चूहे के मॉडल में रक्त के नमूने के लिए संशोधित पूंछ नस और पेनाइल नस पंचर
Summary
यहां, हम चूहे के मॉडल के लिए तेजी से, आसान और विश्वसनीय रक्त संग्रह विकल्प प्रदान करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। हम संदर्भ के अनुसार तीन अलग-अलग रक्त नमूना विधियों का वर्णन करते हैं: संज्ञाहरण के तहत या एक सचेत जानवर पर पूंछ की नस पंचर, और संज्ञाहरण के तहत पृष्ठीय शिश्न नस पंचर।
Abstract
विभिन्न हेमेटोलॉजिकल मापदंडों का आकलन करने के लिए अधिकांश प्रयोगात्मक पशु डिजाइनों में रक्त के नमूनों की आवश्यकता होती है। यह पेपर चूहों में रक्त संग्रह के लिए दो प्रक्रियाओं को प्रस्तुत करता है: पार्श्व पूंछ की नस पंचर और पृष्ठीय पेनाइल नस पंचर, जो पहले से वर्णित अन्य तकनीकों पर महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करते हैं। इस अध्ययन से पता चलता है कि ये दो प्रक्रियाएं तेजी से नमूने (10 मिनट से कम) की अनुमति देती हैं और अधिकांश परखों (202 μL ± 67.7 μL) के लिए पर्याप्त रक्त की मात्रा उत्पन्न करती हैं। पृष्ठीय शिश्न नस पंचर को संज्ञाहरण के तहत किया जाना चाहिए, जबकि पार्श्व पूंछ की नस पंचर एक जागरूक, संयमित जानवर पर किया जा सकता है।
इसलिए, इन दो तकनीकों को बारी-बारी से, किसी भी स्थिति में रक्त खींचने में सक्षम बनाता है। जबकि पशु कल्याण सुनिश्चित करने के लिए एक प्रक्रिया के दौरान एक ऑपरेटर की सहायता करने की हमेशा सिफारिश की जाती है, इन तकनीकों को केवल एक ही ऑपरेटर की आवश्यकता होती है, अधिकांश रक्त नमूना करण विधियों के विपरीत जिन्हें दो की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, जबकि इन पहले वर्णित तरीकों (जैसे, जुगुलर स्टिक, सबक्लेवियन नस रक्त ड्रा) को जानवर को नुकसान या मृत्यु से बचने के लिए व्यापक पूर्व प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है, पूंछ की नस और पृष्ठीय शिश्न नस पंचर शायद ही कभी घातक होते हैं। इन सभी कारणों से, और संदर्भ के अनुसार (उदाहरण के लिए, नर चूहों सहित अध्ययन के लिए, पेरीओपरेटिव या तत्काल पोस्टऑपरेटिव अवधि के दौरान, पतली पूंछ नसों वाले जानवरों के लिए), दोनों तकनीकों का उपयोग बार-बार रक्त खींचने को सक्षम करने के लिए वैकल्पिक रूप से किया जा सकता है।
Introduction
विवो और इन विट्रो दोनों में अधिकांश जानवरों के अध्ययन के लिए रक्त का नमूना आवश्यक है। चूहों में, जैसा कि रक्त के नमूने की आवृत्ति और मात्रा महत्वपूर्ण हो सकती है, संग्रह के लिए विभिन्न विकल्प होना सहायक होता है। पिछले अध्ययनों में विभिन्न तरीकों का वर्णन किया गया है।
सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली तकनीकें पूंछ की नस पंचर और सफेनोस नस रक्त ड्रॉ हैं। पूंछ की नस का नमूना सभी चूहे उपभेदों के लिए उपयुक्त है। उचित प्रशिक्षण के साथ, प्रक्रिया प्रदर्शन करने के लिए सरल हैऔर पशु को न्यूनतम संकट का कारण बनती है। इसी तरह, सफेनोस नस रक्त ड्रा, बशर्ते इसे ठीक से किया जाए, भी एक त्वरित और सरल संग्रह विधि है। न तो विधि को संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है, और दोनों रक्त की छोटी मात्रा के बार-बार खींचने की अनुमति देते हैं। हालांकि, सैफेनोस नस पंचर आमतौर पर कम रक्त की मात्रा1 उत्पन्न करता है और पंचर2 के लिए एक हिंदलिम्ब को उजागर करने के लिए दो लोगों की उपस्थिति की आवश्यकता होती है।
