Det aktuella protokollet beskriver metoden för att analysera tarmfloran med hjälp av Illumina-baserad 16S rRNA-gensekvensering och ger ett ramverk för att utvärdera effektiviteten av växtbaserade avkok.
För att preliminärt undersöka effekterna av Desmodium caudatum på gastrit och tarmflora hos råttor etablerades en modell för kronisk gastrit hos råttor med hjälp av den klassiska natriumsalicylatmetoden. Arton SPF-råttor delades in i tre grupper: kontrollgruppen (grupp C), modellgruppen (grupp M) och behandlingsgruppen (grupp T). Patologiska snitt av magsäcksväggen togs från råttor i varje grupp. Dessutom bestämdes koncentrationerna av gastrin och malondialdehyd i serum hos råttor i varje grupp med ELISA. Dessutom undersöktes effekterna av D. caudatum på tarmfloran hos råttor med gastrit genom en detaljerad jämförelse av tarmbakteriesamhällen i de tre grupperna, med hjälp av Illumina-baserad 16S rRNA-gensekvensering. Resultaten indikerade att D. caudatum-avkok kunde minska malondialdehydhalten och öka gastrinhalten. Dessutom visade sig D. caudatum-avkok öka mångfalden och överflödet av tarmflora, vilket har en positiv inverkan på behandlingen av gastrit genom att reglera och återställa tarmfloran.
Kronisk gastrit (CG), en av de vanligaste kliniska sjukdomarna, kännetecknas av kroniska och ihållande inflammatoriska förändringar i magslemhinnans epitel, som ofta och upprepade gånger attackeras av olika patogena faktorer1. Incidensen av CG rankas först bland alla typer av magsjukdomar och står för 40 % till 60 % av öppenvårdsfrekvensen på avdelningen för gastroenterologi2. Dessutom ökar incidensen i allmänhet med åldern, särskilt hos individer som är medelålders och äldre3. Utan tvekan minskar CG avsevärt människors livskvalitet, vilket understryker det kritiska behovet av att upptäcka nya terapeutiska medel.
Många studier har rapporterat att förekomsten och utvecklingen av CG är kopplad till utsöndringen av gastrointestinala hormoner, såsom gastrin (GAS)4,5. GAS, ett vanligt gastrointestinalt peptidhormon i matsmältningskanalen, stimulerar cellerna att utsöndra magsyra genom att främja frisättningen av histamin från eosinofiler. Dessutom förbättrar det näringen och blodtillförseln i magslemhinnan, vilket främjar spridningen av magslemhinnan och parietalceller6. Därför kan gastrin användas som en indikator för att utvärdera utvecklingsnivån av CG. Dessutom kan lipidperoxidationsprodukter som utlöses av reaktiva oxider aktivera inflammatoriska celler, vilket leder till CG. Malondialdehyd (MDA), en lipidperoxidationsmarkör, är en vanlig indikator för att mäta graden av oxidativ stress. Det återspeglar till viss del nivån av fria radikaler i magslemhinnan. MDA-nivån kan indikera angrepp av omättade fettsyror i den lokala magslemhinnan orsakad av fria radikaler 7,8.
Tarmmikroekologi består av miljontals mikroorganismer som finns i värdens tarm och spelar en viktig roll för att upprätthålla värdens hälsa och reglera värdens immunitet. En hälsosam tarmflora, kännetecknad av hög rikedom, mångfald och stabil mikrobiotafunktion, fungerar som en skyddande barriär mot invasion av patogena mikroorganismer genom att delta i ämnesomsättningen. Störningar i tarmfloran gör individer mer mottagliga för akuta och kroniska mag-tarmsjukdomar 9,10. Under de senaste åren har mikrobiotabehandling av gastrointestinala sjukdomar utvecklats snabbt och visat signifikant effekt11. Sammanfattningsvis är det viktigt att ta hänsyn till tarmfloran för att förstå och hantera mag-tarmsjukdomar.
Som en oumbärlig del av den traditionella kinesiska medicinens skattkammare har folkmedicinska material stor betydelse för klinisk praxis och moderniseringen av den nationella medicinen. Rötterna och hela delarna av Desmodium caudatum (Thunb.) DC. har använts i stor utsträckning för att lindra magbesvär i Beichuan Qiang-området i Mianyang City under en längre period. Vissa artiklar anger den vetenskapliga grunden för behandling av gastrointestinala sjukdomar med D. caudatum, med hänvisning till dess effekter såsom hemostas, antioxidation och gastrointestinalt skydd 12,13,14. På grund av bristen på djupgående forskning har dock ingen klinisk farmakodynamisk mekanism fastställts. Denna artikel syftar till att studera effekterna av D. caudatum vid behandling av gastrit baserat på gastrointestinala hormoner och tarmflora, vilket ger en grund för dess rationella kliniska tillämpning.
D. caudatum, en vanlig folkmedicin av Qiang-nationaliteten12, har visat betydande effekt vid behandling av gastrointestinala sjukdomar. Med framstegen inom modern farmakologisk forskning identifieras obalansen i floran till följd av gastrointestinal mikroekologisk obalans som en nyckelfaktor för akuta och kroniska gastrointestinala sjukdomar22,23. Vissa mikroorganismer i tarmkanalen spelar en avgörande roll för att upprätthå…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete finansierades av de viktigaste FoU-projekten vid vetenskaps- och teknikavdelningen i Sichuanprovinsen (2020YFS0539).
Alpha diversity analysis | Mothur 1.30.2 | ||
AxyPrep deoxyribonucleic acid (DNA) gel extraction kit | Axygen Biosciences | AP-GX-50 | |
Beta diversity analysis | Qiime 1.9.1 | ||
Cryogenic refrigerator | Forma-86C ULT freezer | ||
Desmodium caudatum | The Traditional Chinese Medicine Hospital of Beichuan Qiang Autonomous County | ||
E.Z.N.A. soil kit | Omega Bio-tek | D5625-01 | |
Illumina MiSeq Platform | Illumina Miseq PE300/NovaSeq PE250 | ||
Multiskan Spectrum | spectraMax i3 | ||
OTU clustering | Uparse 7.0.1090 | ||
OTU statistics | Usearch 7.0 | ||
PCR instrument | TransGen AP221-02 | ||
PCR instrument | ABI GeneAmp 9700 | ||
QuantiFluor-ST double-stranded DNA (dsDNA) system | Promega Corp. | ||
Sequence classification annotation | RDP Classifier 2.11 | ||
Sodium salicylate | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
SPF rats | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
SPSS 18.0 | IBM |