Summary
Il presente protocollo delinea un metodo per la creazione di un dispositivo basato su piattaforma a bilanciere economico utilizzato per indurre la privazione del sonno nei topi. Questo dispositivo si è dimostrato efficace nel causare interruzioni nei modelli di sonno evidenziati dall'elettroencefalogramma (EEG), oltre a indurre cambiamenti metabolici e molecolari associati alla privazione del sonno.
Abstract
L'interruzione del ritmo circadiano si riferisce alla desincronizzazione tra l'ambiente esterno o il comportamento e l'orologio molecolare endogeno, che compromette significativamente la salute. La privazione del sonno è una delle cause più comuni di interruzione del ritmo circadiano. Varie modalità (ad esempio, piattaforme sull'acqua, manipolazione delicata, camere a barre scorrevoli, tamburi rotanti, agitatori orbitali, ecc.) sono state segnalate per indurre la privazione del sonno nei topi per studiarne gli effetti sulla salute. L'attuale studio introduce un metodo alternativo per la privazione del sonno nei topi. È stato progettato un dispositivo automatizzato basato su piattaforma a bilanciere che è conveniente e interrompe in modo efficiente il sonno nei topi alloggiati in gruppo a intervalli di tempo regolabili. Questo dispositivo induce cambiamenti caratteristici della privazione del sonno con una risposta allo stress minima. Di conseguenza, questo metodo può rivelarsi utile per i ricercatori interessati a studiare gli effetti e i meccanismi alla base della privazione del sonno sulla patogenesi di molteplici malattie. Inoltre, offre una soluzione conveniente, in particolare quando è necessario che più dispositivi di privazione del sonno funzionino in parallelo.
Introduction
L'interruzione del ritmo circadiano si riferisce alla desincronizzazione tra l'ambiente esterno o il comportamento e l'orologio biologico endogeno. Una delle cause più comuni di interruzione del ritmo circadiano è la privazione del sonno1. La privazione del sonno non solo influisce negativamente sulla salute umana, ma aumenta anche significativamente il rischio di molte malattie, tra cui il cancro2 e le malattie cardiovascolari3. Tuttavia, i meccanismi alla base degli effetti dannosi della privazione del sonno rimangono in gran parte sconosciuti e stabilire modelli di privazione del sonno è essenziale per migliorare la nostra comprensione a questo proposito.
Sono stati riportati vari metodi per la privazione del sonno nei topi, come l'uso di piattaforme d'acqua4, manipolazione delicata5, camere a barre scorrevoli6, tamburi rotanti7 e protocolli di agitazione della gabbia 5,8,9. Le camere a barre scorrevoli spazzano automaticamente le barre sul fondo della gabbia, costringendo i topi a camminarci sopra e a rimanere svegli. I protocolli di agitazione delle gabbie prevedono il posizionamento di gabbie su agitatori orbitali da laboratorio, con conseguente efficiente interruzione del sonno. Sebbene questi metodi siano automatici ed efficaci, possono essere costosi quando è necessario che più dispositivi funzionino in parallelo, in particolare per progetti di studio specifici che coinvolgono un gran numero di topi privati del sonno necessari per la profilazione genica circadiana. D'altra parte, le piattaforme d'acqua e i protocolli di manipolazione delicata sono metodi più economici e semplici comunemente usati per indurre la privazione del sonno. Tuttavia, la piattaforma d'acqua non consente il controllo automatico dei cicli di privazione-riposo prespecificati10,11 e la manipolazione delicata richiede una vigilanza continua da parte dei ricercatori per disturbare il sonno. Inoltre, altre modalità, come i tamburi rotanti, possono essere confuse dall'isolamento sociale o dallo stress12.
Ispirandoci al metodo basato su shaker orbitale, miriamo a introdurre un protocollo per stabilire un dispositivo basato su piattaforma rocker per la privazione del sonno nei topi. Questo metodo è economico, efficace, minimamente stressante, controllabile e automatizzato. L'attuale protocollo ci consente di creare un dispositivo basato su piattaforma a bilanciere ad un costo circa dieci volte inferiore a quello degli agitatori orbitali, in base alla nostra accessibilità. Questo dispositivo ha interrotto efficacemente il sonno nei topi ospitati in gruppo e ha indotto cambiamenti caratteristici della privazione del sonno con una risposta allo stress minima. Sarà particolarmente utile per i ricercatori interessati a studiare gli effetti e i meccanismi alla base della privazione del sonno sulla patogenesi di più malattie, in particolare quando lo studio coinvolge la privazione del sonno in più gruppi in parallelo.