यदि किसी एक जानवर से बड़ी मात्रा में रक्त एकत्र करने की आवश्यकता होती है, तो कार्डियक पंचर या वेना कावा के पंचर का उपयोग किया जा सकता है (कार्डियक पंचर2 के साथ 150 ग्राम चूहे से 10 एमएल तक रक्त निकाला जा सकता है)। इन तकनीकों को संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है और टर्मिनल प्रक्रियाएं हैं। इनदो तकनीकों में से किसी एक के बाद जानवर को इच्छामृत्यु दी जानी चाहिए। जुगुलर स्टिक एक विकल्प है जिसका उपयोग किया जा सकता है यदि किसी अध्ययन में बड़ी मात्रा में रक्त एकत्र करने की आवश्यकता होती है जो अभी तक अपने समापन बिंदु तक नहीं पहुंचा है। हालांकि, इस तकनीक को जानवर को नुकसान से बचने के लिए महत्वपूर्ण तकनीकी कौशल की भी आवश्यकता होती है; इसलिए, इसकाउपयोग सीमित होना चाहिए।
अन्य तकनीकें, जैसे कि सबक्लेवियन नस रक्त ड्रा, रक्त संग्रह से पहले एनेस्थेटिक्स के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है और रक्त की छोटी मात्रा के बार-बार नमूने की अनुमति देती है। हालांकि, इस तकनीक के लिए संयमित हैंडलिंग और उचित सुई चीरा की आवश्यकता होती है। एक अनुचित ऑपरेशन के परिणामस्वरूप जानवरों में दर्द या यहां तक कि मृत्यु दर भी हो सकती है, और इस विधि के लिए प्रशिक्षण तेज होसकता है।
अन्य उपाख्यानात्मक प्रक्रियाओं में कक्षीय पंचर और सबलिंगुअल नस पंचर शामिल हैं, जिनमें से दोनों को एनेस्थेटिक की आवश्यकता होती है, और न तो अनुशंसित और न ही व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। हालांकि पिछले अध्ययनों ने पूंछ की नस पंचर की तुलना में कक्षीय पंचर द्वारा तेजी से रक्त संग्रह दिखाया है, यह पाया गया कि डायथाइल-ईथर संज्ञाहरण के तहत कक्षीय पंचर बाद की विधि (जानवरों के उत्तेजना स्कोर और मूत्र उत्पादन के आधार पर) की तुलना में कम अच्छी तरह से सहन किया गया था। इसके अलावा, यह विधि उस व्यक्ति के कौशल से अत्यधिक प्रभावित होती है जो प्रक्रिया करता है और मुख्य रूप से अनुभवी पशु चिकित्सकों द्वारा किया जाता है। तुलनात्मक रूप से, सबलिंगुअल नस पंचर कम परेशान करने वाला है और बार-बार रक्त केनमूने के लिए अनुशंसित है। हालांकि, यह तकनीक कम भोजन और पानी का सेवन जैसे गंभीर प्रतिकूल प्रभाव प्रस्तुत करती है, जिससे जानवरकी मृत्यु हो सकती है।
यह अध्ययन बार-बार रक्त के नमूने के लिए हमारी प्रयोगशाला में उपयोग किए जाने वाले दो तरीकों का वर्णन करता है। पूंछ की नस पंचर एक जागरूक जानवर पर किया जा सकता है, और ऊतक क्षति और प्रतिकूल प्रभाव न्यूनतम हैं। इस अध्ययन में इस तकनीक के संशोधन में इंडेक्स और मध्य उंगली के साथ पूंछ को स्थिर करना शामिल है, जो एक एकल ऑपरेटर को रक्त संग्रह करने की अनुमति देता है। पृष्ठीय शिश्न शिरा पंचर पहले से ही सरल अंतःशिरा इंजेक्शन के