Manipolazione del tuina per ridurre l'infiammazione e la perdita di cartilagine nei ratti affetti da osteoartrite del ginocchio

Summary

Presentiamo un protocollo per la manipolazione del Tuina eseguito su ratti affetti da osteoartrite del ginocchio indotta da gesso. Sulla base dei risultati preliminari, ha suggerito che l’efficacia del metodo si basava sulla riduzione dell’infiammazione e della perdita di cartilagine.

Abstract

Gli studi clinici suggeriscono che la manipolazione del Tuina è efficace nel trattamento dell’osteoartrite del ginocchio (KOA), mentre sono necessari ulteriori studi per scoprirne il meccanismo. Pertanto, la manipolazione di modelli animali di osteoartrosi del ginocchio è fondamentale. Questo protocollo fornisce un processo standard per la manipolazione di Tuina su ratti KOA e un’esplorazione preliminare del meccanismo di Tuina per KOA. Il metodo di manipolazione della pressione e dell’impastamento (un tipo di manipolazione Tuina che si riferisce alla pressione e all’impastamento dell’area specifica della superficie corporea) viene applicato su 5 agopunti intorno all’articolazione del ginocchio dei ratti. La forza e la frequenza della manipolazione sono state standardizzate mediante registrazioni della pressione delle dita e la posizione del ratto durante la manipolazione è descritta in dettaglio nel protocollo. L’effetto della manipolazione può essere misurato mediante test di comportamento al dolore e reperti microscopici nella sinovia e nella cartilagine. I ratti KOA hanno mostrato un miglioramento significativo nel comportamento del dolore. L’infiltrazione infiammatoria del tessuto sinoviale è stata ridotta nel gruppo Tuina e l’espressione del fattore di necrosi tumorale (TNF)-α è risultata significativamente inferiore. Rispetto al gruppo di controllo, l’apoptosi dei condrociti era inferiore nel gruppo Tuina. Questo studio fornisce un protocollo standardizzato per la manipolazione di Tuina su ratti KOA e la prova preliminare che gli effetti terapeutici di Tuina possono essere correlati alla riduzione dell’infiammazione sinoviale e all’apoptosi ritardata dei condrociti.

Introduction

L’artrosi del ginocchio (KOA) è una malattia degenerativa che si manifesta principalmente con dolori articolari. Fibrosi, screpolature, ulcerazioni e perdita di cartilagine articolare sono le cause principali di questa malattia¹. La KOA ha un’alta prevalenza e può avere un profondo impatto sulla vita quotidiana dei pazienti, causando disabilità nei casi più gravi. Tra le persone di età compresa tra 45 e 84 anni, la prevalenza di KOA aumenta con l’età e la prevalenza tra le persone di età pari o superiore a 85 anni è del 15%, con una predominanza nelle donne ^2,3. Inoltre, il KOA potrebbe comportare un grave onere economico sia per l’individuo che per la società. Un’indagine ha mostrato che i costi diretti dell’assistenza sanitaria su KOA pro capite hanno raggiunto fino a $ 8.858 ± $ 5.120 all’anno⁴. Con l’invecchiamento della società, il KOA è diventato un problema sanitario mondiale e un importante problema sociale, nonché un tema di attualità per la ricerca scientifica.

Studi basati sull’evidenza hanno dimostrato l’efficacia della manipolazione Tuina nel trattamento di KOA⁵. La manipolazione del tuina potrebbe alleviare il dolore e migliorare la disfunzione nei pazienti con KOA, il cui meccanismo è correlato agli effetti antinfiammatori ^6,7. Gli studiosi hanno scoperto che la manipolazione del Tuina ha inibito efficacemente l’espressione dei fattori infiammatori interleuchina (IL)-β e 5-idrossitriptamina e ha rallentato la degenerazione della cartilagine articolare in un modello^{KOA 8} di coniglio. Ha suggerito che Tuina potrebbe promuovere la circolazione sanguigna e il metabolismo nel sito della lesione, il che ha contribuito a eliminare i fattori infiammatori come IL-1, IL-6 e il fattore di necrosi tumorale (TNF)-α, alleviando così i sintomi clinici di KOA⁹. Inoltre, il movimento passivo dell’articolazione attraverso la manipolazione del Tuina può promuovere la penetrazione e la diffusione del liquido sinoviale nella cartilagine articolare e migliorare il metabolismo dei nutrienti tissutali¹⁰. Altri studi hanno suggerito che la manipolazione di Tuina può migliorare efficacemente gli indici biomeccanici nei pazienti con KOA¹¹. Le manipolazioni applicate sui tessuti molli possono migliorare la distribuzione dello stress sugli arti e migliorare la funzione di equilibrio^12,13. Allo stesso tempo, con alcune manipolazioni di regolazione articolare, anche l’allineamento degli arti inferiori può essere regolato per correggere andature anomale^14,15.

