यहां, एक डिजिटल इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री छवि विश्लेषण मंच विकसित किया गया था और आरोपण की खिड़की में आवर्तक गर्भपात वाले रोगियों के एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए मान्य किया गया था।
आवर्तक गर्भपात (आरएम) वाले रोगियों के एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा माइक्रोएन्वायरमेंट का मूल्यांकन करने के लिए, एक डिजिटल इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री छवि विश्लेषण मंच विकसित किया गया था और मध्य-ल्यूटियल चरण के दौरान एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए मान्य किया गया था। मासिक धर्म चक्र के मध्य-ल्यूटियल चरण के दौरान सभी एंडोमेट्रियम नमूने एकत्र किए गए थे। पैराफिन-एम्बेडेड एंडोमेट्रियल ऊतकों को 4 माइक्रोन मोटी स्लाइड में विभाजित किया गया था, और सीडी 56 + यूएनके कोशिकाओं, फॉक्सपी 3 + ट्रेग्स, सीडी 163 + एम 2 मैक्रोफेज, सीडी 1 ए + डीसी, और सीडी 8 + टी कोशिकाओं सहित एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं का पता लगाने के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) धुंधला हो गया था। पैनोरमिक स्लाइड्स को डिजिटल स्लाइड स्कैनर का उपयोग करके स्कैन किया गया था और मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक वाणिज्यिक छवि विश्लेषण प्रणाली का उपयोग किया गया था। एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं के प्रतिशत की गणना कुल एंडोमेट्रियल कोशिकाओं में प्रतिरक्षा कोशिकाओं की संख्या को विभाजित करके की गई थी। वाणिज्यिक छवि विश्लेषण प्रणाली का उपयोग करना, एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मात्रात्मक मूल्यांकन, जो पारंपरिक छवि विश्लेषण के साथ विश्लेषण करना मुश्किल या असंभव है, आसानी से और सटीक विश्लेषण किया जा सकता है। इस पद्धति को एंडोमेट्रियम माइक्रोएन्वायरमेंट को मात्रात्मक रूप से चिह्नित करने के लिए लागू किया जा सकता है, जिसमें प्रतिरक्षा कोशिकाओं के बीच बातचीत और विभिन्न प्रजनन विफलता रोगियों के लिए इसकी विषमता शामिल है। एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं के मात्रात्मक मूल्यांकन के लिए मंच आरएम रोगियों के निदान और उपचार के लिए महत्वपूर्ण नैदानिक महत्व का हो सकता है।
आवर्तक गर्भपात (आरएम) दो या दो से अधिक लगातार गर्भधारण का नुकसान है और हाल के वर्षों में चिकित्सकों का ध्यान आकर्षित करने वाली एक जटिल बीमारी है। प्रसव उम्र की महिलाओं में आरएम की घटना दर 1% -5% है 1. पिछले अध्ययनों के परिणाम बताते हैं कि प्रतिरक्षा कारक आरएम 2,3,4,5 के रोगजनन के साथ निकटता से जुड़े हुए हैं। भ्रूण आरोपण और विकास के लिए मातृ-भ्रूण इंटरफ़ेस पर प्रतिरक्षा होमियोस्टेसिस बनाए रखना आवश्यक है। एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाएं इस होमियोस्टैसिस को बनाए रखने के लिए कई नियामक भूमिकाएं करती हैं, जैसे कि ट्रोफोब्लास्ट आक्रमण को बढ़ावा देना, सर्पिल धमनियों को फिर से तैयार करना और प्लेसेंटा विकास 6,7,8,9 में योगदान देना।
आरएम के साथ महिलाओं में असामान्य एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं को पहले रिपोर्ट किया गया है। परिणाम गर्भाशय प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं (यूएनके) के उच्च घनत्व और आरएम10,11,12 की घटना के बीच घनिष्ठ संबंध दिखाते हैं। मैक्रोफेज की एक वृद्धि हुई संख्या आरएम के साथ महिलाओं के एंडोमेट्रियम में सूचित किया गया है, जो एक जीवित जन्मथा 13 की तुलना में. नियामक टी कोशिकाओं (Treg) भ्रूण की ओर मातृ प्रतिरक्षा सहिष्णुता में एक भूमिका निभाते हैं, और उनके स्तर और समारोह आरएम रोगियों14 के decidua में कमी आई है. साइटोटॉक्सिसिटी टी कोशिकाओं (सीटीएल) और वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) भी गर्भावस्था15,16 की प्रतिरक्षा विनियमन में एक भूमिका निभाते हैं. इसलिए, मध्य-ल्यूटियल