यहाँ, हम IPSC व्युत्पन्न न्यूरॉन्स और astrocytes के 3 डी bioprinted coculture का उत्पादन करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं. 96- या 384-अच्छी तरह से प्रारूपों में हाइड्रोजेल मचान के भीतर उत्पन्न यह कॉकल्चर मॉडल, 7 दिनों के भीतर उच्च पोस्ट-प्रिंट व्यवहार्यता और न्यूराइट प्रकोप को प्रदर्शित करता है और दोनों सेल प्रकारों के लिए परिपक्वता मार्करों की अभिव्यक्ति दिखाता है।
एक सेल मॉडल के लिए दवा स्क्रीनिंग के लिए व्यवहार्य होने के लिए, सिस्टम को एक कुशल विकास समय होने के साथ-साथ थ्रूपुट और समरूपता आवश्यकताओं को पूरा करना चाहिए। हालांकि, कई प्रकाशित 3D मॉडल इन मानदंडों को पूरा नहीं करते हैं। इसलिए, यह प्रारंभिक दवा खोज अनुप्रयोगों में उनकी उपयोगिता को सीमित करता है। त्रि-आयामी (3 डी) बायोप्रिंटिंग एक नई तकनीक है जिसे विकास के समय में तेजी लाने, मानकीकरण बढ़ाने और थ्रूपुट बढ़ाने के लिए 3 डी मॉडल के विकास पर लागू किया जा सकता है। यहाँ, हम मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल के 3 डी bioprinted coculture मॉडल विकसित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत (IPSC)-व्युत्पन्न glutamatergic न्यूरॉन्स और astrocytes. ये सहसंस्कृति बायोएक्टिव पेप्टाइड्स, पूर्ण लंबाई वाले बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) प्रोटीन के हाइड्रोजेल मैट्रिक्स के भीतर एम्बेडेड हैं, और 1.1 केपीए की शारीरिक कठोरता के साथ। मॉडल को 96-अच्छी तरह से और 384-अच्छी तरह से प्रारूपों में तेजी से स्थापित किया जा सकता है और 72% की औसत पोस्ट-प्रिंट व्यवहार्यता पैदा करता है। इस मॉडल में एस्ट्रोसाइट-टू-न्यूरॉन अनुपात 1: 1.5 दिखाया गया है, जो मानव मस्तिष्क के लिए शारीरिक सीमा के भीतर है। ये 3 डी बायोप्रिंटेड सेल आबादी परिपक्व तंत्रिका कोशिका प्रकार मार्करों की अभिव्यक्ति और संस्कृति के 7 दिनों के भीतर न्यूराइट और एस्ट्रोसाइट अनुमानों की वृद्धि भी दिखाती है। नतीजतन, यह मॉडल न्यूराइट आउटग्रोथ परख के साथ सेल रंजक और इम्यूनोस्टेनिंग तकनीकों का उपयोग करके विश्लेषण के लिए उपयुक्त है। पैमाने पर इन शारीरिक रूप से प्रतिनिधि मॉडल का उत्पादन करने की क्षमता उन्हें तंत्रिका विज्ञान लक्ष्यों के लिए मध्यम से उच्च थ्रूपुट स्क्रीनिंग परख में उपयोग के लिए आदर्श बनाती है।
दवा खोज उद्योग में केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) रोगों में अनुसंधान का विस्तार हो रहा है1. हालांकि, मिर्गी, एक प्रकार का पागलपन, और अल्जाइमर रोग के रूप में कई प्रचलित सीएनएस रोगों अभी भी कोई उपचारात्मक उपचार2,3,4 है. सीएनएस रोगों में प्रभावी चिकित्सा विज्ञान की कमी, कम से कम भाग में, मस्तिष्क5 के इन विट्रो मॉडल में सटीक की कमी के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है. इसके परिणामस्वरूप इन विट्रो मॉडल और विवो डेटा में वर्तमान और अनुसंधान प्रयासों में बाद में अड़चन के बीच एक अनुवाद संबंधी अंतर हुआ है।
