Создание модели мышей ороназальной фистулы

Summary

В данной статье описана пошаговая процедура создания модели мышей с ороназальным свищом. Ороназальный свищ был создан путем использования горячего офтальмологического прижигания, чтобы повредить срединную часть твердого неба, что привело к образованию отверстия между ротовой и носовой полостями.

Abstract

В данном исследовании представлен метод, использующий офтальмологическое прижигание с подогревом для разработки жизнеспособной модели исследования ороназальных свищей. Мыши C57BL/6 были использованы для создания модели ороназальной фистулы (ONF). Для создания ОНФ мышей обезболивали, обездвиживали и обнажали их твердые нёба. Во время хирургического вмешательства было индуцировано повреждение слизистой оболочки на всю толщину 2,0 х 1,5 мм по средней линии твердого неба с помощью офтальмологического прижигания. Для обеспечения успеха эксперимента было крайне важно контролировать размер ОНФ и свести к минимуму кровотечение. Верификация эффективности модели ОНФ проводилась на 7-е сутки после операции, включая как анатомическую, так и функциональную оценку. Наличие носовой перегородки в полости рта и отток стерильной воды из ноздрей при инъекции в ротовую полость подтвердили успешное создание модели ОНФ. Модель продемонстрировала практичную и успешную ороназальную фистулу, характеризующуюся низким уровнем смертности, значительными изменениями массы тела и минимальными вариациями размера ОНФ. В будущих исследованиях может быть рассмотрен вопрос о применении этой методологии для выяснения механизмов заживления ран неба и изучения новых методов лечения ороназальных свищей.

Introduction

Ороназальный свищ (ОНФ), аномальное отверстие между полостью рта и носом, клинически проявляется как дефект в структурной области от альвеолярного отростка до язычка, который обычно возникает как осложнение после коррекции расщелины неба¹. У пациентов с ОНФ наблюдается пищевой рефлюкс, нарушения артикуляции и нарушения функции глоточной ки, что значительно влияет на качество их жизни ^2,3,4. Частота послеоперационного ОНФ колеблется от 2,4% до 55% из-за таких факторов, как ширина расщелины, тип Во и хирургический метод 5,6,7,8. Кроме того, частота рецидивов после операции ОНФ высока и колеблется от 0% до 43%⁹.

Несколько новых методов лечения в последнее время показали многообещающие результаты в области ОНФ, включая различные материалы, лекарства и новые методы 10,11,12,13,14,15,16,17. Точная оценка терапевтических эффектов имеет важное значение, поскольку она обеспечивает основу для выбора и дальнейшей разработки методов лечения ОНФ. Тем не менее, получение достоверной оценки в краткосрочной перспективе терапевтических эффектов, отличных от хирургического вмешательства, является сложной задачей, поскольку характеристики ОНФ различаются у разных пациентов. Таким образом, для проверки эффективности этих методов лечения необходимо создание модели заболевания ОНФ.

В течение нескольких десятилетий исследователи создавали модель ороназальной фистулы (ОНФ) у различных видов животных, включая крыс^18,19, поросят 20,21, минипигов²² и собак ^23, поскольку эти виды обладают значительным твердым нёбом, подходящим для хирургических манипуляций. Тем не менее, мыши имеют генетическую последовательность и весь геном, похожий на человеческий, что делает их важной моделью для исследования и разработки новых лекарств^24,25,26. Кроме того, мыши практически не отличаются от партии к партии, что делает их благоприятным выбором для создания модели ONF^12,13,27.

Однако детальные шаги по созданию ОНФ не были описаны, а стабильность размера ОНФ не была учтена. Кроме того, верификация образования ОНФ основывалась исключительно на наблюдении²⁸, без обеспечения прямой связи между ротовой и носовой полостями. Это не было продемонстрировано другими способами, такими как потеря мышью массы тела из-за трудностей с приемом пищи, вызванных ОНФ. Кроме того, не учитывалась нормальная вариабельность размера раны, что имеет решающее значение для исследований лекарств или материалов, которые способствуют или ингибируют заживление ран. Таким образом, существует острая необходимость в создании стабильной и валидированной модели ONF.

Цель данного исследования состояла в том, чтобы разработать практическую модель ОНФ, которая решает вышеупомянутые вопросы, с надеждой, что этот протокол послужит основой для будущих исследований механизмов заживления небных ран и новых методов лечения ОНФ.

Protocol

Все процедуры на животных в этом исследовании были рассмотрены и одобрены Этическим комитетом Западно-Китайской школы стоматологии Сычуаньского университета. Для настоящего исследования использовали взрослых мышей линии C57BL/6 (самок). 1. Хирургическая подготовка</stron…

Representative Results

Чтобы оценить осуществимость и стабильность этого экспериментального метода, та же процедура была проведена на десяти мышах, и были проведены наблюдения за смертностью, изменениями размера раны, массы тела и гистологическим анализом. Мышей усыпили на 7-й день. Процедура …

Discussion

Исследователи изучили различные материалы, лекарства и новые методы лечения ОНФ 10,11,12,13,14,15,16,17. Благодаря достижениям в области хирургическ?…

Materials

Germinator	Electron Microscopy Sciences	66118-20	Heating and disinfection equipment
Latex gloves	Allmed		or similar
Lights	Olympus	A1813
Meloxicam	MedChemExpress	HY-B0261	crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers)	Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.	M-Y-0087	Surgical instrument
Ophthalmologic cautery	Suqian Wenchong Medical Equipment Co.	1.00234E+13	Surgical instrument
Sterile cotton,	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Sterile metal foil	Biosharp		or similar
Sterile sheets	3M	XH003801129	or similar
Surgical drapes	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Syringes	Yancheng Begu Technology Co.	S-015301	or similar
Tape	Bkmamlab		or similar
Temperature maintenance device	Harvard Apparatus	LE-13-2104
Zoletil50	Virbac		80 mg/kg