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방법 논문

생체 내에서 마우스 뇌를 경두개로 자극하기 위해 밀리미터 크기의 코일과 결합된 저비용 뇌파 기록 시스템

4.2K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/65302

⸱

2023년 5월 26일

 ,  ,  , 

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

밀리미터 크기의 코일과 결합된 저비용 뇌파 기록 시스템은 생체 내에서 마우스 뇌의 경두개 자기 자극을 유도하기 위해 제안되었습니다. 맞춤형의 유연한 다중 전극 어레이 기판이 있는 기존의 나사 전극을 사용하여 경두개 자기 자극에 대한 반응으로 마우스 뇌에서 다중 부위 기록을 수행할 수 있습니다.

초록

밀리미터 크기의 코일을 사용하여 생체 내에서 마우스 뇌의 경두개 자기 자극(TMS)을 구동하기 위해 저비용 뇌파(EEG) 기록 시스템이 여기에서 제안됩니다. 맞춤형의 유연한 다중 전극 어레이 기판과 결합된 기존의 나사 전극을 사용하여 마우스 뇌에서 다중 부위 기록을 수행할 수 있습니다. 또한 실험실에서 흔히 볼 수 있는 저비용 장비를 사용하여 밀리미터 크기의 코일을 생산하는 방법을 설명합니다. 플렉서블 다중전극 어레이 기판을 제조하기 위한 실용적인 절차와 저잡음 EEG 신호를 생성하는 데 필요한 나사 전극의 외과적 주입 기술도 제시됩니다. 이 방법론은 작은 동물의 뇌에서 기록하는 데 유용하지만 현재 보고서는 마취된 마우스 두개골의 전극 구현에 중점을 둡니다. 또한, 이 방법은 공통 어댑터를 통해 테더링된 케이블로 연결되고 녹음 중에 TMS 장치로 머리에 고정되는 깨어 있는 작은 동물로 쉽게 확장할 수 있습니다. 최대 32개의 EEG 채널(예: 16개의 채널을 가진 장치가 더 적은 채널을 갖는 장치가 제시됨)과 하나의 TMS 채널 장치를 포함할 수 있는 EEG-TMS 시스템의 현재 버전에 대해 설명한다. 또한 마취된 마우스에 EEG-TMS 시스템을 적용하여 얻은 일반적인 결과가 간략하게 보고됩니다.

서론

경두개 자기 자극(TMS)은 비침습성/낮은 침습성으로 인해 인간 뇌 과학, 임상 응용 및 동물 모델 연구를 위한 유망한 도구입니다. TMS 적용의 초기 단계에서 인간과 동물의 단일 및 쌍 펄스 TMS에 대한 반응으로 피질 효과의 측정은 운동 피질로 제한되었습니다. 쉽게 측정할 수 있는 출력은 운동 피질 1,2를 포함하는 운동 유발 전위 및 유도 근전 전위로 제한되었습니다. TMS 변조로 측정할 수 있는 뇌 영역을 확장하기 위해 뇌파(EEG) 기록은 전체 뇌 영역에 걸쳐 영역의 흥분성, 연결성 및 시공간 역학을 직접 검사하는 유용한 방법으로 단일 및 쌍 펄스 TMS와 통합되었습니다 3,4,5. 따라서 뇌에 TMS 및 EEG 기록(TMS-EEG)을 동시에 적용하는 것은 피질 내 신경 회로를 조사하기 위해 인간과 동물의 다양한 표재성 피질 뇌 영역을 조사하는 데 사용되었습니다(Tremblay et al.6 참조). 또한, TMS-EEG 시스템은 다른 피질 영역으로의 신호 전파 및 진동 ....

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프로토콜

본 연구에서는 모든 동물실험을 국립보건원의 실험동물 관리 및 사용 가이드에 따라 홋카이도대학 기관동물관리이용위원회의 승인을 받아 실시하였다. 8 내지 10주령의 수컷 2마리와 암컷 3마리의 C57BL/6J 마우스를 본 연구에 사용하였다. 이것은 터미널 절차입니다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조).