इस अनुवाद अंतर से प्रेरित, हाल के वर्षों के भीतर उपन्यास 3 डी सेल मॉडल के विकास में उल्लेखनीय वृद्धि हुई है, जिसमें तंत्रिका ऑर्गेनोइड्स, न्यूरोस्फेरॉइड और मचान-आधारित मॉडल6 शामिल हैं। इन मॉडलों की 3 डी संरचना तंत्रिका माइक्रोएन्वायरमेंट को पुन: व्यवस्थित करने में सहायता करती है, जिसमें बायोमेकेनिकल तनाव, सेल-सेल संपर्क और मस्तिष्क बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम)7शामिल हैं। मस्तिष्क ईसीएम न्यूरोफिज़ियोलॉजी का एक गतिशील तत्व है जो न्यूरॉन्स, एस्ट्रोसाइट्स, ऑलिगोडेंड्रोसाइट्स और न्यूरोवास्कुलर यूनिट7 सहित तंत्रिका कोशिका प्रकारों के बीच की जगह पर कब्जा कर लेता है। मस्तिष्क ईसीएम के पुनर्पूंजीकरण को न्यूरोनल आकृति विज्ञान और न्यूरोनल फायरिंग को प्रभावित करने के लिए दिखाया गया है, और मस्तिष्क के कई जटिल 3 डी मॉडल ने तंत्रिका कोशिका प्रकार 8,9,10,11द्वारा ईसीएम प्रोटीन के जमाव का प्रदर्शन किया है। मचान-आधारित मॉडल में एक झरझरा सिंथेटिक या जैविक हाइड्रोगेल मैट्रिक्स में निलंबित परिपक्व तंत्रिका सहसंस्कृति होते हैं जो मस्तिष्क ईसीएम12 का प्रतिनिधित्व करते हैं। ऑर्गेनॉइड और स्फेरॉइड सिस्टम के विपरीत, मचान आधारित 3 डी मॉडल मौजूद ईसीएम प्रोटीन के अनुकूलन की अनुमति देते हैं और बायोमेकेनिकल तनाव13,14की नकल करने के लिए हाइड्रोजेल कठोरता की ट्यूनेबिलिटी का अतिरिक्त लाभ होता है।
हालांकि 3 डी तंत्रिका मॉडल का एक भारी बहुमत मस्तिष्क microenvironment की एक वृद्धि हुई पुनरावृत्ति का प्रदर्शन, नहीं सभी मॉडल अच्छी तरह से दवा की खोज अनुप्रयोगों15 को लागू करने के लिए अनुकूल हैं. एक 3 डी मॉडल औद्योगिक प्रक्रियाओं में लागू किया जा करने के लिए, प्रणाली स्क्रीनिंग अनुप्रयोगों के लिए थ्रूपुट आवश्यकताओं को पूरा करना चाहिए और एक अपेक्षाकृत कम विकास समय16. 3 डी बायोप्रिंटिंग एक उपन्यास तकनीक है जो मानव त्रुटि17 के कारण परिवर्तनशीलता को हटाने के साथ-साथ तेजी से विकास समय, बढ़ी हुई थ्रूपुट और सटीक नियंत्रण के उच्च स्तर के साथ 3 डी मचान-आधारित तंत्रिका मॉडल बनाने की क्षमता प्रदान करती है। यह प्रोटोकॉल एक हाइड्रोजेल मचान में मानव आईपीएससी-व्युत्पन्न ग्लूटामेटेरिक न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स का एक 3 डी कोकल्चर मॉडल प्रस्तुत करता है। इस हाइड्रोजेल मचान में शारीरिक रूप से प्रतिनिधि बायोएक्टिव पेप्टाइड्स (RGD, IKVAV, YIGSR) और ECM प्रोटीन एक नकली बायोमैकेनिकल कठोरता के भीतर होते हैं। इन पूर्ण लंबाई ईसीएम प्रोटीन पूर्ण लंबाई laminin-211 और hyaluronic एसिड, मानव प्रांतस्था में प्रचुर मात्रा में शामिल, विवो माप18 में के साथ लाइन में 1.1 kPa की