मौखिक सबम्यूकस फाइब्रोसिस ऊतकों का लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन रूपात्मक और स्थानिक जानकारी के साथ बहु-ओमिक्स डेटा के विश्लेषण के लिए रुचि के हिस्टोलॉजिकल क्षेत्रों से कोशिकाओं के सटीक निष्कर्षण की अनुमति देता है।
ओरल सबम्यूकस फाइब्रोसिस (ओएसएफ) मौखिक गुहा में संभावित घातक विकार का एक सामान्य प्रकार है। लैमिना प्रोप्रिया और सबम्यूकोसा के एपिथेलियम और फाइब्रोसिस के शोष अक्सर हिस्टोपैथोलॉजिकल स्लाइड पर पाए जाते हैं। एपिथेलियल डिस्प्लेसिया, एपिथेलियल एट्रोफी और सेनेसेंट फाइब्रोब्लास्ट को ओएसएफ के घातक परिवर्तन से जुड़े होने का प्रस्ताव दिया गया है। हालांकि, संभावित घातक मौखिक विकारों और मौखिक स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा की विविधता के कारण, ओएसएफ में घातक परिवर्तन के विशिष्ट आणविक तंत्र की पहचान करना मुश्किल है। यहां, हम फॉर्मेलिन-फिक्स्ड पैराफिन-एम्बेडेड ऊतक स्लाइड पर लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन द्वारा रूपात्मक डेटा और स्थानिक जानकारी ले जाने वाले उपकला या मेसेनकाइमल कोशिकाओं की एक छोटी संख्या प्राप्त करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं। माइक्रोस्कोप का उपयोग करके, हम माइक्रोस्केल (~ 500 कोशिकाओं) डिस्प्लास्टिक या एट्रोफिक उपकला ऊतक और फाइब्रोटिक उपकला ऊतक को ठीक से पकड़ सकते हैं। निकाले गए कोशिकाओं का मूल्यांकन जीनोम या ट्रांसस्क्रिप्टम अनुक्रमण द्वारा रूपात्मक और स्थानिक जानकारी के साथ जीनोमिक और ट्रांसक्रिप्टोमिक डेटा प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है। यह दृष्टिकोण थोक ओएसएफ ऊतक अनुक्रमण की विषमता और गैर-घाव वाले क्षेत्रों में कोशिकाओं के कारण हस्तक्षेप को हटा देता है, जिससे ओएसएफ ऊतक के सटीक स्थानिक-ओमिक्स विश्लेषण की अनुमति मिलती है।
ओरल सबम्यूकस फाइब्रोसिस (ओएसएफ) एक पुरानी, कपटी बीमारी है जो मुख्य रूप से म्यूकोसा म्यूकोसा में विकसित होती है और इसके परिणामस्वरूप प्रतिबंधितमुंह खुलता है। जबकि ओएसएफ एक बहुक्रियाशील बीमारी है, सुपारी या सुपारी चबाना ओएसएफ 2,3 का मुख्य कारण है। भौगोलिक रूप से विशिष्ट इस आदत के कारण, ओएसएफ मुख्य रूप से दक्षिण पूर्व औरदक्षिण एशिया में आबादी में केंद्रित है। ओएसएफ की सामान्य हिस्टोलॉजिकल विशेषताओं में मौखिक म्यूकोसल एपिथेलियम के नीचे संयोजी ऊतक में असामान्य कोलेजन जमाव, संवहनी स्टेनोसिस और रोड़ा1 शामिल हैं। ओएसएफ उपकला ऊतक मौखिक ल्यूकोप्लाकिया 4,5 के साथ सहवर्ती होने पर शोष या हाइपरप्लासिया और यहां तक कि डिस्प्लेसिया की अभिव्यक्तियों के साथ उपस्थित हो सकता है।
ओएसएफ को विश्व स्वास्थ्य संगठन द्वारा एक सामान्य मौखिक संभावित घातक विकार (ओपीएमडी) के रूप में परिभाषित किया गया है जो 4% -6% 6,7,8,9 की घातक परिवर्तन दर के साथ मौखिक स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा में प्रगति की क्षमता प्रदर्शित करता है। ओएसएफ के घातक परिवर्तन को अंतर्निहित तंत्र जटिल10 है। एपिथेलियम की असामान्य वृद्धि, जिसमें डिस्प्लेसिया और शोष दोनों शामिल हैं, कार्सिनोजेनेसिस की क्षमता को बढ़ाता है, और स्ट्रोमा में सेनेसेंट फाइब्रोब्लास्ट प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) औरअन्य अणुओं के माध्यम से उपकला-मेसेनकाइमल संक्रमण (ईएमटी) को प्रेरित करके ओएसएफ की घातक प्रगति में शामिल हो सकते हैं।
स्थानिक-ओमिक विश्लेषण के लिए प्रौद्योगिकियों ने रूपात्मक और स्थानिक जानकारी के साथ बहु-ओमिक डेटा उत्पन्न किया है जिसने कैंसर तंत्र11,12,13 में अंतर्दृष्टि प्रदान की है। यहां, हम लेजर माइक्रोडिसेक्शन द्वारा फॉर्मेलिन-फिक्स्ड पैराफिन-एम्बेडेड ओएसएफ ऊतक से आकृति विज्ञान से संबंधित सेल आबादी को पकड़ने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इन नमूनों के बहु-ओमिक विश्लेषण इंट्राटिशू विषमता के साथ चुनौतियों को दूर कर सकते हैं और ओएसएफ14 में आणविक विकृति और घातक परिवर्तन के तंत्र की समझ बढ़ा सकते हैं।
इस प्रोटोकॉल ने लेजर माइक्रोडिसेक्शन के माध्यम से आगे स्थानिक-ओमिक विश्लेषण के लिए रूपात्मक और स्थानिक जानकारी के साथ ओएसएफ ऊतक के नमूनों को पकड़ने के लिए एक पाइपलाइन की सूचना दी। प्रतिनिधि परिणामों…
The authors have nothing to disclose.
इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्रकृति विज्ञान फाउंडेशन (81671006, 81300894), चिकित्सा विज्ञान के लिए सीएएमएस इनोवेशन फंड (2019-आई2एम-5-038), राष्ट्रीय नैदानिक कुंजी अनुशासन निर्माण परियोजना (पीकेयूएसएएसएनकेपी -202102), पेकिंग विश्वविद्यालय स्वास्थ्य विज्ञान केंद्र (BMU2022BSS001) के उत्कृष्ट डॉक्टरेट उम्मीदवारों के लिए नवाचार निधि से अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।
Adhesion microscope slides | CITOTEST | REF.188105 | |
Div-haematoxylin | YiLi | 20230326 | |
Eosin solution | BASO | BA4098 | |
Ethanol | PEKING REAGENT | No.32061 | |
Harris hematoxylin dye solution | YiLi | 20230326 | |
Hot plate | LEICA | HI1220 | |
Laser capture microdissection system | LEICA | LMD7 | Machine |
Laser microdissection microsystem | LEICA | 8.2.3.7603 | Software |
Micromount mounting medium | LEICA | REF.3801731 | |
Microscope cover glass | CITOTEST | REF.10212450C | |
Microtome | LEICA | RM2235 | |
PCR tubes | AXYGEN | 16421959 | |
PEN-membrane slides | LEICA | No.11505158 | |
Re-blue solution | YiLi | 20230326 | |
Ultrapure distilled water | Invitrogen | REF.10977-015 | |
Xylene | PEKING REAGENT | No.33535 |