲンに繰り返し曝露された個人によく発生し、自宅や職場での1つ以上のアレルゲンに対する個人の免疫応答によって引き起こされる^{可能性があります3。}IV型遅延型過敏症は、ACD⁴における免疫応答の主なタイプと考えられている。アレルゲンに繰り返しさらされている皮膚の領域では、循環メモリーT細胞が大量に蓄積し、免疫および炎症反応を誘発します^3,5,6。この研究の目的は、ACDの発症における免疫学的および炎症反応のさらなる調査のための信頼できる実験室技術を提案することです。

ACDの発症は通常、化学物質への繰り返しの曝露によって引き起こされる接触過敏症によるものです。多くの研究者が、病気の発症をシミュレートするために、過去数十年にわたって、家妃マウス^7,8、モルモット^9,10、およびその他の動物でさまざまなACD動物モデルを開発しました。実験方法のほとんどは、腹部感作(誘導)と背中または耳たぶへの刺激の提供(刺激)の2つの段階で構成されています。一般的に使用される化学物質には、主に1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNFB)/ 1-クロロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNCB)^8,9,11、オキサゾロン12、ウルシオール¹³などがあります。その中で、DNFBとDNCBが最も広く使用されており、1958年10月に最初に報告されました¹⁰。ニッケル感作モデル¹⁴や光アレルギー性接触皮膚炎モデル¹⁵も多用される。

ACDモデルを構築するための実験的方法を提示する。この方法は、以前の研究に基づいて、複数の実験と比較して要約および最適化されています。他のACDモデルと比較して、このモデルには、小さな個人差、短い実験期間、少量の化学刺激など、いくつかの利点があります。さらに、この研究は、経済的であるだけでなく、遺伝子ノックアウトまたはトランスジェニックマウスの準備のためのより多くの選択肢があるマウスに適用できます¹⁶。また、耳の厚さの測定、炎症性滲出液の測定のためのエバンスブルー染料の使用など、実験でACDの進行状況を監視するために使用されるさまざまな方法についても説明します。このモデルは、マウスの耳、血液、脾臓、およびその他のサンプルを実験室で分析してACDの病因を調査できるだけでなく、特定のプロモーションの重要性を持つ新しい治療法の前臨床評価にも適用できます。

Protocol

マウスのすべてのケアと治療は、揚州大学の施設動物管理使用委員会によって確立されたガイドラインに従っており、プロジェクトライセンスSYXK(SU)2022-0044の下で施設動物管理および使用委員会によって承認されました。この研究では、6〜8週齢のBALB / cオスおよびメスマウスを使用しました。各グループは6匹のマウスで構成されていました( 材料表を参照)。ケージは、食物と水?…

Representative Results

DNFB刺激を繰り返すと、DNFB群のマウスの耳はACDに匹敵する明らかな臨床症状を示し、敏感な領域は発赤、乾燥、さらにはびらんや滲出の典型的な症状を示しました。しかし、純水の耳投与(対照群)または溶媒対照(ビヒクル群)は同様の症状を生じさせなかった(図4)。 一方、DNFB群では、未治療の右耳と比較して、DNFB刺激後に左耳の厚さが有意に増加し…

Discussion

マウスの耳にACD様症状を誘発するためのここで説明するプロトコルは、ACDの病態生理学を研究するため、および新薬開発のためのスクリーニングツールとして使用できます。

ACDモデルを確立するには、初期感作とその後の刺激の2つの重要なステップがあります。腹部は通常、最初の感作部位であるが、その後の刺激部位はわずかに異なって選択された。以前の研究では?…

Materials

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)	Merck	200-734-3	1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone	Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD	10000418	≥99.5%
Aluminum foil	Cleanwrap	CF-2
Evans blue dye	Solarbio	314-13-6	Dye content approx. 80%
Mouse fixator	ZHUYANBANG	GEGD-SM1830
Olive oil	Solarbio	8001-25-0	500 ml
Pipet tip	Biofount	FT-200	10 – 200 μl
Pipettor	Eppendorf AG	3123000250	20 – 200 μl
Razor blade	Shanghai Gillette Co. LTD	74-S
Vernier calipers	Delixi Electric	DECHOTVCS1200