कठोरता के साथ. इस मॉडल को दवा की खोज के लिए व्यावहारिकता के साथ डिज़ाइन किया गया है, और न्यूराइट आउटग्रोथ परख के साथ-साथ सेल रंजक और एंटीबॉडी के साथ इमेजिंग तकनीकों का उपयोग करके स्क्रीनिंग विश्लेषण के लिए उपयुक्त 96-अच्छी तरह से या 384-अच्छी तरह से प्लेट प्रारूप में 3 डी बायोप्रिंटर का उपयोग करके बनाया गया है। कोशिकाएं तंत्रिका कोशिका प्रकार मार्करों की अभिव्यक्ति और संस्कृति के 7 दिनों के भीतर न्यूराइट और एस्ट्रोसाइटिक अनुमानों की वृद्धि दिखाती हैं। इस प्रकार, इस प्रोटोकॉल दवा खोज अनुप्रयोगों में उपयोग के लिए एक उच्च throughput 3 डी तंत्रिका coculture मॉडल विकसित करने के लिए पद्धति प्रस्तुत करेंगे.
चित्रा 1: 3 डी बायोप्रिंट कॉकल्चर के लिए उपयोग की जाने वाली कार्यप्रणाली का निदर्शी अवलोकन। मानव आईपीएससी-व्युत्पन्न न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स को बायोएक्टिव पेप्टाइड्स युक्त एक्टिवेटर और बायोइंक समाधान के साथ जोड़ा जाता है और ड्रॉप-ऑन-डिमांड बायोप्रिंटिंग तकनीक का उपयोग करके 96-अच्छी तरह से या 384-अच्छी तरह से प्रारूपों में हाइड्रोजेल मचानों के लिए बायोप्रिंट किया जाता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
सीएनएस के सटीक मॉडल के लिए की जरूरत कभी अधिक नहीं किया गया है, और दो आयामी (2 डी) पारंपरिक सेल संस्कृति मॉडल की सीमाओं हाल के वर्षों में जटिल सीएनएस मॉडल की एक पीढ़ी संचालित किया है19. हालांकि, कई जटिल 3 डी मॉडल जो तंत्रिका कोशिका प्रकारों और ईसीएम के बीच बातचीत का प्रतिनिधित्व करते हैं, उनकी सीमाएं हैं जो औद्योगिक प्रक्रियाओं 6,20,21में इन मॉडलों के आवेदन को रोकेंगी। इस प्रोटोकॉल में, हम मानव आईपीएससी-व्युत्पन्न न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स का एक 3 डी कॉकल्चर मॉडल विकसित करते हैं, जिसका उद्देश्य 96-अच्छी तरह से और 384-अच्छी तरह से प्रारूपों में बायोएक्टिव हाइड्रोगेल मचान बनाने के लिए 3 डी बायोप्रिंटिंग तकनीक का उपयोग करके इनमें से कुछ सीमाओं को हल करना है।
इन मॉडलों को विकसित करने की पद्धति को प्लेट मैप डिज़ाइन सॉफ़्टवेयर, ऑटो-जेनरेट किए गए प्रिंट प्रोटोकॉल और बायोप्रिंटर से निर्देशित प्रिंट प्रक्रिया के माध्यम से सरल बनाया गया है। हालांकि, इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया संवेदनशील IPSC व्युत्पन्न सेल प्रकार के संवेदनशील प्रकृति के कारण देखभाल विगलन और संस्कृति में निम्नलिखित महत्वपूर्ण कदम के साथ लिया जाना चाहिए. सबसे पहले, रॉक अवरोधक (रॉकी) को शामिल करने से बायोप्रिंटिंग प्रक्रिया और प्रारंभिक संस्कृति के दौरान कई लाभ होते हैं। सेल विगलन एक महत्वपूर्ण बिंदु है जिसमें न्यूरॉन्स एक तनाव प्रतिक्रिया का अनुभव कर सकते हैं, और अनुचित विगलन प्रोटोकॉल22 जीवित रहने की संभावना कम कर सकते हैं. यह आम