이 원고의 목적은 광견병 특이적 IgG 및 IgM 항체 검출을 위한 광견병 간접 형광 항체 검사의 사용을 조사하는 것입니다.
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이 논문에서
요약
초록
광견병 간접 형광 항체(IFA) 검사는 혈청 또는 뇌척수액에서 다양한 광견병 특이적 항체 동형을 검출하기 위해 개발되었습니다. 이 검사는 빠른 결과를 제공하며 여러 가지 시나리오에서 광견병 항체를 검출하는 데 사용할 수 있습니다. 광견병 IFA 검사는 광견병이 발병한 환자의 면역 반응을 평가하기 위한 항체를 빠르고 조기에 발견하는 데 특히 유용합니다. 광견병 사전 진단을 위한 다른 방법이 우선하지만, 이 검사는 항체 검출을 통해 최근의 광견병 바이러스 노출을 입증하는 데 활용될 수 있습니다. IFA 검사는 바이러스 중화 항체(VNA) 역가를 제공하지 않지만, 노출 전 예방(PrEP) 반응은 양성 또는 음성 항체 존재를 통해 평가할 수 있습니다. 이 테스트는 다양한 상황에서 활용될 수 있으며 다양한 대상에 대한 결과를 제공할 수 있습니다. 이 연구에서 우리는 PrEP를 투여받은 개인의 여러 쌍을 이루는 혈청 샘플을 사용하고 IFA 테스트를 사용하여 시간이 지남에 따라 광견병 항체의 존재를 입증했습니다.
서론
광견병 간접 형광 항체(IFA) 검사는 혈청 또는 뇌척수액에서 다양한 광견병 특이적 항체 동형을 검출하는 데 사용됩니다. 그것은 부검 전 광견병 환자를 모니터링하는 데 사용할 수 있는 다양한 검사 중 하나입니다. 광견병 감염에 대한 환자의 면역 반응을 평가하기 위해 항체를 조기에 발견하는 데 특히 유용합니다. 다른 검사, 증례 기록 및 환자의 백신 접종 상태와 함께 사용할 경우, IFA 검사는 광견병 바이러스 또는 백신에 대한 노출을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다1. IFA 검사는 IgM 및/또는 IgG를 측정하기 때문에 특정 항체의 값은 항원1에 노출된 시점의 대략적인 기간을 나타낼 수 있습니다. 이 테스트는 나열된 응용 프로그램이나 아직 탐색되지 않은 다른 응용 프로그램에서 유용할 수 있습니다.
몇 가지 광견병 혈청학적 분석이 있습니다. 신속 형광 초점 억제 검사(RFFIT), 형광 항체 바이러스 중화 검사(FAVN) 검사 또는 이들의 변형은 광견병 바이러스 중화 항체(RVNA)를 측정하는 주요 방법입니다1. 그러나 이러한 검사는 IgM 항체와 IgG 항체를 구별하지 않습니다. 광견병 면역 반응을 모니터링하....
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프로토콜
다음 프로토콜은 분석 개발을 위해 뉴욕주 보건부 워즈워스 센터(Wadsworth Center for assay development)에서 인체 샘플의 윤리적 사용을 승인했으며, 프로토콜 승인 번호 #03-019입니다.
1. 안전
- 개인 보호 장비(PPE), 최소한의 눈 보호 장비(안경 또는 안면 보호대), 수술용 마스크 및 비라텍스 장갑을 착용하십시오.
- 직원이 광견병 예방 접종을 받고 지난 6개월 이내에 ≥0.5IU/mL의 역가가 입증되었는지 확인합니다.
2. 항원 슬라이드 준비
알림: 모든 바이러스, CSF 및 혈청 조작은 범용 예방 조치를 사용하여 생물 안전 캐비닛(BSC)에서 수행합니다.
- 10% 소 태아 혈청(EGM)이 보충된 Eagle의 최소 필수 배지에 3.0 x 105 cells/mL 농도로 마우스 신경모세포종 또는 BHK-21 세포 20mL를 준비하고 사용할 때까지 차갑게 보관합니다.
- EGM에서 밀리리터당 1.0 x 106.5 50% 조직 배양 감염 선량....
