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방법 논문

생쥐의 대장염 암 모델 확립 및 한의학 치료 효과 평가

2.3K 조회수

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DOI:

10.3791/66045

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2023년 10월 13일

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이 논문에서

요약

이 프로토콜은 덱스트란 황산염 나트륨과 결합된 아조메탄에 의해 유발된 궤양성 결장직장염 관련 대장암의 마우스 모델을 제공합니다. 이 모델은 대장암의 예방 및 치료에서 한의학 화합물의 효능을 평가하는 데 사용되었습니다.

초록

대장암(CRC)은 소화계의 흔한 악성 종양으로 전 세계적으로 세 번째로 흔한 악성 종양이자 악성 종양 관련 사망의 두 번째 주요 원인이 되었습니다. 궤양성 대장막염(UC)은 전암성 병변이며, UC 관련 CRC(UC-CRC)는 CRC의 가장 흔한 하위 유형입니다. 따라서 합리적인 UC-CRC 모델은 신약개발의 초석이자 보장입니다. 중국 전통 의학(TCM)은 효능이 좋기 때문에 UC-CRC 치료에 널리 사용되었습니다. TCM의 고전적인 강장제 처방으로 Liujunzi 달인 (LJZD)은 UC-CRC 치료에 널리 사용되었습니다. 본 연구에서는 아조메탄과 덱스트란 황산나트륨을 혼합하여 UC-CRC 모델을 확립하고, LJZD를 투여하였다. 이 데이터는 LJZD가 생쥐의 체중, 대장 길이, 병리학적 및 염증 인자, 대장 장벽 기능 및 암 마커를 사용하여 UC-CRC에서 암 전이를 효과적으로 억제할 수 있음을 확인했습니다. 이 프로토콜은 UC-CRC의 예방 및 치료에서 TCM의 효능을 평가하기 위한 시스템을 제공합니다.

서론

대장암(CRC)은 흔한 위장관 악성 종양으로, 세계에서 세 번째로 흔한 악성 종양이자 두 번째로 흔한 사망 원인으로, 전 세계 암 발생률의 10%, 전체 암 관련 사망의 9.4%를 차지합니다 1,2. 유전적 요인, 만성 염증, 고지방 식단, 당뇨병 및 비정상적인 장내 세균총은 CRC 3,4의 위험 요인입니다. 그 중에서도 염증성 장 질환, 특히 궤양성 대장막염(UC)은 CRC 5,6의 명백한 위험 인자입니다. UC-associated CRC (UC-CRC)는 대장직장의 만성 염증을 기반으로 하는 염증, 비정형 증식증 및 암의 전이 과정으로, CRC 7,8의 전형적인 선종-선암 발생 모델과는 다릅니다. CRC의 위험은 일반인에 비해 염증성 장질환 환자에서 약 10-40배 더 높다9.

현재....

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프로토콜

동물 시술은 장춘 중의대학 윤리위원회의 승인을 받았습니다(기록 번호: 2021214). 특정 병원체가 없는 C57BL/6J 마우스(8-10주, 체중 18-22g), 수컷 및 암컷은 22°C 및 65% 상대 습도에서 독립적으로 환기되는 케이지에 수용되었습니다. 생쥐는 7 일 적응 먹이 후에 실험을 시작했으며, 그 동안 물과 식단에 자유롭게 접근 할 수있었습니다.

1. 약물 준비

  1. LJZD의 제조
    참고: 사용된 한약은 장춘중의과대학 부속병원에서 구입한 것으로 정품으로 확인되었다( 표 1 참조).
    1. Dangshen (12g), Baizhu (12g), Gancao (6g), Chenpi (12g), Jiangbanxia (9g)를 특수 도자기 냄비에 넣습니다 ( 재료 표 참조). 증류수 1000mL를 넣고 실온에서 1시간 동안 담가둡니다( 그림 1A 참조).
    2. 분말 12g 그라인더로 미세한 분말에 풀링하고 실온에서 1시간 동안 다른 용기에 증류수 300mL를 담근다.
    3. 위의 한약을 특수 도자기 냄비에 섞습니다. 혼합물을 끓인 다음 달인 물....

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결과

LJZD의 달임은 표 1의 약물 조성비와 도 1A의 TCM의 달임방법에 따라 제조하였다. 도 1B에 나타낸 시점에 따라, 마우스는 7일째에 1mg/mL AOM을 복강내로 주사하고, 마우스는 3주, 6주, 9주에 2% DSS를 함유한 식수를 자유롭게 이용할 수 있게 하였다. UC-CRC 마우스 모델은 15주차에 성공적으로 확립되었습니다. 한편, 마우스는 7주차부터 15주차까지 LJZD로 개비지로 처리되었습니다. 데이터는 대조군과 비교하여 UC-CRC 모델 그룹이 상당한 체중 감소를 보였으며 이는 LJZD 치료에 의해 완화되었습니다(그림 2A, P < 0.01). 임상시험이 끝날 무렵, LJZD 치료는 UC-CRC 모델 그룹에 비해 DAI 점.......

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토론

CRC는 전 세계적으로 가장 흔한 암 중 하나로, 매년 약 1,148,000명의 새로운 환자가 발생하고 576,000명 이상이 사망합니다. CRC는 유전성, 산발성 및 UC-CRC31을 포함한 다양한 원인에 따라 세 가지 유형으로 나눌 수 있습니다. UC와 같은 염증성 장 질환 환자에서 CRC의 발생률은 일반 인구보다 훨씬 높습니다. UC는 염증-암 경로를 통해 CRC의 발달을 자극하는데, 이는 전형적인 선종-선암 경로와는 다르다6. 현재 UC-CRC의 원인은 알려져 있지 않으며, 주로 장기간 재발성 만성 염증으로 인해 발생하며 사망률은 최대 60%입니다32,33. 최근 몇 년 동안 연구의 핫스팟이었던 UC-CRC에 대한 효과적인 치료법은 없습니다. UC-CRC의 분자 메커니즘을 이해하는 것은 UC-CRC의 조기 발견 및 정밀 치료에 매우 .......

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 길림성 과학기술부(YDZJ202201ZYTS181)의 지원을 받았다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
아족시 메탄시그마A5486
5-아미노 살리실산Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd3819413
C57BL/6J 마우스랴오닝 Changsheng Biotechnology Co., Ltd210726210100853716
커버 슬립없음 Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd10212432C
DAB 색상 개발 키트Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd2005289
탈수기 무한 Junjie 전자 Co., LtdJJ-12J
덱스트란 황산염 나트륨다롄 Meilun 생명 공학 Co., 주식 회사MB5535
임베딩 기계우한 Junjie 전자 Co., 주식 회사JB-P5
Hematoxylin-eosin 염료우한 100도 생명 공학 Co., 주식 회사B1000
IL-6Jiangsu Meimian Industrial Co., LtdMM-0163M2
IsofluraneRWD Life Science Co., LtdR510-22-10
KI67 일차 항체Google Biotechnology IncGB121141
중성 껌Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd10004160
개체 슬라이드Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd10212432A
Occludin 1차 항체AffnityDF7504
기립성 광학 현미경NikonNikon Eclipse CI
병리학 마이크로톰Shanghai Leica Instrument Co., LtdRM2016
ZO-1 1차 항체Abcamab221547

참고문헌

  1. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 Cancers in 185 Countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Tsai, K. Y., et al.

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재인쇄 및 허가

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