तौर पर कोशिकाओं पिघलना मीडिया जोड़ने, और इनक्यूबेटर तापमान के रूप में कुशलता के रूप में संभव23 करने के लिए कोशिकाओं को बढ़ाने के लिए सिफारिश की है. हालांकि, इस प्रोटोकॉल में वर्णित बायोप्रिंटिंग प्रक्रिया के दौरान, यह आवश्यक है कि न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स को मीडिया के बजाय एक उत्प्रेरक समाधान में फिर से निलंबित कर दिया जाए, और कोशिकाओं को प्रिंट रन के अंत तक कमरे के तापमान से ऊपर नहीं उठाया जाएगा (30 मिनट के बाद पिघलना)। इस प्रकार, तुरंत पिघलने के बाद मीडिया के लिए रॉकी के अलावा और दो centrifugation कदम (कदम 2.1–2.7 और 1.3.15-1.3.20) के दौरान इस सहित सेल तनाव रास्ते है, जो कम व्यवहार्यता स्तर24 में परिणाम होगा बाधित करने के लिए जरूरी है. इसके अलावा, रॉकी को न्यूराइट प्रकोप को बढ़ावा देने और न्यूरोनल परिपक्वता25 में सुधार करने के लिए दिखाया गया है। इस प्रकार, ROCKi पूरकता 48 घंटे के बाद bioprinting के लिए जारी है. हालांकि, कोशिकाओं को परख के लिए उपयोग किए जाने से पहले बाद के मीडिया परिवर्तनों के दौरान पूर्ण धोने को सुनिश्चित करने के लिए 48 घंटे के बाद रॉकी पूरकता को हटाना अनिवार्य है।
एक और कदम है कि महत्वपूर्ण ध्यान देने की आवश्यकता है पोस्ट प्रिंट मीडिया इसके अलावा और मीडिया परिवर्तन (2.8-2.13 कदम) के दौरान है. बायोप्रिंटेड हाइड्रोजेल मचान में केवल 1.1 kPa के बराबर बायोमैकेनिकल कठोरता होती है, जो ग्रे मैटर के बराबर होती है। जैसा कि चरण 2.10 में वर्णित है, यह मीडिया जोड़ और अशांति को रोकने के लिए आकांक्षा के दौरान कुएं के किनारे में धीरे से विंदुक के लिए महत्वपूर्ण है। यह 384 अच्छी तरह से प्लेटों, जहां जेल स्तर कुल अच्छी तरह से मात्रा का एक उच्च अनुपात लेता है के लिए विशेष प्रासंगिकता की है. इस विधि का उपयोग 2 डी नियंत्रण कुओं में भी किया जाना चाहिए ताकि कोशिकाओं के किनारे उठाने और न्यूराइट प्रकोप के बाल काटने को रोका जा सके। लेखकों को भी bioprinter के भीतर बाँझ तकनीक के महत्व को उजागर करना चाहते हैं, जो IPSC व्युत्पन्न सेल संस्कृतियों के लिए इस्तेमाल किया एक जैव सुरक्षा कैबिनेट की है कि बराबर सावधानी के साथ इलाज किया जाना चाहिए. इसमें ग्रीनलाइटिंग और प्रिंटिंग प्रक्रियाओं में उपयोग किए जाने वाले बाँझ फ़िल्टरिंग 70% EtOH और dH2O शामिल हैं, बायोप्रिंटर के अंदर और बाहर हाथ ले जाते समय कारतूस और प्लेटों पर ढक्कन रखते हुए, और मुद्रण से पहले और बाद में 70% इथेनॉल पोंछे के साथ बायोप्रिंटर के अंदर सतहों को नष्ट करना।