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결과
모든 혈청 샘플은 PrEP 후 거의 동일한 시간대에 환자로부터 수집되었습니다. 샘플은 최종 광견병 백신 접종 후 2주, 광견병 백신 시리즈 후 6개월, 광견병 백신 시리즈 후 18개월의 시점에서 5명의 다른 환자로부터 테스트되었습니다. 각 혈청 샘플은 직렬로 희석하고 프로토콜 단계 5.2 및 5.3에 설명된 대로 IgM 및 IgG 존재 모두에 대해 등급을 매겼습니다. 할당된 항체 값은 샘플이 1-2+의 종말점 등급에 도달한 희석 계수를 나타냅니다.
PrEP 후 각 시점을 테스트한 결과는 다양한 수준의 항체 존재를 검출하는 분석의 능력을 보여줍니다. 초기 백신 접종 직후, 그림 1에서 볼 수 있듯이 환자 샘플에서 높은 수준의 IgM과 IgG가 모두 나타났습니다. 밝은 녹색 형광 세포 염색 영역은 양성 항체 존재를 나타냅니다. 적혈구는 어떤 항체도 결합할 수 없는 광견병 음성 세포입니다. 백신 접종 후 약 6개월이 지났을 때 환자.......
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토론
IFA 검사는 항원-항체 복합체를 이용하여 표지 부위에서 광견병 특이적 항체를 시각화할 수 있습니다. 신경모세포종 또는 BHK 세포를 멀티웰 PTFE 코팅 현미경 슬라이드에 파종하고 광견병 바이러스 실험실 균주 CVS-11을 접종합니다. 단층이 합류하고 세포가 약 50%의 원하는 감염도에 도달하면 슬라이드를 사용할 준비가 될 때까지 보관합니다6.
환자 혈청 또는 CSF를 감염된 세포 단층에 적용하고 광견병 특이적 항체가 바이러스 항원에 부착할 수 있도록 배양한다7. 세척 절차에 따라 형광 표지된 항인간 IgG 또는 IgM 항체를 적용하고 샘플 애플리케이션의 바이러스 결합 항체에 결합합니다. 표지된 항체는 형광 현미경으로 시각화할 수 있습니다.
이 분석을 수행할 준비를 할 때 환자 샘플, 대조군 및 접합체의 최상의 준비를 결정하는 것이 중요합니다........
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 프로젝트를 지원해 주신 뉴욕주 보건부 워즈워스 센터(Wadsworth Center)에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 25x55mm 유리 커버 슬립 | 모든 | ||
| 아세톤 | 모든 | ||
| 항인간 IgG 라벨 접합체 | 시그마-알드리치 | F9512 | |
| 항인간 IgM 라벨 접합체 | SeraCare | 5230-0286 | |
| 흡입 피펫 팁 | 모든 | ||
| BHK-21 셀 | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA 희석제 | MBL BION | DIL-9993 | |
| 세포 배양수 | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | FITC 필터가 있는 Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| 형광 현미경 | 모든 | ||
| 글리세롤 | Sigma-Aldrich | G7893 | 탑재 |
| Gullsorb IgM 불활성화 시약 | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG 불활성화 시약 |
| L-글루타민 | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| 최소 필수 미디어 독수리 – 얼과 함께' s 염, L-글루타민, 비필수 아미노산, 소듐 바이카보네이 | 없음 Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| 마우스 신경모세포종 세포 | ATCC | CCL-131 | |
| 멀티웰 PTFE 코팅 유리 슬라이드 | 모든 | ||
| PBS | 모든 | pH 7.6 | |
| 페니실린 | 시그마 | P-3032 | EGM |
| 광견병 직접 형광 항체 접합체 | 밀리포어 시그마 | 5100, 5500, 6500, RU5100 또는 RU5500 | |
| 중탄산나트륨 | 시그마-알드리치 | S-5761 | EGM |
| 염화나트륨 결정 | 시그마-알드리치 | S5886 | 장착제 |
| 멸균 스포이드 | |||
| 스트렙토마이신 설페이트 염 | 시그마 | S9137 | EGM |
| Trizma 사전 설정 결정 pH 9.0 | 시그마-알드리치 | S9693 | 마운트턴트 |
| 트립토스 인산염 육수 BD | 260300 | EGM | |
| 비타민 믹스 | 시그마-알드리치 | M6895 | EGM |
참고문헌
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , Geneva. 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516(2021).
- Zajac, M. D.
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재인쇄 및 허가