Il meccanismo d’azione della manipolazione Tuina nel trattamento della KOA rimane da esplorare, e quindi è necessario uno studio sperimentale. La chiave per l’applicazione del Tuina negli animali da esperimento è la standardizzazione della modellizzazione, della fissazione animale e dei metodi di intervento¹⁶. Il metodo di modellazione determina se l’animale da esperimento può presentare le caratteristiche della malattia. Nel frattempo, metodi di fissazione appropriati possono facilitare l’intervento della manipolazione del Tuina e riflettere meglio l’effetto del Tuina. La standardizzazione dei metodi di intervento è la parte più difficile della manipolazione Tuina. Nel 2010, il sistema di base degli standard cinesi di agopuntura ha menzionato gli standard dei punti di agopuntura per gli animali da esperimento, fornendo la possibilità di operazioni di agopuntura e Tuina negli esperimenti sugli animali¹⁷. Tuttavia, ci sono ancora difficoltà nella standardizzazione della manipolazione Tuina. Esistono diversi tipi di manipolazione Tuina¹⁸. La scelta della manipolazione specifica dipende principalmente dalla malattia da trattare e dalle teorie terapeutiche che l’esecutore preferisce. Nello studio di Tuina per KOA, è stata prestata maggiore attenzione alla manipolazione della pressione dei punti (premendo i punti di agopuntura specifici con il pollice o il gomito), alla manipolazione della spinta Yizhichan (una manipolazione della spinta muovendo il pollice) e alla manipolazione della pressione e dell’impastamento (che si riferisce alla pressione e all’impastamento dell’area specifica della superficie corporea con il dito o il palmo)¹⁹. La manipolazione della pressa e dell’impastamento è una delle manipolazioni Tuina più utilizzate, che combina la pressatura e l’impastamento per spostare il tessuto sottocutaneo²⁰. La manipolazione della pressa e dell’impastamento applicata sui punti di agopuntura può favorire la circolazione sanguigna e alleviare il dolore e rappresenta l’effetto terapeutico di Tuina su KOA¹⁹.

In questo protocollo, il funzionamento della manipolazione della pressa e dell’impastamento sui ratti KOA sarà descritto in dettaglio, compresi i punti di agopuntura selezionati, l’intensità e la frequenza della manipolazione e la posizione del corpo del ratto, in modo da fornire un riferimento per la ricerca futura.

Protocol

Questo studio ha superato la revisione dell’etica animale condotta dal comitato etico degli animali sperimentali dell’ospedale Yueyang di medicina tradizionale cinese e occidentale integrata affiliato all’Università di medicina tradizionale cinese di Shanghai (YYLAC-2022-166). 1. Preparazione e raggruppamento di animali da esperimento Preparazione degli animaliAllevare un totale di 10 ratti femmine sani SPF SD di 200-220 g a temperatura ambiente (18-21 °C),…

Representative Results

Test di comportamento al doloreI risultati dell’MWT hanno mostrato che l’MWT dell’arto posteriore destro dopo la modellazione era significativamente inferiore rispetto a prima (p<0,05). Rispetto al gruppo di controllo, il MWT dei ratti è stato significativamente elevato dopo Tuina (p<0,05; Figura 5 e Tabella 2). <img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65451/65451fi…

Discussion

Questo studio fornisce un protocollo per la manipolazione Tuina sui ratti KOA. Attraverso test di comportamento al dolore e risultati istomorfologici, ha suggerito che una tale serie di manipolazioni Tuina applicate ai ratti KOA potrebbe ridurre l’infiammazione sinoviale e l’apoptosi cartilaginea, che potrebbe essere un riferimento della manipolazione Tuina su modelli animali di KOA.

Ci sono diverse procedure critiche durante il protocollo. Innanzitutto, è importante scegliere un metodo appro…

Materials

absolute ethanol	Supelco	PHR1070	For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus	ahlborn	2450-1	For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody	Sigma-Aldrich	SAB4200669	For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta	abcam	ab283818	For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit	Solarbio	DA1010	For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials	Shanghai New Century	20000356	For model making
eosin	bioswamp	PAB180016	For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings	Suzhou Changxian Optoelectronic Technology	CX1003w	For Tuina manipulation
formic acid solution	Sigma-Aldrich	695076	For decalcification
H2O2	Sigma-Aldrich	386790-M	For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin	bioswamp	PAB180015	For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane	Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company	S10010533	For gas anesthesia
neutral resins	bioswamp	PAB180017	For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution	Sigma-Aldrich	100496	For histology
PBS	Sigma-Aldrich	P3813	For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus	IITC Life Science	/	For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage	WANDE	20150023	For model making
Proteinase K	Sigma-Aldrich	124568	For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody	Proteintech	60291-1-Ig	For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL	Servicebio	GDP1042	For HE stain IHC or TUNEL
Wax	Sigma-Aldrich	327204	For making specimen
xylene	Shanghai Sinopharm Group	100092	For making specimen