쥐의 Notexin-Induced Muscle Injury에 대한 Ding의 롤 방법 모방

요약

이 프로토콜은 Ding의 롤 방법을 모방하고, 골격근 손상의 쥐 모델을 설정하고, 헤마톡실린-에오신 염색을 사용하여 손상된 조직의 병리를 관찰하고 효소 결합 면역 흡착 분석을 사용하여 혈청 손상 마커의 변화를 감지하는 간단한 장치를 설명합니다.

초록

Ding의 롤 방법은 중국 전통 마사지(Tuina) 클리닉에서 가장 일반적으로 사용되는 조작 중 하나이며 중국에서 가장 영향력 있는 현대 Tuina 조작 중 하나입니다. 그것은 한 손가락 선 장르에서 일반적으로 사용되는 전통적인 롤링 방법을 기반으로 하며 Ding의 롤 방법이라고 명명되었습니다. 항염증 및 혈액 순환 촉진 효과로 인해 Ding의 롤링 방법은 근육병증에 대한 건전한 치료 효과가 있습니다. 인간의 피부에 가해지는 힘의 영역이 넓기 때문에 Ding의 롤 방법은 쥐와 토끼와 같이 피부 면적이 작은 실험 동물에게 수행하기가 어렵습니다. 또한, 인체에 가해지는 투이나의 강도는 실험동물에게 가해지는 강도와 다르기 때문에 실험 중 투이나의 치료 효과를 얻기에는 강도가 너무 높거나 낮을 수 있습니다. 이 실험은 Ding의 롤링 조작 매개변수(강도, 빈도, Tuina 지속 시간)를 기반으로 쥐에게 적합한 간단한 마사지기를 만드는 것을 목표로 합니다. 이 장치는 동물 실험에서 조작을 표준화하고 주관적인 요인으로 인해 다른 동물에 적용되는 Tuina 힘의 변화를 줄일 수 있습니다. 노텍신에 의한 골격근 손상의 쥐 모델을 확립하고, 혈장 손상 마커인 크레아틴 키나아제(CK) 및 지방산 결합 단백질 3(FABP3)를 사용하여 골격근 손상에 대한 투이나의 치료 효과를 평가했습니다. 결과는 이 Tuina 마사지기가 CK 및 FABP3 발현 수준을 줄이고 골격근 손상 정도를 늦출 수 있음을 보여주었습니다. 따라서 여기에 설명된 Ding의 롤 방법을 모방한 Tuina 마사지기는 실험 연구에서 Tuina 조작을 표준화하는 데 기여하고 근육병증에 대한 Tuina의 분자 메커니즘에 대한 후속 연구에 큰 도움이 됩니다.

서론

근육 손상은 임상 및 일상 생활에서 흔히 발생하는 외상성 부상으로, 외부 타격(타박상) 또는 근섬유의 만성적인 과긴장(긴장) 등으로 인해 근육 기능 장애와 통증을 유발하고 환자의 삶의 질에 심각한 영향을 미치기도 합니다¹. 급성 긴장 장애 후 가능한 한 빨리 재활을 시작하는 것이 스포츠 복귀 시간을 단축하는 열쇠입니다² 통증을 줄이는 열쇠 ^3,4. 현대 서양 의학에서 근육 손상에 대한 임상적 응급처치는 근육 조직으로의 유해한 출혈을 막기 위해 휴식, 얼음찜질, 압박 및 상승(RICE)의 원칙을 따르며⁵ 통증을 완화하기 위해 비스테로이드성 항염증제⁶를 사용한다. 엑소좀(exosome)⁷ 및 조직공학(tissue engineering⁾⁸과 같은 새로운 치료법의 발견은 골격근 질환에 대한 잠재적인 치료 전략이 되었으며, 기존 약리학적 치료법의 단점을 보완했습니다. 그러나 이는 환자의 치료 비용을 증가시켜 엄청난 재정적 압박을 가할 수 있다<....

프로토콜

동물과 관련된 시술은 Hunan University of Chinese Medicine의 Institutional Care and Use Committee의 승인을 받았습니다.