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Protocol
Tutti i protocolli sperimentali sugli animali in questo studio sono stati approvati dal Comitato Etico per il Benessere degli Animali da Laboratorio dell'Ospedale Renji, Facoltà di Medicina, Università Jiao Tong di Shanghai. Nello studio sono stati utilizzati topi maschi C57BL/6J, di età compresa tra 8 e 10 settimane. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Le parti principali necessarie per la creazione del dispositivo sono elencate nella Figura 1A.
1. Preparazione del dispositivo di privazione del sonno
- Fissare un'estremità di un canale in acciaio scanalato da 50 cm al centro di un canale in acciaio scanalato da 40 cm con viti (vedi Tabella dei materiali) per creare una struttura a forma di T; ripetere il processo e creare due strutture a forma di T (Figura 1B-a).
- Posizionare le due strutture a forma di T parallelamente verso l'alto a 30 cm di distanza l'una dall'altra e collegare la parte inferiore delle due strutture a forma di T con un cilindro in acciaio compatibile con viti da 30 cm (vedi Tabella dei materiali) utilizzando le viti (Figura 1B-b).
- Posizionare una piattaforma rettangolare in acciaio (20 × 25 cm) (vedi Tabella dei materiali) tra le due strutture a forma di T (Figura 1B-c).
NOTA: Se non sono disponibili piattaforme rettangolari in acciaio pronte all'uso delle dimensioni specificate, è possibile realizzarne una saldando acciai piatti di 2 mm di spessore. - Fissare ciascuna estremità di un cilindro in acciaio compatibile con viti da 30 cm fissato nella piattaforma a due cuscinetti fissati su ciascuna delle strutture a forma di T a 10 cm dall'alto (Figura 1B-d).
- Fissare un supporto motore (vedere la tabella dei materiali) su una delle strutture a forma di T a 25 cm dall'alto utilizzando le viti (Figura 1B-e).
NOTA: In alternativa, è possibile utilizzare un adesivo da costruzione per fissare il supporto del motore sulla struttura a forma di T al posto degli equipaggi. - Installare un motore (vedere la tabella dei materiali) sul supporto del motore con le viti (Figura 1B-f).
- Fissare una ventola di raffreddamento (vedere la tabella dei materiali) con fascette autobloccanti sulla struttura a forma di T sotto il motore (Figura 1B-g).
- Fissare l'estremità del cuscinetto di una biella all'angolo della piattaforma rivolto verso il motore utilizzando le viti (Figura 1B-h).
- Fissare un'altra estremità della biella all'albero del motore utilizzando le viti (Figura 1B-i).
- Praticare due fori da 4 mm a ciascuno dei quattro angoli di un contenitore di plastica o di una gabbia per animali standard (vedere la tabella dei materiali) utilizzando un trapano elettrico e praticare due fori da 4 mm e un foro inferiore da 6 mm sul lato sinistro della gabbia (Figura 1B-j).
- Fissare la gabbia sulla piattaforma rettangolare con fascette autobloccanti attraverso i fori angolari (Figura 1B-k).
- Praticare un foro di 5 mm nel tappo di una provetta da centrifuga da 50 ml con un trapano elettrico e tappare il foro con un ugello lungo dotato di valvola a sfera per evitare perdite d'acqua.
NOTA: L'idrogel sarebbe un'opzione alternativa per l'approvvigionamento idrico se la personalizzazione delle bottiglie d'acqua è difficile. - Fissare la borraccia personalizzata sul lato sinistro della gabbia utilizzando fascette autobloccanti attraverso i due fori da 4 mm, con l'ugello che passa attraverso il foro da 6 mm (Figura 1B-l).
- Collegare i cavi elettrici di uscita dell'adattatore di alimentazione ai due terminali del motore (Figura 1B-l).
NOTA: Non esiste un requisito di polarità specifico per il collegamento dei fili ai terminali del motore. - Collegare i cavi elettrici di ingresso dell'adattatore di alimentazione al contattore temporale (Figura 1B-m).
