中药中药汤剂在骨肉瘤模型小鼠中的强饲策略
Summary
该方案以骨肉瘤小鼠模型中的益奇节度汤提供了详细的汤剂配方和管饲技术标准化流程。它描述了动物保护，提高了研究数据的可靠性，为研究汤剂 在体内的治疗效果和分子机制提供了有效的策略。
Abstract
汤剂是中医中最常用的剂型，经口给药在临床实践中应用了数千年，其特点是见效快、易吸收、根据患者具体症候进行个体化治疗。汤剂配方的好坏直接关系到中药的临床疗效;因此，汤剂配方的标准化过程对于避免主观因素造成的汤剂质量差异具有重要意义。同时，由于进行临床实验的局限性，携带人类疾病的小动物，如小鼠，经常被用于医学研究，以探索不同干预措施的治疗效果和综合机制，包括中药的汤剂配方。因此，作为一种重要的经口给药方法，熟练的管饲技术对于避免潜在的食管损伤和药物溢出尤为重要，这将确保对每只模型动物施用等量的药物，从而获得准确的实验结果。此外，标准化的汤剂配方制备方法和熟练的管饲策略对于保护动物福利和尽量减少使用动物数量是必要的。在此，我们以益奇节度汤剂在骨肉瘤小鼠模型中报告了煎剂配方和管饲技术的详细标准化过程。通过肿瘤体积评估疗效。该方案将最大限度地保护动物，提高研究数据的可靠性，从而为未来研究中药 汤剂体内的治疗效果和分子机制提供有效的策略。
Introduction
汤剂是中药和药液中最常用的剂型1,2。中药的汤剂配方是将草药浸泡后在水中煎煮，然后过滤以丢弃渣滓。
由于汤剂配方可以根据临床需要进行个体化，特别是符合中医循证治疗的特点，这种经口给药的剂型在临床实践中已有数千年的应用，具有特定且不可替代的优势3,4.汤剂配方的好坏与临床疗效直接相关。因此，必须根据标准化的汤剂方法原理制备汤剂，以确保有效成分得到最大程度的提取和保护3。同时，即饮用药是临床实践中使用的生中草药的主要形式;处方即饮药的质量标准和生产方法必须符合《中国药典》第二版的规定。此外，处方的即食药必须在冷饮水中浸泡至少30分钟，然后才能在特殊的药锅中加热5。研究表明，大部分有效成分可通过煎煮两次来提取，《医疗机构中药煎剂室管理操作规范》也规定煎煮两次4,6,7。如果开了特殊的中草药，例如质地坚硬或滋补品的中草药，建议延长煎煮时间。与汤剂直接接触的汤器皿和储存容器，从浸泡处方即食药物的容器开始，应具有化学稳定性并有盖，例如砂锅菜、陶瓷、玻璃和不锈钢。但是，不应使用铝和普通塑料制品，而应禁止使用铁和其他腐蚀性器皿，以避免可能的化学反应，这会降低治疗效果，甚至产生有害影响4,6,7。
由于进行临床实验的局限性，携带人类疾病的小动物，如小鼠，经常被用于医学研究，以探索不同干预措施的治疗效果和综合机制，包括中药的汤剂配方8,9;然而，与人类不同的是，汤剂配方应每天配制，混合在一起，并在临床实践中每天新鲜给药2次。动物无法自愿按时按规定剂量服药，目前与中药相关的动物实验大多是以管饲法口服的汤剂给药。用于体内动物实验的汤剂配方应提前制备，等分，在-20°C下储存，并在使用前解冻3,4,10。此外，不合格的动物固定和管饲针操作会增加不必要的伤害和负面情绪的风险。因此，作为经口给药的重要方法，熟练的管饲技术对于避免可能的食管损伤和药物溢出尤为重要，从而保证每只模式动物接受等量的处方草药，以达到准确的实验结果。在这里，我们为中药的汤剂配方提供了一个灌胃方案。
Protocol
Representative Results
Discussion
处方药材在中药中的临床疗效很大程度上与给药剂量和剂型有关;因此，在临床实践中，建立标准化的煎剂策略和熟练的给药过程以及提高实验结果的可靠性是必要的。
本研究首先为中药临床实践中药材标准化汤剂提供了详细的策略，便于引导人们科学用药，也切实提高了中药的汤剂质量和临床疗效;因此，一旦实现标准化，将提高草药疗效在临床实践中的准确性和一致性。</p…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究项目由（1）国家自然科学基金（81973877 82174408）、（2）国家重点研发计划（2020YFE0201600）、（3）上海市重点研究中心建设项目（2022ZZ01009）、（4）上海市医院中药制剂产业转化协同创新中心、（5）上海中医药大学预算内研究项目（2021LK047）资助。
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
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