אסטרטגיית Gavage לנוסחת מרתח של הרפואה הסינית המסורתית בעכברי מודל אוסטאוסרקומה
Summary
הפרוטוקול מספק תהליך סטנדרטיזציה מפורט של נוסחת מרתח וטכניקת gavage עם מרתח Yiqi Jiedu במודל העכבר אוסטאוסרקומה כדוגמה. הוא מתאר הגנה על בעלי חיים ומשפר את אמינות נתוני המחקר, ומספק אסטרטגיות יעילות לחקר יעילות טיפולית ומנגנונים מולקולריים של נוסחאות מרתח in vivo.
Abstract
נוסחת מרתח היא צורת המינון הנפוצה ביותר ברפואה הסינית המסורתית ומיושמת בפרקטיקה הקלינית במשך אלפי שנים על ידי מתן דרך הפה, המאופיינת בהשפעה מהירה, ספיגה קלה וטיפול אישי המבוסס על תסמונות ספציפיות של חולים. איכות נוסחת המרתח אחראית ישירות ליעילות הקלינית של הרפואה הסינית המסורתית; לכן, תהליך הסטנדרטיזציה של נוסחת מרתח חשוב כדי למנוע הבדלים באיכות מרתח הנגרמת על ידי גורמים סובייקטיביים. בינתיים, בשל המגבלות של ביצוע ניסויים קליניים, בעלי חיים קטנים הנושאים מחלות אנושיות, כגון עכברים, משמשים לעתים קרובות במחקר רפואי כדי לחקור את היעילות הטיפולית ואת המנגנונים המקיפים של התערבויות שונות, כולל נוסחת מרתח עבור הרפואה הסינית המסורתית. כתוצאה מכך, כשיטת מתן טרנס-אוראלית חשובה, טכניקת ה-gavage המיומנת חשובה במיוחד כדי למנוע נזק פוטנציאלי לוושט ודליפת תרופות, אשר יבטיחו מתן כמות שווה של תרופות לכל חיית מודל, מה שיוביל לתוצאות ניסוי מדויקות. יתר על כן, השיטה הסטנדרטית של הכנת נוסחת מרתח ואסטרטגיית gavage מיומנת נחוצים כדי להגן על רווחת בעלי החיים ולמזער את מספר בעלי החיים בשימוש. כאן, דיווחנו על תהליך סטנדרטיזציה מפורט של נוסחת מרתח וטכניקת gavage עם מרתח Yiqi Jiedu במודל עכבר אוסטאוסרקומה כדוגמה. היעילות הוערכה על ידי נפח הגידול. פרוטוקול זה ימקסם את ההגנה על בעלי חיים וישפר את אמינות נתוני המחקר, ובכך יספק אסטרטגיות יעילות לחקירה עתידית של יעילות טיפולית ומנגנונים מולקולריים של פורמולת מרתח עבור הרפואה הסינית המסורתית in vivo.
Introduction
נוסחת מרתח היא צורת המינון הנפוצה ביותר של הרפואה הסינית המסורתית ותרופות המרפא הנוזליות 1,2. נוסחת המרתח של הרפואה הסינית המסורתית מעובדת על ידי מרתח עשבי תיבול במים לאחר שהושרו, ואחריו סינון כדי להשליך את השאריות.