बायोइंक और एक्टिवेटर समाधानों से बने बायोप्रिंटेड हाइड्रोगेल मचान, इस मॉडल को विकसित करने के लिए चुने गए बायोइंक और एक्टिवेटर समाधानों को रैस्ट्रम बायोप्रिंटर के भीतर उपयोग के लिए इन्वेंटिया लाइफ साइंस द्वारा विकसित बायोइंक और एक्टिवेटर समाधानों की एक श्रृंखला से चुना गया है। Laminin और hyaluronic एसिड अक्षीय मार्गदर्शन में उनकी भूमिका के कारण IPSC व्युत्पन्न neuronal परिपक्वता के लिए प्रासंगिकता के अणुओं के रूप में पहचाने गए, अन्तर्ग्रथन गठन, और perineuronal शुद्ध26,27 के गठन. इसके अलावा, 1.1 केपीए की एक बायोमेकेनिकल कठोरता का चयन किया गया था, क्योंकि कम घनत्व वाले हाइड्रोगेल को न्यूरॉन्स12 से बेहतर न्यूराइट प्रकोप को सक्षम करने के लिए दिखाया गया है। यदि न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स का उपयोग करके प्रोटोकॉल में संशोधन किए जाते हैं जिन्हें घर में या एक अलग वाणिज्यिक आपूर्तिकर्ता से विभेदित किया गया है, तो सबसे अधिक सहायक हाइड्रोगेल मचान15 निर्धारित करने के लिए मैट्रिक्स चयन परीक्षण करने की सिफारिश की जाएगी। इसके अलावा, सेल घनत्व को भी अनुकूलित करने की आवश्यकता हो सकती है यदि सेल स्रोतों में परिवर्तन इष्टतम व्यवहार्यता सुनिश्चित करने और हाइड्रोजेल भीड़भाड़ को रोकने के लिए किए जाते हैं। बायोप्रिंटर फ़ंक्शन से संबंधित सभी संशोधनों और समस्या निवारण के लिए, लेखक निर्माताओं से संपर्क करने और निर्माता प्रोटोकॉल को संदर्भित करने की सलाह देते हैं।
सीएनएस में न्यूरोनल उपप्रकार और ग्लियल कोशिकाओं की एक विस्तृत श्रृंखला होती है, जो सभी विभिन्न मस्तिष्क niches में मौजूद हैं और तंत्रिका समारोह28 में योगदान करने वाली विशिष्ट भूमिकाएं हैं। इस व्यापक दायरे के संदर्भ में, यह मॉडल केवल दो सबसे प्रचुर मात्रा में सेल प्रकारों (एस्ट्रोसाइट्स और उत्तेजक ग्लूटामेटेरिक न्यूरॉन्स) का प्रतिनिधित्व करता है। महत्वपूर्ण सेल प्रकार जैसे माइक्रोग्लिया, ऑलिगोडेंड्रोसाइट्स, और रक्त-मस्तिष्क बाधा बनाने वाली एंडोथेलियल कोशिकाओं को इस प्रणाली से छोड़ दिया जाता है। माइक्रोग्लिया का समावेश न्यूरोइम्यून इंटरैक्शन पर ध्यान केंद्रित करने में प्रासंगिकता का हो सकता है, और ऑलिगोडेंड्रोसाइट्स केंद्रीय माइलिनेशन को प्रभावित करने वाली बीमारियों में रुचि हो सकती है। पैथोलॉजी में उनकी भूमिका के अलावा, रक्त-मस्तिष्क बाधा बनाने वाली एंडोथेलियल कोशिकाओं जैसी कोशिकाएं दवा-चयापचय एंजाइमों का उत्सर्जन करती हैं, जो फार्माकोकाइनेटिक परख29के लिए इस मॉडल के उपयोग को प्रभावित कर सकती हैं। मॉडल की एक और सीमा न्यूरॉन्स के लिए एस्ट्रोसाइट्स का अनुपात हो सकता है; न्यूरॉन्स के लिए एस्ट्रोसाइट्स का अनुपात मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच बहुत भिन्न होता है, 1: 1 और 1: 330,31 के बीच सुझाए गए मूल्यों के साथ। इस मॉडल में न्यूरॉन्स के लिए 1: 1.5 एस्ट्रोसाइट्स का अनुमानित अनुपात है; इस प्रकार, यह मॉडल मस्तिष्क क्षेत्रों को मॉडल करने के लिए प्रासंगिक नहीं हो सकता है जहां एस्ट्रोसाइट्स अधिक प्रचुर मात्रा में हैं, जैसे कि सफेद पदार्थक्षेत्रों में 30.