2. Induzione della privazione del sonno
- Premere i pulsanti con il segno più a destra rispettivamente sulle metà sinistra e destra del contattore di tempo (vedere la tabella dei materiali), finché non viene visualizzato "M" sui contatori meccanici su entrambi i lati (Figura 1C-a).
- Premere i pulsanti centrali con il segno più sulle metà sinistra e destra del contattore del tempo finché non viene visualizzato "5M" sui contatori meccanici su entrambi i lati (Figura 1C-b).
- Premere il pulsante con il segno più a sinistra sulla metà sinistra del contattore di tempo fino a quando non viene visualizzato "15M" sul contatore meccanico sinistro (Figura 1C-c).
NOTA: Il contattore temporale sarà quindi acceso per 15 minuti e spento per 5 minuti in modalità ciclica. - Metti i topi nella gabbia con acqua e cibo ad libitum.
- Alimentare il contattore temporizzato e la ventola di raffreddamento.
NOTA: La piattaforma ora oscillerà a 10 giri/min. - Pesare ogni topo all'ora di Zeitgeber 0 (ZT0) ogni giorno.
NOTA: La luce è accesa dalle 8 AM (ZT0) alle 8 PM (ZT12).
3. Test di tolleranza al glucosio orale
- Misurare i livelli di glucosio a digiuno nei topi a digiuno campionando il sangue dalle vene caudali.
- Iniettare la soluzione di glucosio in ciascun topo (2 g/kg di peso corporeo) per via intraperitoneale utilizzando siringhe da 1 ml.
- Raccogliere campioni di sangue attraverso la vena caudale e testare la glicemia rispettivamente a 15 minuti, 30 minuti, 60 minuti e 120 minuti dopo l'iniezione di glucosio.
- Rimetti i topi nella gabbia con il cibo e l'acqua ad libitum dopo il test.
4. Prelievo dei tessuti cerebrali
- Decapitare i topi dopo un'adeguata anestesia esponendoli all'isoflurano (2%) per 3-5 minuti.
- Esporre il cranio e praticare un taglio verticale di 1 cm in corrispondenza del cranio utilizzando le forbici chirurgiche.
- Rimuovere il cranio utilizzando emostatici per zanzare (vedi Tabella dei materiali) per esporre il tessuto cerebrale.
- Sposta delicatamente l'intero cervello fuori dalla cavità cranica usando una pinzetta curva.
NOTA: Il tessuto cerebrale deve essere rimosso secondo le politiche locali. - Lavare il tessuto cerebrale con soluzione salina tamponata con fosfato freddo (1x PBS, 4 °C).
- Congelare a scatto il tessuto cerebrale intatto in azoto liquido e trasferire il tessuto a -80 °C per la conservazione a lungo termine.
NOTA: Se conservato a -80°C, il tessuto cerebrale congelato è stabile per almeno 6 mesi.
5. Rilevamento dell'espressione genica mediante reazione a catena della polimerasi (PCR)
- Scongelare i tessuti cerebrali a 4 °C o su ghiaccio.
- Trasferire il tessuto in una provetta per microcentrifuga da 1,5 mL ed estrarre l'RNA totale utilizzando il metodo basato su TRIzol13.
- Misurare la concentrazione di RNA utilizzando uno spettrofotometro (vedi Tabella dei materiali) dopo l'estrazione dell'RNA.
- Eseguire la trascrizione inversa dell'RNA totale (1 μg) in DNA complementare (cDNA) utilizzando un kit commerciale14.
- Misurare i livelli di espressione genica mediante reazione a catena della polimerasi a trascrizione inversa in tempo reale15.
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Representative Results
Il dispositivo stabilito per la privazione del sonno nei topi è mostrato nella Figura 1D. Al giorno 7 dopo l'inizio della privazione del sonno, il monitoraggio dell'elettroencefalogramma (EEG) e dell'elettromiografia (EMG)16 ha indicato che il dispositivo ha ridotto significativamente la durata del sonno e aumentato la durata della veglia nei topi (Figura 2A-D). Nel frattempo, l'attuale protocollo ha aumentato significativamente l'accumulo di adenosina e i livelli di mRNA di Homer1a nel cervello (Figura 2E,F), che sono marcatori di successo della privazione del sonno17. Utilizzando un kit ELISA18, abbiamo osservato che i livelli sierici di corticosterone non sono stati modificati in modo significativo dall'attuale protocollo di privazione del sonno (Figura 2G). Dopo la privazione del sonno per 7 giorni, il peso corporeo e del timo è diminuito significativamente (Figura 3A-D), in linea con i rapporti precedenti19. Inoltre, la tolleranza al glucosio era significativamente compromessa nei topi dopo la privazione del sonno (Figura 3E,F). Per studiare i cambiamenti nell'espressione genica dell'orologio, i tessuti cerebrali sono stati raccolti ogni 4 ore per un giorno. Abbiamo osservato che i modelli di espressione dei geni dell'orologio nel cervello sono cambiati significativamente dopo la privazione del sonno (Figura 3G e Tabella 1), suggerendo un'interruzione dell'orologio molecolare20.