लिए वर्णित किया गया है। यह तकनीक संज्ञाहरण के तहत की जाती है और अन्य तरीकों के साथ कठिनाइयों के मामले में एक विश्वसनीय रक्त स्रोत की अनुमति देती है (उदाहरण के लिए, तत्काल पोस्टऑपरेटिव अवधि के दौरान, एक छोटे जानवर के साथ, संज्ञाहरण के तहत पेरीओपरेटिव रक्त ड्रॉ करते समय)। पूंछ की नस के नमूने के समान, पंचर साइट पर चोट का ऊपर उल्लिखित तकनीकों की तुलना में जानवर पर मामूली समग्र प्रभावपड़ेगा। इस विधि पत्र का उद्देश्य अनुभवहीन शोधकर्ताओं को संदर्भ के अनुसार सरल और विश्वसनीय रक्त नमूना विकल्प प्रदान करना है (उदाहरण के लिए, संज्ञाहरण के तहत की गई प्रक्रियाओं के लिए, नर चूहों सहित अध्ययन के लिए, पतली पूंछ नसों वाले जानवरों के लिए)।
Protocol
Representative Results
Discussion
पूंछ की नस पंचर एक सचेत चूहे से रक्त प्राप्त करने के लिए एक कुशल तरीका है। हालांकि, जब कोई जानवर संज्ञाहरण के तहत होता है, तो आइसोफ्लुरेन के प्रभाव से वाहिका ऐंठन हो सकती है और पूंछ की नस पंचर अनुपयुक्त<sup c…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को श्रीनर्स चिल्ड्रन बोस्टन (बी.ई.यू., के.यू., सी.एल.सी.) द्वारा वित्त पोषित किया गया था। एल.सी. को “ला बोर्स डेस गुयूल्स कैसीज़”, “ला बोर्स एनी रेचरचे” और “ला बोर्स डी एल’एमिकल डेस एन्सिएन्स इंटर्न्स डेस होपिटक्स डी पेरिस” द्वारा वित्त पोषित किया जाता है। वाईबी को “ला बोर्स डेस गुयूल्स कैसीज़” द्वारा वित्त पोषित किया जाता है। वाई.बी. और आई.एफ.वी.आर. को बच्चों के लिए श्रीनर्स हॉस्पिटल्स द्वारा वित्त पोषित किया जाता है (फैलोशिप आईडी क्रमशः # 84308-बीओएस -22 # 84302-बीओएस -21 है)। यह सामग्री आंशिक रूप से राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन द्वारा अनुदान संख्या 2008 के तहत समर्थित कार्य पर आधारित है। ईईसी 1941543। यूएस नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (R01EB028782, R56AI171958 और R01DK114506) से आंशिक समर्थन कृतज्ञता से स्वीकार किया जाता है। चित्र 1 BioRender.com के साथ बनाया गया था।
Materials
| 0.5 mL | 28 G ½ Insulin Syringes | BD | 329424 | for tail vein puncture |
| 0.5 mL | 30 G x 5/16 Insulin Syringes | BD | 320468 | for penile vein puncture |
| 250 L Microtainer blood collection tubes with K2EDTA | BD | 365974 | |
| Gauze Sponges | Curity | 6939 | |
| Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine | E-Z Systems | EZ-190F | for penile vein puncture |
| Isoflurane, USP | Patterson Veterinary | 1403-704-06 | for penile vein puncture |
| Nosecone for Anesthesia | World Precision Instruments | EZ-112 | for penile vein puncture |
| Rodent Restraint Cone | Harvard Apparatus | ST2 52-95-86 | for tail vein puncture |
| Small Animal Heated Operating Table (Adjustable) | Peco Services Ltd | 69023 | |
| Webcol Alcohol prep pads | Simply Medical | 5110 |
References
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