3 डी बायोप्रिंटेड कॉकल्चर मॉडल विकसित करने के लिए अन्य प्रोटोकॉल हाल के वर्षों में प्रकाशित किए गए हैं। सुलिवन एट अल., 2021 के एक प्रकाशन ने आईपीएससी-व्युत्पन्न तंत्रिका पूर्वज कोशिकाओं का उपयोग करके एक 3डी बायोप्रिंटेड तंत्रिका मॉडल प्रस्तुत किया, जो 2डी संस्कृतियों की तुलना में उच्च पोस्ट-प्रिंट व्यवहार्यता और न्यूरोनल फ़ंक्शनकी वृद्धि को प्रदर्शित करता है। हालांकि, इस प्रोटोकॉल में, तंत्रिका पूर्वज कोशिकाओं को सेल स्रोत के रूप में इस्तेमाल किया गया था और 4 सप्ताह के लिए संस्कृति में बनाए रखा गया था। इस प्रोटोकॉल में, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध IPSC व्युत्पन्न glutamatergic न्यूरॉन्स और astrocytes इस्तेमाल किया गया. यह सह-सुसंस्कृत कोशिकाओं के 3 डी नेटवर्क को कम से कम 7 दिनों में स्थापित करने की अनुमति देता है; जैसा कि न्यूराइट विकास विश्लेषण द्वारा प्रदर्शित किया गया है, न्यूराइट प्रकोप 24 घंटे के भीतर शुरू होता है और 156 एच अवधि के दौरान एक रैखिक फैशन में जारी रहता है जिसके लिए कोशिका वृद्धि की निगरानी की गई थी। इन नेटवर्कों की तेजी से स्थापना को आंशिक रूप से ग्लूटामेटेर्जिक न्यूरॉन्स के उपयोग के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है जो एनजीएन 2 के अनुकूलित डॉक्सीसाइक्लिन-इंड्यूसिबल जीन अभिव्यक्ति का उपयोग करते हैं, जो 7 दिनों के भीतर परिपक्व न्यूरोनल उपप्रकार मार्करों की अभिव्यक्ति दिखाता है, यहां तक कि 2 डी संस्कृति33 में भी। इस तकनीक का उपयोग कर इस विकास की अवधि की कमी biopharmaceutical उद्योग के भीतर मॉडल को लागू करने के लिए महत्वपूर्ण है, परख विकास तेजी से बदलाव और सेल मॉडल15 के विकास की आवश्यकता है के रूप में.