1. 유연한 2차원 어레이 설계 및 구성

  1. EEG 기록 및 기준 전극으로 사용하기 위해 공칭 직경, 목 길이 및 헤드 직경이 각각 0.6mm, 1.5mm 및 1.1mm인 구조적 특성을 가진 필요한 수의 소형 나사 전극(스테인리스, SUS XM7, 재료 표 참조)을 준비합니다(그림 1A).
    참고: 본 연구에서는 16개의 소형 나사 전극이 사용되었습니다.
  2. 아래 단계에 따라 유연한 기판에 인쇄 회로도의 청사진을 준비합니다.
    1. 판독할 나사 전극을 위한 플렉서블 기판(전체 크기, 41.2mm × 19.9mm, 재료 표 참조)에 2차원(2D) 전극 패드 패턴을 만듭니다. 2D 전극 배열을 설계합니다.

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결과

나사 전극과 결합된 유연한 기판을 사용하여 마취된 C57BL/6J 마우스에서 기록된 샘플 EEG 데이터는 아래에 나와 있습니다.

전형적인 예로, 소리 자극(8kHz 톤 버스트, 80dB 음압 레벨[SPL])에 대한 응답으로 생성된 평균 EEG 파형이 동일한 자극을 가진 60번의 시도에 대해 표시됩니다(그림 4A). 기록 채널 매핑의 개략도도 도 4A의 중간에 제시되어 있다. Chs 5, 7, 10 및 12의 반응은 양쪽 측두엽의 청각 피질 근처 영역에서 기록됩니다. 청각 영역(하구(inferior colliculus) 및 청각 피질(auditory cortex) 주위에 위치한 채널의 개별 EEG 파형에서, 자극 아티팩트를 제외한 반응은 소리 자극 개시 직후에 먼저 음수로 진행되었습니다(예: Chs 3 및 10). 피크 진폭은 각각 45.6 ± 4.0 μV 및 25.6 ± 1.......

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토론

이 연구는 생쥐를 포함한 작은 동물을 위해 설계된 자기 자극 시스템과 결합된 다중 사이트 EEG 기록 시스템을 다룹니다. 구축된 시스템은 비용이 저렴하고 생리학 실험실에서 쉽게 구축할 수 있으며 기존 측정 설정을 확장할 수 있습니다. 마우스 기록 시스템에서 데이터를 얻는 데 필요한 수술 절차는 이러한 실험실이 표준 전기 생리학 실험에 대한 이전 경험이 있는 경우 매우 간단합니다.

이 접근법을 사용하는 한 가지 이점은 개별 동물의 머리와 두피에 전극을 배치할 때 재현성이 우수하다는 것입니다. 나사 전극을 뇌 표적 부위에 할당하는 데 사용되는 유연한 기판은 표준 미세 가공 기술을 사용하여 쉽게 복제되며, 동일한 기판은 각 동물의 두피에서 기록 부위를 결정하는 데에도 편리합니다. 또한, 전극 어레이의 형상은 다양한 실험 요구를 최적화하기 위해 쉽게 변형될 수 있습니다. 맞춤형 전극 배열은 특정 실험 목적을 위해 최적으로 생성될 수 있습니다. 프로토콜에 명시된 방법을 따를 경우 나사 전.......