चरण के दौरान स्थानीय एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं का एक व्यापक मात्रात्मक विश्लेषण आरएम के रोगजनन को बेहतर ढंग से समझने में मदद कर सकता है। एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं के मात्रात्मक विश्लेषण के लिए कुछ मौजूदा तरीकों प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करें जो कई मार्करों17,18 के साथ प्रतिरक्षा कोशिकाओं को सटीक रूप से लेबल कर सकते हैं। हालांकि, प्रवाह साइटोमेट्री का नैदानिक अनुप्रयोग सीमित है क्योंकि यह केवल ताजा ऊतक पर किया जा सकता है। ताजा ऊतक प्राप्त करना केवल तभी संभव है जब अतिरिक्त ट्यूमर की एक बड़ी मात्रा उपलब्ध हो, एंडोमेट्रियम के लिए एक दुर्लभ घटना। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री ऊतक आकृति विज्ञान को सीटू में अच्छी तरह से देख सकती है और विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिकाओं को भी लेबल कर सकती है, जबकि पारंपरिक इम्यूनोहिस्टोकेमिकल तकनीक प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मात्रात्मक विश्लेषण नहीं कर सकती है।
पारंपरिक इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री प्रयोगों की तुलना में, एंडोमेट्रियम में प्रतिरक्षा कोशिकाओं के मात्रात्मक इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण का महत्वपूर्ण नैदानिक महत्व है। आईएचसी तीव्रता स्कोरिंग आमतौर पर एक चार बिंदु पैमाने पर या मजबूत और पैथोलॉजिकल निदान और अनुसंधान 19,20,21 में कमजोर पर रैंक किया जाता है. हालांकि, इस अर्द्ध मात्रात्मक तकनीक व्यक्तिपरक, अत्यधिक गलत है, और महत्वपूर्ण इंट्रा पर्यवेक्षक और अंतर-पर्यवेक्षक परिवर्तनशीलता22 प्रदर्शित करता है. एक संभावित समाधान मशीन सीखने का अनुप्रयोग है, जो मूल्यवान हैडिजिटल छवि विश्लेषण23,24. मात्रात्मक माप प्रदान करके, यह दृष्टिकोण गर्भाशय के ऊतकों के भीतर प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ, वितरण और घनत्व का अधिक सटीक मूल्यांकन सक्षम बनाता है। यह मात्रात्मक जानकारी मासिक धर्म चक्र के दौरान और विभिन्न रोग स्थितियों में प्रतिरक्षा कोशिका आबादी में गतिशील परिवर्तनों को स्पष्ट करने में मदद कर सकती है। कुल मिलाकर, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के माध्यम से एंडोमेट्रियम में प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मात्रात्मक विश्लेषण करने की क्षमता गर्भाशय के प्रतिरक्षा माइक्रोएन्वायरमेंट में मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान करती है।
इसलिए, प्रोटोकॉल का उद्देश्य आरएम रोगियों में मध्य-ल्यूटियल चरण के दौरान यूएनके कोशिकाओं, ट्रेग्स, मैक्रोफेज, डीसी और साइटोटॉक्सिक टी कोशिकाओं सहित एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए एक डिजिटल इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री छवि विश्लेषण मंच को विकसित और मान्य करना है।
इस प्रोटोकॉल ने आरएम रोगियों के एंडोमेट्रियल प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए एक डिजिटल इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री छवि विश्लेषण मंच स्थापित किया। यहां, आरएम रोगियों में एंडोमे…
The authors have nothing to disclose.
लेखक उन सभी महिलाओं के आभारी हैं जिन्होंने इस अध्ययन के लिए सहमति दी और नमूने दान किए।
Automated coverslipper | Sakuraus | DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2 | |
CD163 | GrowGn Biotechnology | NCL-L-CD163 | |
CD1a | Gene Tech | GM357129 | |
CD56 | Gene Tech | GT200529 | |
CD8 | Novocastra | NCL-L-CD8-4B11 | |
Dehydrator | Thermo Fisher | Excelsior ES | |
Digital pathology and | Indica labs | HALO | |
Foxp3 | YILIFANG biological | 14-477-82 | |
IHC stainer | Leica | BOND III | |
Image analysis platform | Indica labs | HALO | |
Slide Scanner | Olympus life science | VS200 |