Figura 1: Realizzazione del dispositivo basato su piattaforma a bilanciere. (A) Illustrazioni raffiguranti le parti principali necessarie per l'assemblaggio del dispositivo basato su piattaforma a bilanciere. (B) Passaggi dettagliati che dimostrano l'assemblaggio del dispositivo di privazione del sonno. (C) Immagini che mostrano le impostazioni dei parametri nel contattore temporizzato. (D) Fotografia della camera di agitazione completamente assemblata. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: Valutazione dei disturbi del sonno e dei livelli sierici di corticosterone nei topi. (A) Diagramma schematico che illustra la registrazione EEG/EMG nei topi durante la privazione del sonno. (B) Registrazioni EEG/EMG rappresentative tracciate nei topi. (C) Forme d'onda EEG/EMG rappresentative nei topi durante la veglia, NREM e REM. (D) Percentuale della durata della veglia, della durata del NREM e della durata REM registrate nei topi con disturbi del sonno e nei topi di controllo (n = 4 topi/gruppo). *P < 0,05, ***P < 0,001. L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando un t-test spaiato. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; NREM, Movimento oculare non rapido; REM, Movimento rapido degli occhi; SD, gruppo di privazione del sonno. (E) livelli di mRNA di Homer1a nei tessuti cerebrali misurati in topi con disturbi del sonno e topi di controllo (n=4 topi/gruppo). *P < 0,05, l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando un test t spaiato. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; Homer1a, proteina 1a dell'impalcatura di Homer; SD, gruppo di privazione del sonno. (F) Contenuto di adenosina nel tessuto cerebrale misurato in topi con disturbi del sonno e topi di controllo (n=4 topi/gruppo) utilizzando un kit ELISA. *P < 0,05, l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando il test t spaiato in ogni punto temporale. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. (G) Concentrazione sierica di corticosterone misurata nei topi con disturbi del sonno e nei topi di controllo (n = 4 topi per punto/gruppo temporale). L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando l'analisi bidirezionale della varianza. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Cambiamenti fisiopatologici dopo la privazione del sonno nei topi. (A) Immagini rappresentative che mostrano le dimensioni dei topi nei gruppi indicati. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. (B) Variazioni del peso corporeo dopo l'inizio della privazione del sonno nei gruppi indicati (n = 24 topi per gruppo). **P < 0,001, l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando un test t spaiato. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. (C) Immagini rappresentative che mostrano le dimensioni del timo nei gruppi indicati. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. (D) Confronto dei rapporti tra il peso del timo e il peso corporeo tra i due gruppi (n = 24 topi per gruppo). **P < 0,001, l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando un test t spaiato. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. (E) Risultati del test di tolleranza al glucosio intraperitoneale nei gruppi indicati (n = 5 per gruppo). *P < 0,01; **P < 0,001, l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando un test t spaiato. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. (F) Confronto dell'area sotto la curva (AUC) del test di tolleranza al glucosio intraperitoneale tra il gruppo di privazione del sonno e il gruppo di controllo (n = 5 per gruppo). **P < 0,001, l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando un test t spaiato. Abbreviazioni: CTR, gruppo di controllo; SD, gruppo di privazione del sonno. (G) I modelli di espressione circadiana dei geni orologio (Bmal1, Dbp, Cry1, Cry2, Nr1d1, Nr1d2, Per1 e Per2) nei tessuti cerebrali sono stati misurati nel gruppo di privazione del sonno e nel gruppo di controllo (n = 4 topi per punto temporale/gruppo). I dati sono stati confrontati utilizzando la regressione del cosenore non lineare e le curve di espressione dei geni orologio sono state adattate utilizzando il pacchetto R CircaCompare. I valori P sono forniti come indicato. Abbreviazioni: A, ampiezza; Bmal1, cervello e muscolo Arnt-like 1; Cry1, regolatore circadiano del criptocromo 1; Cry2, regolatore circadiano del criptocromo 2; CTR, gruppo di controllo; Dbp, proteina legante il sito D; M, mesor; Nr1d1, sottofamiglia dei recettori nucleari 1 gruppo D membro 1; Nr1d2, sottofamiglia dei recettori nucleari 1 membro 2 del gruppo D; P, fase; Per1, regolatore circadiano del periodo 1; Per2, regolatore circadiano del periodo 2; SD, gruppo di privazione del sonno. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Geni dell'orologio | Bmal | Dbp (Dbp) | Grido1 | Cry2 | Nr1d1 | Nr1d2 | Per1 | Per2 | |
| Ritmicità | Controllo | P < 0,05 | P < 0,01 | P < 0,001 | P < 0,05 | P < 0,001 | P < 0,01 | P < 0,001 | P < 0,001 |
| Privazione del sonno | P < 0,05 | P < 0,001 | P < 0,001 | P < 0,001 | P < 0,001 | P < 0,001 | P < 0,001 | P < 0,001 | |
| Acrofase (tempo di Zeitgeber) | Controllo | 22 | 12 | 17 | 15 | 11 | 14 | 14 | 16 |
| Privazione del sonno | 10 | 24 | 4 | 3 | 22 | 0 | 1 | 1 | |
| Stima di Mesor | Controllo | 0.933 | 2.242 | 1.136 | 1.171 | 1.799 | 1.41 | 1.289 | 1.033 |
| Privazione del sonno | 0.826 | 2.101 | 1.094 | 1.155 | 1.756 | 1.399 | 0.999 | 0.888 | |
| Stima dell'ampiezza | Controllo | 0.099 | 0.746 | 0.305 | 0.131 | 0.494 | 0.314 | 0.294 | 0.341 |
| Privazione del sonno | 0.108 | 0.866 | 0.342 | 0.168 | 0.503 | 0.323 | 0.388 | 0.305 | |
Tabella 1: La presenza della ritmicità, la stima del mesor, la stima dell'ampiezza e l'acrofase per i geni orologio testati in ciascun gruppo.
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Discussion
I modelli murini di privazione del sonno sono essenziali per studiare gli effetti dell'interruzione del sonno su varie malattie, tra cui le malattie cardiovascolari21, le condizioni psichiatriche22 e i disturbi neurologici23. Tra le strategie di privazione del sonno esistenti nei topi, gli approcci fisici che comportano l'interruzione ripetitiva a breve termine del sonno sono i più comunemente usati 5,7,12. Questi approcci fisici includono l'uso di piattaforme d'acqua4, movimentazione delicata5, camere a barra scorrevole 6,24, tamburi rotanti7 o agitatori orbitali 8,9,25,26.
Per indurre efficacemente la privazione del sonno nei topi, i metodi ideali dovrebbero risvegliare i topi con uno stimolo non stressante. Il dispositivo scelto dovrebbe anche essere automatizzato e facilmente controllabile per regolare i cicli di privazione-riposo. Tra i metodi menzionati, la camera della barra scorrevole soddisfa la maggior parte di questi requisiti. Tuttavia, è costoso e occasionalmente può danneggiare i topi. Un altro metodo efficace e minimamente stressante è il protocollo 7,8,9,25 basato sull'agitatore orbitale, in cui una gabbia viene posizionata su un agitatore orbitale standard da laboratorio collegato a un regolatore del tempo, portando a ripetute interruzioni del sonno. Tuttavia, quando specifici disegni di studio richiedono il funzionamento di più agitatori orbitali in parallelo, il costo può diventare proibitivo per alcuni gruppi di ricerca.
Ispirato ai metodi dell'agitatore orbitale, l'attuale studio presenta un protocollo dettagliato passo dopo passo per la creazione di un'apparecchiatura per la privazione del sonno basata su piattaforma a bilanciere. Il suo costo è di circa un decimo di quello degli agitatori orbitali da laboratorio, il che lo rende più accessibile. Il dispositivo introdotto è stato convalidato per essere efficace nella privazione del sonno nei topi, come indicato dai dati di monitoraggio EEG/EMG che hanno mostrato una durata del sonno significativamente ridotta e un aumento dei marcatori di privazione del sonno. Inoltre, questo dispositivo basato su piattaforma a bilanciere non ha alterato in modo significativo i livelli sierici di corticosterone nei topi. Nel complesso, abbiamo introdotto un nuovo dispositivo automatizzato per la privazione del sonno che è economico, efficace, minimamente stressante e controllabile.