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 무라타 과학 재단, 스즈켄 기념 재단, 나카타니 생물 의학 공학 측정 기술 발전 재단, 탐사 연구 보조금 (보조금 번호 21K19755, 일본) 및 과학 연구 (B) (보조금 번호 23H03416, 일본)의 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
3D 프린터Zhejiang Flashforge 3D Technology Co., LtdFFD-101도넛 모양의 디스크를 3D 프린팅하는 데 사용되는 프린터
ATROPINE SULFATE  0.5 mgNIPRO ES PHARMA CO., LTD.-아트로핀 황산염
바이폴라 증폭기NF Corp.KIT61380코일 입력의 파형 증폭용
ButorphanolMeiji Seika Pharma
Co., Ltd., Tokyo, Japan
-동물 분석용
플렉시블 2D 어레이p-ban.com Corp-URL: https://www.p-ban.com/
출력 신호를 분석하는 컴퓨터 프로그래옴Natinal InstrumentsNI-DAQ 및  NI-DAQmx Python: 홀 효과 센서의 출력 신호를 분석하기 위해
커넥터: Harwin Inc.G125-FV12005L0P측정 시스템에 연결하는 커넥터용
Copper padp-ban.com Corp.구리각 기판의 구리
패드 구리선Kyowa Harmonet Ltd.P644432코일
DAQ 보드Instruments Corp.USB-6343코일
치과용 시멘트SHOFU INC.빠른 수지자가 경화 교정 수지
ECoG 전극NeuroNexus Inc.HC32플렉시블 2D 어레이
에폭시 수지Konishi Co., Ltd.#16123코일 건설용
에틸 카바메이트FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp.050-05821요르단 마취용
플랫 리본 케이블오키 전기 케이블 주식회사FLEX-B2(20)-7/0.1 20028 5m표면 실장 커넥터와 측정 시스템 간 연결 케이블용
플렉시블 기판p-ban.com Corp.폴리이미드유연한 기판의 베이스 플레이트
Function generatorNF Corp.WF1947코일 입력
홀 이펙트 센서Honeywell International Inc.SS94A2D코일의 자속 밀도 측정용:
IDC 압착 공구Pro'sKit Industries Co.6PK-214IDC와 플랫 리본 케이블의 한쪽 끝을 압착합니다. 플랫 케이블 커넥터 압착 도구
인스턴트 접착제Konishi Co., Ltd.#04612코일 구조용
절연-변위 커넥터(IDC )Uxcell JapanB07GDDG3XG2 × 10 핀 및 1.27 mm 피치 
LCR 미터NF Corp.ZM2376코일
매니퓰레이터NARISHIGE GroupSM-15L코일
MedetomidineKobayashi Kako, Fukui, Japan-동물 마
MidazolamAstellas Pharma, Tokyo, Japan-동물 마취용
어처 스크류KOFUSEIBYO Co., Ltd.S0.6*1.5EEG 감지 및 기준 전극용
마우스일본 SLC, Inc.C57BL/6J  (C57BL/6JJmsSlc)실험동물
Permalloy-45 막대Nilaco Corp.780544코일
레코딩 시스템의Plexon Inc.OmniPlexEEG 데이터 수집용
스테인리스 와이어Wakisangyo Co., Ltd.HW-136매니퓰레이터
입체 장치NARISHIGE Group에SR-5M-HT마우스 헤드를 고정하려면
표면 실장 커넥터Useconn Electronics Ltd.PH127-2x10MG플렉시블 2D 어레이에 장착하는 커넥터용
테스트 장비(LCR 미터)NF Corp.ZM2372접촉 확인 및 임피던스 측정
백색 PLA 필라멘트Zhejiang Flashforge 3D Technology Co., LtdPLA-F13도넛 모양의 디스크
Xylocaine Jelly 2%Sandoz Pharma Co., Ltd.의-리도카인 염산염
.의 상업 제조업체.의 권선 National 의 자속 밀도 측정용의 설계와 관련하여에 대한 파형 생성용 의 AC 특성을 측정합니다.인용 미니 핵심인 의한 파악용. 3D 프린팅에 사용되는 재료

참고문헌

  1. Ilmoniemi, R. J., et al. Neuronal responses to magnetic stimulation reveal cortical reactivity and connectivity. Neuroreport. 8 (16), 3537-3540 (1997).
  2. Hallett, M. Transcranial magnetic stimulation: a primer. Neuron. 55 (2), 187-199 (2007).
  3. Thut....

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