1. 롤링 마사지기 조립

1. 고무 롤러, 포크 홀더, 스프링, 리미트 배플, 조정 부목, 나사 및 아크릴 손잡이로 구성된 마사지기를 선택합니다(그림 1). 고무 롤러의 길이는 3cm, 직경은 1.6cm, 스프링은 길이 3cm, 직경은 0.9cm, 한계 배플은 길이 3cm, 너비는 2cm, 핸들은 길이 12cm, 직경 0.9cm인지 확인합니다.
2. 힘 제어: 문헌 결과²³에 따르면, 딩의 롤 방식 하향 압력은 체중의 약 10%인 것으로 밝혀졌으므로 전방 롤링 설계 시 가해지는 압력은 쥐 체중의 약 10%(0.2-0.3N)입니다. 한계 배플의 각도를 조정하여 계량 컨트롤러에서 마사지기의 최대 압력이 약 0.3N이 되도록 테스트합니다. 이 압력 요구 사항은 쥐의 요구를 충족시킵니다.
3. 롤백할 때 최소 압력이 약 0.08N인지 확인합니다(그림 2). 압력....

결과

손상 후 쥐 골격근의 형태학적 특성을 관찰하기 위해 비복근을 헤마톡실린과 에오신으로 염색하고 염색된 이미지를 그룹당 8마리의 쥐에 대한 프로토콜에 설명된 대로 분석 소프트웨어로 판독했습니다. 노텍신(NTX 그룹)에 의해 유발된 비복근 손상이 있는 쥐에서는 많은 근육 세포가 파열되고, 위축되고, 괴사하고, 불규칙하게 배열되었습니다. 또한 환부 주변에 호중구와 림프구가 많이 침투되어 있었습니다(그림 4B). 그러나 롤링 마사지기로 Tuina 치료를 한 후 NTX+Tuina 그룹의 근육 세포의 병리학적 상태가 개선되어 NTX 그룹에 비해 파열, 위축, 괴사 세포가 적고 침윤하는 염증 세포의 수가 적었습니다(그림 4C). 대조군에서 쥐의 근육 세포는 크기가 균일하고 밀접하게 배열되어 있으며 염증 세포 침윤이 없었습니다(그림 4A).

토론

여기서는 쥐의 골격근 손상에 대한 Tuina 치료 프로토콜을 설명한 후 치료 후 골격근 손상 정도를 분석하여 방법의 효과를 검증했습니다. 특히, 약물 유도(notexin, bupivacaine)16, 둔기 타박상(blunt contusion)²⁶, 크러쉬(crush)27 및 허혈-재관류(ischemia-reperfusion)²⁸를 포함하되 이에 국한되지 않는 쥐 골격근 손상 모델이 Tuina와 함께 개입할 수 있다. 조직병리학적 변화를 관찰하기 위한 HE 염색과 골격근 손상의 마커를 결정하기 위한 ELISA 검출을 통해 노텍신이 쥐의 비복근에 심각한 손상을 입히는 반면 Ding's roll 방법을 시뮬레이션하는 마사지기는 근육 손상을 줄일 수 있음을 직관적으로 보여줍니다. 이는 골격근 부상 치료에 대한 Tuina의 효과에 대한 설득력 있는 증거를 제공합니다.<.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1 mL 주사기	JIANGXI FENGLIN	20220521
1.5 마이크로튜브	Servicebio	EP-150X-J
15mL 원심분리기 튜브	Servicebio	EP-1501-J
30G 바늘	CONPUVON	220318
5mL 채혈관	Servicebio	QX0023
아크릴 손잡이	Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd	65643645
조정 부목	CREROMEM
면봉	INOHV	22080215
효소 표시 기구	Rayto	RT-6100
에탄올	INOHV	211106
포크 홀더	Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd	JL001
제모 크림	Veet, France	LOTC190922002
Hematoxylin 염색 솔루션 세트	Wuhan Google Biotech	G1005
이미징 시스템	니콘, 일본	니콘 DS-U3
IODOPHOR 해설 솔루션	Hale & Hearty	20221205
광학 현미경	니콘, 일본	Nikon Eclipse E100
한계 배플	CREROMEM	20220724
Notexin	Latoxan S.A.S.	L8104-100UG
펜토바르비탈 나트륨	Merck KGaA	P3761
쥐 크레아틴 키나아제(CK) ELISA 키트	LunChangShuoBiotech	YD-35237
쥐 지방산 결합 단백질 3(FABP3) ELISA 키트	LunChangShuoBiotech	YD-35730
고무 롤러	Hebei Mgkui Chemical Technology Co., Ltd	202207
나사	Weiyan 하드웨어	B05Z122
Sprague, Dawley, 쥐,	Hunan Slake, Kingda, Laboratory, Animal Co.	SYXK2019-0009
봄	Bingzhang 하드웨어	TH001
수술 블레이드	Covetrus	#23
계량 컨트롤러	Iyoys	HY-XSQ

20220729