अंत में, यह मॉडल न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स के 3 डी मॉडल के लिए क्षमता दिखाता है, जो स्क्रीनिंग उद्देश्यों के लिए जल्दी और आसानी से स्थापित होता है। इस मॉडल प्रकार के लिए भविष्य के अनुप्रयोगों विभिन्न सीएनएस रोगों भर में दवा की खोज के प्रयासों के लिए हो सकता है, रोगी या जीन संपादित रोग आईपीएससी लाइनों का उपयोग कर विभिन्न रोगों के लिए विस्तार करने का अवसर के साथ. इसके अलावा, डॉक्सीसाइक्लिन-इंड्यूसिबल एनजीएन 2 अभिव्यक्ति आईपीएससी-व्युत्पन्न ग्लूटामेटेर्जिक न्यूरॉन्स का उपयोग कोशिकाओं को कम समय में परिपक्वता तक पहुंचने की अनुमति देता है, जिसका उपयोग न्यूरोडीजेनेरेशन अनुसंधान के लिए उम्र बढ़ने वाले मस्तिष्क के मॉडल विकसित करने के लिए किया जा सकता है। इस प्रणाली को माइक्रोग्लिया और ऑलिगोडेंड्रोसाइट्स सहित सहसंस्कृति में अतिरिक्त सेल प्रकारों के उपयोग के माध्यम से भी विस्तारित किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
लेखक पांडुलिपि पर प्रोटोकॉल और प्रतिक्रिया विकसित करने में उनकी सहायता के लिए एलेक्स वोल्करलिंग, मार्टिन एंगेल और राहेल ब्लीच को धन्यवाद देना चाहते हैं।
2-mercaptoethanol | Thermofisher | 31350010 | |
384-well plate | PerkinElmer | 6057300 | |
96-well plate | PerkinElmer | 6055300 | |
Activator fluid F299 | Inventia Life Science | N/A | |
Activator fluid F3 | Inventia Life Science | N/A | |
B27 (50x) minus Vit A | Thermofisher | 12587010 | |
Bioink fluid F261 | Inventia Life Science | N/A | |
Bioink fluid F32 | Inventia Life Science | N/A | |
Doxycycline hyclate | Sigma Aldrich | D5207 | |
GlutaMAX (100x) | Thermofisher | 35050061 | |
Goat anti-mouse IgG H&L Alexa Fluor 647 | Abcam | ab150115 | |
Goat anti-rabbit IgG H&L Alexa Fluor 488 | Abcam | ab150077 | |
Hoechst | Abcam | ab228551 | |
Human BDNF Recombinant Protein | Thermofisher | PHC7074 | |
Human NT3 Recombinant Protein | Thermofisher | PHC7036 | |
iCell Astrocytes | Fujifilm CDI | 1434 | |
INCell Analyser 6500HS | Molecular Devices | N/A | high content imaging system |
Incucyte S3 | Sartorius | N/A | |
ioGlutamatergic Neurons (Large vial) | Bit.bio | e001 | |
Laminin (1 mg/mL) | Sigma Aldrich | L2020 | |
Live/dead kit (Calcein-AM, Ethidium homo-dimer-1) | Invitrogen | L3224 | |
Mouse anti-BIII tubulin NL637 conjugated | R&D systems | SC024 | |
Neurobasal media | Thermofisher | 21103049 | |
Normal Donkey Serum | Abcam | ab7475 | |
NucBlue Live (Hoechst 33342) | Thermofisher | R37605 | |
Opti-MEM | Thermofisher | 11058021 | |
Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | P6148 | |
PEI 50% in H2O | Sigma Aldrich | 181978 | |
Pierce Borate Buffer 20x | Thermofisher | 28341 | |
Prism | GraphPad | Data analysis software | |
Rabbit anti-ionotropic glutamatre receptor 2 (GluR2) | Abcam | ab206293 | |
RASTRUM(TM) Bioprinter | Inventia Life Science | N/A | Bioprinter |
RASTRUM(TM) Bioprinter Cartridges | Inventia Life Science | N/A | Bioprinter Cartridges |
RASTRUM(TM) Targeting plate | Inventia Life Science | N/A | Targeting plate |
Rho kinase (ROCK) inhibitor | Abcam | ab120129 | |
Sheep anti-GFAP NL493 conjugated | R&D systems | SC024 | |
Signals Image Artist | PerkinElmer | N/A | Image analysis platform |
Triton X-100 | Thermofisher | HFH10 | |
Zeiss Axio Observer | Zeiss | N/A | Inverted microscope platform |