מכיוון שניתן להתאים אישית את נוסחת מרתח בהתבסס על צרכים קליניים, במיוחד בהתאם למאפיינים של טיפול מבוסס ראיות ברפואה הסינית המסורתית, צורת מינון זו באמצעות מתן דרך הפה מיושמת בפרקטיקה הקלינית במשך אלפי שנים עם יתרונות ספציפיים וחסרי תחליף 3,4. איכות נוסחת מרתח קשורה ישירות ליעילות הקלינית. לכן, נוסחת מרתח חייב להיות מוכן על בסיס העקרונות עבור שיטות מרתח סטנדרטי כדי להבטיח את החומרים הפעילים מופקים באופן מקסימלי מוגן3. בינתיים, תרופות מוכנות מרתח הן הצורה העיקרית של עשבי תיבול סיניים גולמיים המשמשים בפועל קליני; תקני האיכות ושיטות הייצור של תרופות מוכנות מרתח שנקבעו חייבים לעמוד בהוראות הפרמקופיאה הסינית2. יתר על כן, תרופות מרתח מוכן חייב להיות ספוג במי שתייה קרים לפחות 30 דקות לפני להיות decocted בסיר תרופות מיוחד על ידי חימום5. מחקרים הראו כי רוב החומרים הפעילים ניתן לחלץ על ידי decocting במשך פעמיים, ואת הקוד בפועל לניהול חדרי מרתח של תרופות סיניות מסורתיות במוסדות רפואיים גם קובע מרתח להיעשות פעמיים 4,6,7. אם עשבי תיבול סיניים מיוחדים, כגון אחד עם מרקם קשה או טוניקות, נקבעו, זמן מרתח מומלץ להאריך. כלי מרתח ומיכלי אחסון הבאים במגע ישיר עם נוסחת מרתח, החל מן המיכל שבו תרופות מרתח מוכן ספוגים, צריך להיות יציב מבחינה כימית יש מכסים, כגון תבשילי קדרה, קרמיקה, זכוכית נירוסטה. עם זאת, אלומיניום ומוצרי פלסטיק רגילים אין להשתמש, בעוד ברזל וכלים קורוזיביים אחרים יש לאסור כדי למנוע תגובות כימיות אפשריות, אשר יפחיתו את היעילות הטיפולית ואף לייצר השפעות מזיקות 4,6,7.
בשל המגבלות של ביצוע ניסויים קליניים, בעלי חיים קטנים הנושאים את מחלות האדם, כגון עכברים, משמשים לעתים קרובות במחקר רפואי כדי לחקור את היעילות הטיפולית ואת המנגנונים המקיפים של התערבויות שונות, כולל נוסחת מרתח של הרפואה הסינית המסורתית 8,9; עם זאת, בניגוד לבני אדם, נוסחאות מרתח צריך להיות מוכן כל יום, מעורבב יחד, טרי מנוהל 2x ביום בפועל קליני. בעלי חיים אינם מסוגלים לקחת מרצונם את התרופות שלהם בזמן עם המינון הנדרש, ורוב הניסויים בבעלי חיים הקשורים לרפואה הסינית המסורתית הם מתן אוראלי מבוסס gavage של נוסחאות מרתח כיום. נוסחאות המרתח המשמשות לניסויים בבעלי חיים in vivo יש להכין מראש, aliquoted, מאוחסן ב -20 ° C והפשיר ממש לפני השימוש 3,4,10. יתר על כן, אימוביליזציה תת-תקנית של בעלי חיים ומניפולציה של מחטי gavage מגבירים את הסיכון לפציעות מיותרות ולרגשות שליליים. לכן, כשיטה חשובה למתן תרופות דרך הפה, טכניקת ה-gavage המיומנת חשובה במיוחד כדי למנוע פגיעה אפשרית בוושט ושפיכת סמים, ובכך להבטיח שכל חיית מודל תקבל כמות שווה של צמחי מרפא במרשם כדי להשיג תוצאות ניסוי מדויקות. כאן, אנו מספקים פרוטוקול gavage עבור נוסחת מרתח של הרפואה הסינית המסורתית.
Protocol
Representative Results
Discussion
היעילות הקלינית של צמחי המרפא שנקבעו ברפואה הסינית המסורתית קשורה במידה רבה למינון ולצורת המינון המנוהלים; לכן, הקמת אסטרטגיית מרתח סטנדרטית ותהליך ניהול מיומן נחוצים בפועל הקליני, כמו גם בשיפור האמינות של תוצאות הניסוי.
במחקר זה, סיפקנו לראשונה אסטרטגיה מפורטת עבור מרתח ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
העבודה הנוכחית נתמכת על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע (81973877 ו-82174408), (2) תוכנית המו”פ הלאומית של סין (2020YFE0201600), (3) פרויקט הבנייה של מרכז המחקר בעדיפות עליונה בשנגחאי (2022ZZ01009), (4) מרכז החדשנות השיתופית של שנגחאי לשינוי תעשייתי של הכנת TCM בבית החולים, ו-(5) פרויקטי מחקר במסגרת התקציב של אוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
References
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).
