Estratégias de Controle e Monitoramento Microbiano para Ambientes de Salas Limpas e Terapias Celulares
Summary
O protocolo resume as melhores práticas para minimizar a carga biológica microbiana em um ambiente de sala limpa e inclui estratégias como monitoramento ambiental, monitoramento de processo e teste de esterilidade do produto. É relevante para instalações de fabricação e teste que são necessárias para atender aos padrões atuais de boas práticas de tecidos e aos padrões atuais de boas práticas de fabricação.
Abstract
Um programa bem validado e holístico que incorpore medidas robustas de avental, limpeza, monitoramento ambiental e monitoramento de pessoal é fundamental para minimizar a carga biológica microbiana em suítes de fabricação de terapia celular e nos laboratórios de teste correspondentes para garantir que as instalações estejam operando em um estado de controle. Garantir a segurança do produto por meio de medidas de controle de qualidade, como testes de esterilidade, é um requisito regulatório tanto para células, tecidos e produtos à base de células celulares e tecidos (seção 361) minimamente manipulados (seção 361) e mais do que minimamente manipulados (seção 351) de células, tecidos e produtos à base de células e tecidos (HCT/Ps). Neste vídeo, fornecemos um guia passo a passo sobre como desenvolver e incorporar as melhores práticas assépticas para operar em um ambiente de sala limpa, incluindo avental, limpeza, estadiamento de materiais, monitoramento ambiental, monitoramento de processos e testes de esterilidade de produtos usando inoculação direta, fornecidos pela Farmacopeia dos Estados Unidos (USP) e pelo Método de Teste de Esterilidade Alternativa do National Institutes of Health (NIH). Este protocolo pretende ser um guia de referência para estabelecimentos que se espera que atendam às atuais boas práticas teciduais (cGTP) e boas práticas de fabricação atuais (cGMP).
Introduction
A implementação de um forte programa de monitoramento microbiano por meio de monitoramento ambiental (ME), monitoramento de processos e testes de esterilidade de produtos é um requisito regulatório para as atuais boas práticas teciduais (cGTP) e boas práticas de fabricação atuais (cGMP) em laboratórios de terapia celular1. Além disso, a Food and Drug Administration (FDA) dos Estados Unidos espera que o laboratório que realiza os testes de controle de qualidade (CQ) do produto também empregue instalações e controles comparáveis aos utilizados para operações de enchimento asséptico2.
Esse protocolo tem quatro seções principais: 1) Práticas assépticas, incluindo avental de pessoal, limpeza e preparação de materiais; 2) EM, incluindo culturas de ar e superfície viáveis e monitoramento do ar de partículas não viáveis; 3) monitoramento do processo, incluindo placas de assentamento e amostragem da ponta do dedo enluvado; e 4) teste de esterilidade do produto através do compêndio United States Pharmacopeia (USP) método3 ou do NIH Alternative Sterility Testing Method4. Quando usadas em conjunto, essas medidas podem ser um método eficaz para garantir que uma instalação permaneça em estado de controle.
As técnicas aqui descritas não são novas; No entanto, os padrões atuais de reguladores e organizações profissionais carecem de detalhes, o que tem levado à ausência de monitoramento microbiano ou à implementação de práticas não padronizadas, particularmente em centros acadêmicos onde a fabricação no local e os testes de esterilidade do produto estão surgindo em um ritmo rápido 1,5,6 . Esse protocolo pode ser usado como um guia para criar um programa de monitoramento e controle microbiano que atenda aos requisitos regulatórios quando usado em conjunto com a validação do usuário final e avaliações de risco.
Protocol
Representative Results
Discussion
Existem várias áreas críticas neste protocolo, incluindo a manutenção da técnica asséptica e do fluxo de ar unidirecional dentro de salas limpas e dos BSCs. As melhores práticas incluem mover-se lenta e deliberadamente para minimizar a turbulência. As manipulações assépticas devem ser realizadas do lado do produto, não de cima. Recomenda-se o processamento em sistema fechado e o uso de matérias-primas esterilizadas terminais. Falar em áreas críticas e encostar-se em paredes ou equipamentos deve ser evitad…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi apoiado pelo Programa de Pesquisa Intramuros do National Institutes of Health Clinical Center. O conteúdo é de responsabilidade exclusiva dos autores e não representa a opinião oficial do National Institutes of Health.
Materials
| 20-25°C Incubator | Lab preference | ||
| 30-35°C Incubator | Lab preference | ||
| Alcohol-based hand sanitizer | Lab preference | ||
| BacT/ALERT Dual-T instrument | BioMerieux Industry | ||
| Beard cover | Lab preference | ||
| Biosafety cabinet (BSC) | Lab preference | ||
| Cleanroom shoes | Lab preference | ||
| Fluidthioglycollate medium (FTM) | Hardy Diagnostics | U84 | USP |
| Handheld cleaning mop | Contec | 2665LF | |
| Hypodermic needle | Lab preference | ||
| iFA+ BacT/ALERT bottle | Biomerieux | 412990 | |
| iFN+ BacT/ALERT bottle | Biomerieux | 412991 | |
| Isokinetic head | Lab preference | ||
| Laser particle counter | TSI Incorporated | 9500-01 | |
| LpH III | Steris | 1S16CX | |
| Mirror | Lab preference | ||
| Non-sterile bouffant | Lab preference | ||
| Non-sterile gloves | Lab preference | ||
| Non-sterile shoe covers | Lab preference | ||
| Non-sterile sleeve covers | Lab preference | ||
| Parafilm | Lab preference | ||
| Peridox RTU | Contec | CR85335IR | |
| Plastic bag | Lab preference | ||
| Sabouraud Dextrose Agar with Lecithinase and Tween (SABLT) | Hardy Diagnostics | P595 | USP, irradiated |
| Sabouraurd Dextrose Agar (SAB) | Hardy Diagnostics | W565 | USP, irradiated |
| Safety glasses | Lab preference | ||
| Scrubs (top and bottom) | Lab preference | ||
| Spor-Klenx RTU | Steris | 6525M2 | |
| Sterile 70% isopropyl alcohol (IPA) | Decon CiDehol | 8316 | |
| Sterile alcohol wipe | Lab preference | ||
| Sterile boot covers | Kimberly Clark | Cat# varies based on size | |
| Sterile coveralls | Kimberly Clark | Cat# varies based on size | |
| Sterile face mask | Lab preference | ||
| Sterile gloves | Lab preference | ||
| Sterile hood | Kimberly Clark | Cat# varies based on size | |
| Sterile low-lint wipes | Texwipe | TX3210 | |
| Sterile mop cleaning pads | Contec | MEQT0002SZ | |
| Sterile sleeve covers | Kimberly Clark | 36077 | |
| Sterile spreading rod | Fisher Scientific | 14665231 | |
| Sterile syringe | Lab preference | ||
| Tacky mats | Lab preference | ||
| Tryptic Soy Agar (TSA) | Hardy Diagnostics | W570R | USP, irradiated |
| Tryptic Soy Agar with Lecithinase and Tween (TSALT) | Hardy Diagnostics | P520R | USP, irradiated |
| Tryptic Soy Broth (TSB) | Hardy Diagnostics | U46 | USP |
| Tubing | Lab preference | ||
| Vesphene III | Steris | 1S15CX | |
| Viable air sampler | Hardy Diagnostics | BAS22K | |
| Vortex | Lab preference |
References
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