Модель уха мыши для оценки аллергического контактного дерматита

Summary

Здесь мы описываем методы индуцирования аллергического контактного дерматита в ушах мышей 1-фтор-2,4-динитробензолом (DNFB) и способы оценки тяжести аллергического контактного дерматита.

Abstract

Кожа является первой линией защиты человеческого организма и одним из органов, наиболее подверженных воздействию химических веществ окружающей среды. Аллергический контактный дерматит (АКД) является распространенным кожным заболеванием, которое проявляется в виде местной сыпи, покраснения и поражений кожи. На возникновение и развитие АКД влияют как генетические факторы, так и факторы окружающей среды. Хотя в последние годы многие ученые построили серию моделей АКД, экспериментальные протоколы всех этих моделей различны, что затрудняет читателям их установление. Поэтому стабильная и эффективная животная модель имеет большое значение для дальнейшего изучения патогенеза атопического дерматита. В этом исследовании мы подробно описываем метод моделирования с использованием 1-фтор-2,4-динитробензола (DNFB) для индуцирования ACD-подобных симптомов в ушах мышей и описываем несколько методов оценки тяжести дерматита во время моделирования. Этот экспериментальный протокол был успешно применен в некоторых экспериментах и играет определенную рекламную роль в области исследований ACD.

Introduction

Аллергический контактный дерматит (АКД) является распространенным кожным заболеванием, которое характеризуется экземоподобными симптомами в месте контакта, отеком и эритемой в умеренных случаях, а также папулами, эрозиями, экссудацией или даже массивными рубцами в тяжелых случаях¹. Он поражает до 20% населения и может поражать людей любого возраста². ACD часто возникает у людей, которые неоднократно подвергались воздействию аллергенов, и может быть вызван иммунным ответом человека на один или несколько аллергенов в их доме или на рабочем месте³. Отсроченная гиперчувствительность IV типа считается основным типом иммунного ответа при ACD⁴. На участках кожи, которые неоднократно подвергались воздействию аллергенов, циркулирующие Т-клетки памяти накапливаются в большом количестве и вызывают иммунные и воспалительные реакции ^3,5,6. Целью данной работы является предложение надежной лабораторной методики для дальнейшего исследования иммунологических и воспалительных реакций при развитии АКД.

Начало АКД обычно связано с контактной гиперчувствительностью, вызванной повторным воздействием химических веществ. В течение последних нескольких десятилетий многочисленные исследователи разработали различные модели животных ACD у домашних мышей^7,8, морских свинок ^9,10 и других животных^, чтобы имитировать начало заболевания. Большинство экспериментальных методов состоят из двух этапов: абдоминальная сенсибилизация (индукция) и обеспечение стимулов на спине или мочке уха (стимуляция). Обычно используемые химические вещества в основном включают 1-фтор-2,4-динитробензол (DNFB) / 1-хлор-2,4-динитробензол (DNCB) ^8,9,11, оксазолон 12^, урушиол ¹³ и т. Д. Среди них наиболее широко используются DNFB и DNCB, о которых впервые сообщалось в октябре 1958 года¹⁰. Также часто используются модель^{сенсибилизации никеля 14} и фотоаллергический контактный дерматит модели¹⁵.

Представлен экспериментальный метод построения модели ACD. Этот метод обобщен и оптимизирован на основе предыдущих исследований и после сравнения с несколькими экспериментами. По сравнению с другими моделями ACD эта модель имеет некоторые преимущества, такие как небольшие индивидуальные различия, короткие периоды эксперимента, небольшое количество химической стимуляции и т. д. Кроме того, это исследование применимо к мышам, которые не только экономичны, но и имеют больше возможностей для нокаута генов или подготовки трансгенных мышей¹⁶. Мы также описываем различные методы, используемые для мониторинга прогресса ACD в эксперименте, такие как измерение толщины уха, использование синего красителя Эванса для измерения воспалительной экссудации и т. д. Эта модель может не только анализировать мышиные уши, кровь, селезенку и другие образцы лабораторными средствами для изучения патогенеза АКД, но также применима для доклинической оценки новых терапевтических методов, что имеет определенное рекламное значение.

Protocol

Весь уход и лечение мышей осуществлялись в соответствии с руководящими принципами, установленными Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию Университета Янчжоу, и были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию в соответ…

Representative Results

При повторной стимуляции DNFB уши мыши в группе DNFB проявляли очевидные клинические симптомы, сравнимые с ACD, с чувствительными областями, демонстрирующими типичные симптомы покраснения, сухости и даже эрозии и экссудации. Однако введение чистой воды в ухо (контрольная группа) или контрол…

Discussion

Описанный здесь протокол для индуцирования ACD-подобных симптомов в ушах мышей может быть использован для изучения патофизиологии ACD и в качестве инструмента скрининга для разработки новых лекарств.

Существует два ключевых шага для создания модели ACD: начальная сенсибил?…

Materials

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)	Merck	200-734-3	1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone	Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD	10000418	≥99.5%
Aluminum foil	Cleanwrap	CF-2
Evans blue dye	Solarbio	314-13-6	Dye content approx. 80%
Mouse fixator	ZHUYANBANG	GEGD-SM1830
Olive oil	Solarbio	8001-25-0	500 ml
Pipet tip	Biofount	FT-200	10 – 200 μl
Pipettor	Eppendorf AG	3123000250	20 – 200 μl
Razor blade	Shanghai Gillette Co. LTD	74-S
Vernier calipers	Delixi Electric	DECHOTVCS1200