Nonostante i suoi vantaggi, il protocollo attuale presenta alcune limitazioni. In primo luogo, a differenza dei dispositivi pronti all'uso disponibili in commercio, il dispositivo di privazione del sonno qui introdotto richiede l'assemblaggio da parte degli sperimentatori. Tuttavia, sono stati forniti protocolli e illustrazioni dettagliati passo dopo passo per semplificare il processo. In secondo luogo, non tutti i materiali necessari per la creazione del dispositivo sono disponibili in commercio e potrebbe essere necessaria una certa personalizzazione dei materiali in base alle specifiche fornite in questo lavoro. In terzo luogo, le bottiglie d'acqua convenzionali utilizzate con la piattaforma a bilanciere possono presentare perdite, rendendo necessario l'uso di bottiglie d'acqua personalizzate per prevenire questo problema.
In conclusione, questo studio presenta un metodo economico ed efficiente per stabilire un dispositivo alternativo per indurre la privazione del sonno nei topi ospitati in gruppo. Questo protocollo può aiutare i ricercatori a studiare gli effetti e i meccanismi alla base della privazione del sonno su un'ampia gamma di condizioni di salute.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (82230014, 81930007, 82270342), dello Shanghai Outstanding Academic Leaders Program (18XD1402400), della Commissione per la scienza e la tecnologia della municipalità di Shanghai (22QA1405400, 201409005200, 20YF1426100), dello Shanghai Pujiang Talent Program (2020PJD030), SHWSRS(2023-62), dello Shanghai Clinical Research Center for Aging and Medicine (19MC1910500) e del programma di innovazione post-laurea del Bengbu Medical College (Byycxz21075).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C-S | |
| 50 mL centrifuge tube | NEST | 602002 | |
| Adenosine ELISA kit | Ruifan technology | RF8885 | |
| Animal cage | ZeYa tech | MJ2 | |
| Blood glucose meter | YuYue | 580 | |
| C57BL/6J Mice | JieSiJie Laboratory Animal | N/A | Age: 8-10 weeks |
| Connecting rod | ShengXiang Tech | N/A | Length: 20 cm |
| Cooling fan | LiMing | EFB0805VH | Supply voltage: 5 V; Power consumption: 1.2 W; Air flow: 26.92 cfm; Dimensions: 40 mm * 40 mm * 56 mm |
| Corticosterone ELISA kit | Elabscience | E-OSEL-M0001 | |
| EEG/EMG recording and analysis system | Pinnacle Technology | 8200-K1-iSE3 | |
| Isoflurane | RWD | 20071302 | |
| mosquito hemostats | FST | 13011-12 | Surgical instrument |
| Motor and motor mount | MingYang | MY36GP-555 | Supply voltage: 24 V dc; Shaft diameter: 8 mm; Maximum output torque: 100 Kgf.cm; Maximum output speed: 10 rpm |
| NanoDrop 2000c | Thermo Scientific | NanoDrop 2000c | |
| Power brick adapter | MingYang | QiYe-0243 | Input voltage: 110-220V ac; Output voltage: 24 V dc; Outputcurrent: 2 A; Cable length: 2 m |
| qPCR commercial kit | Vazyme | Q711-02 | |
| qPCR measurement equipment | Roche | 480 | |
| Rectangle platform attached with a screw-compatible steel cylinder | Customized | N/A | Width: 20 cm; length: 25 cm; length of the cylinder: 30 cm, thickness: 2 mm |
| Reverse RNA to cDNA commercial kit | Vazyme | R323-01 | |
| Screw and nut | Guwanji | N/A | Inner diameter: 6 mm, 12 mm |
| Screw-compatible steel cylinder | Customized | N/A | Length: 300 mm |
| Slotted steel channels | Customized | N/A | Length: 400 mm or 500 mm, thickness: 2 mm |
| Time contactor | LiXiang | DH48S-S | Supply voltage: 110-220 V ac; Units measured: hours, minutes, seconds; Contact configuration: DPDT |
| TRIzol | Vazyme | R401-01 |
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