En musöra modell för allergisk kontaktdermatit utvärdering

Summary

Här beskriver vi metoderna för att inducera allergisk kontaktdermatit i musöron med 1-fluor-2,4-dinitrobensen (DNFB) och hur man utvärderar svårighetsgraden av allergisk kontaktdermatit.

Abstract

Huden är människokroppens första försvarslinje och ett av de mest utsatta organen för miljökemikalier. Allergisk kontaktdermatit (ACD) är en vanlig hudsjukdom som manifesterar sig som lokala utslag, rodnad och hudskador. Förekomsten och utvecklingen av ACD påverkas av både genetiska och miljömässiga faktorer. Även om många forskare har konstruerat en serie modeller av ACD de senaste åren, är de experimentella protokollen för dessa modeller alla olika, vilket gör det svårt för läsarna att fastställa dem väl. Därför är en stabil och effektiv djurmodell av stor betydelse för att vidare studera patogenesen av atopisk dermatit. I denna studie beskriver vi en modelleringsmetod med 1-fluor-2,4-dinitrobensen (DNFB) för att inducera ACD-liknande symtom i öronen hos möss och beskriver flera metoder för att bedöma svårighetsgraden av dermatit under modellering. Detta experimentella protokoll har framgångsrikt tillämpats i vissa experiment och har en viss marknadsföringsroll inom ACD-forskning.

Introduction

Allergisk kontaktdermatit (ACD) är en vanlig hudsjukdom som kännetecknas av eksemliknande symtom på kontaktstället, ödem och erytem i måttliga fall och papler, erosion, utsöndring eller till och med massiva ärr i svåra fall¹. Det påverkar upp till 20% av befolkningen och kan påverka människor i alla åldrar². ACD förekommer ofta hos individer som har utsatts för allergener upprepade gånger och kan orsakas av individens immunsvar mot ett eller flera allergener i sitt hem eller på arbetsplatsen³. Typ IV fördröjd överkänslighet anses vara den huvudsakliga typen av immunsvar i ACD⁴. I områden av huden som upprepade gånger har utsatts för allergener ackumuleras cirkulerande minnes-T-celler i stort antal och inducerar immun- och inflammatoriska svar ^3,5,6. Syftet med detta arbete är att föreslå en tillförlitlig laboratorieteknik för vidare undersökning av immunologiska och inflammatoriska reaktioner vid utveckling av ACD.

Uppkomsten av ACD beror vanligtvis på kontaktöverkänslighet orsakad av upprepad exponering för kemikalier. Många forskare har utvecklat olika ACD-djurmodeller i husmöss ^7,8, marsvin ^9,10 och andra djur under de senaste decennierna för att simulera sjukdomsuppkomsten. De flesta av de experimentella metoderna består av två steg: buksensibilisering (induktion) och ger stimuli på ryggen eller öronloben (stimulering). Vanliga kemiska ämnen innefattar huvudsakligen 1-fluor-2,4-dinitrobensen (DNFB)/1-klor-2,4-dinitrobensen (DNCB)^8,9,11, oxazolon 12, urushiol ^13, etc. Bland dem är DNFB och DNCB de mest använda, först rapporterade i oktober 1958¹⁰. Nickelsensibiliseringsmodell¹⁴ och fotoallergisk kontaktdermatit modell¹⁵ används också ofta.

Vi presenterar en experimentell metod för att bygga ACD-modellen. Denna metod sammanfattas och optimeras på grundval av tidigare studier och vid jämförelse med flera experiment. Jämfört med andra ACD-modeller har denna modell vissa fördelar, såsom små individuella skillnader, korta experimentperioder, en liten mängd kemisk stimulering etc. Dessutom är denna studie tillämplig på möss, som inte bara är ekonomiska utan också har fler alternativ för genknockout eller transgen mössberedning¹⁶. Vi beskriver också de olika metoder som används för att övervaka ACD-framsteg i experimentet, såsom att mäta örontjocklek, använda Evans blått färgämne för att mäta inflammatorisk utsöndring etc. Denna modell kan inte bara analysera musöron, blod, mjälte och andra prover med laboratoriemedel för att utforska patogenesen av ACD, men är också tillämplig för preklinisk utvärdering av nya terapeutiska metoder, vilket har en viss marknadsföringsbetydelse.

Protocol

All vård och behandling av mössen var i enlighet med de riktlinjer som fastställts av Institutional Animal Care and Use Committee vid Yangzhou University och godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee under projektlicensen SYXK(SU)2022-0044. BALB / c manliga och kvinnliga möss i åldern 6-8 veckor användes i denna studie. Varje grupp bestod av sex möss (se Materialförteckning). Burarna placerades i en temperaturkontrollerad kammare (22 ± 2 °C, 12 h ljus/mörk cykel) med fri tillg?…

Representative Results

Under upprepad DNFB-stimulering uppvisade musöronen i DNFB-gruppen tydliga kliniska symtom jämförbara med ACD, med känsliga områden som visar de typiska symtomen på rodnad, torrhet och till och med erosion och utsöndring. Öronadministrering av rent vatten (kontrollgrupp) eller lösningsmedelskontroll (vehikelgrupp) gav dock inte liknande symtom (figur 4). Under tiden, i DNFB-gruppen, jämfört med det obehandlade högra örat, ökade tjockleken på vänste…

Discussion

Protokollet som beskrivs här för att inducera ACD-liknande symtom i öronen på möss kan användas för att studera patofysiologin för ACD och som ett screeningverktyg för utveckling av nya läkemedel.

Det finns två viktiga steg för att upprätta en ACD-modell: initial sensibilisering och efterföljande stimulering. Magen är vanligtvis platsen för initial sensibilisering, men det efterföljande stimuleringsstället valdes något annorlunda. Tidigare studier har visat att de flesta for…

Materials

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)	Merck	200-734-3	1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone	Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD	10000418	≥99.5%
Aluminum foil	Cleanwrap	CF-2
Evans blue dye	Solarbio	314-13-6	Dye content approx. 80%
Mouse fixator	ZHUYANBANG	GEGD-SM1830
Olive oil	Solarbio	8001-25-0	500 ml
Pipet tip	Biofount	FT-200	10 – 200 μl
Pipettor	Eppendorf AG	3123000250	20 – 200 μl
Razor blade	Shanghai Gillette Co. LTD	74-S
Vernier calipers	Delixi Electric	DECHOTVCS1200