Strategia del sonda gastrica per la formula di decotto della medicina tradizionale cinese nei topi modello di osteosarcoma
Summary
Il protocollo fornisce un processo di standardizzazione dettagliato della formula di decotto e della tecnica del gavage con il decotto Yiqi Jiedu nel modello murino di osteosarcoma come esempio. Descrive la protezione degli animali e migliora l’affidabilità dei dati della ricerca, fornendo strategie efficaci per studiare l’efficacia terapeutica e i meccanismi molecolari delle formule di decotto in vivo.
Abstract
La formula del decotto è la forma di dosaggio più comunemente usata nella medicina tradizionale cinese e applicata nella pratica clinica da migliaia di anni mediante somministrazione transorale, che è caratterizzata da un effetto rapido, un facile assorbimento e un trattamento individualizzato in base alle sindromi specifiche dei pazienti. La qualità della formula del decotto è direttamente responsabile dell’efficacia clinica della medicina tradizionale cinese; Pertanto, il processo di standardizzazione della formula del decotto è importante per evitare differenze nella qualità del decotto causate da fattori soggettivi. Nel frattempo, a causa dei limiti dell’esecuzione di esperimenti clinici, i piccoli animali portatori di malattie umane, come i topi, sono spesso utilizzati nella ricerca medica per esplorare l’efficacia terapeutica e i meccanismi completi di diversi interventi, inclusa la formula del decotto per la medicina tradizionale cinese. Di conseguenza, essendo un importante metodo di somministrazione transorale, la tecnica del gavage è particolarmente importante per evitare potenziali danni all’esofago e fuoriuscite di farmaci, che garantiranno la somministrazione di una quantità uguale di farmaco a ciascun animale modello, portando a risultati sperimentali accurati. Inoltre, il metodo standardizzato di preparazione della formula di decotto e la strategia di gavage qualificata sono necessari per proteggere il benessere degli animali e ridurre al minimo il numero di animali utilizzati. Qui, abbiamo riportato un processo di standardizzazione dettagliato della formula di decotto e della tecnica del gavage con il decotto Yiqi Jiedu nel modello murino di osteosarcoma come esempio. L’efficacia è stata valutata in base al volume del tumore. Questo protocollo massimizzerà la protezione degli animali e migliorerà l’affidabilità dei dati della ricerca, fornendo quindi strategie efficaci per studiare in futuro l’efficacia terapeutica e i meccanismi molecolari della formula di decotto per la medicina tradizionale cinese in vivo.
Introduction
La formula del decotto è la forma di dosaggio più comunemente usata della medicina tradizionale cinese e dei farmaci medicinali liquidi 1,2. La formula del decotto della medicina tradizionale cinese viene elaborata decondo le erbe in acqua dopo essere state messe a bagno, seguite da un filtraggio per scartare la feccia.
Poiché la formula del decotto può essere individualizzata in base alle necessità cliniche, soprattutto in linea con le caratteristiche del trattamento basato sull’evidenza nella medicina tradizionale cinese, questa forma di dosaggio tramite somministrazione transorale è stata applicata nella pratica clinica per migliaia di anni con vantaggi specifici e insostituibili 3,4. La qualità della formula del decotto è direttamente correlata all’efficacia clinica. Pertanto, la formula del decotto deve essere preparata in base ai principi dei metodi di decozione standardizzati per garantire che i principi attivi siano estratti e protetti al massimo3. Nel frattempo, i farmaci pronti per il decotto sono la principale forma di erbe cinesi crude utilizzate nella pratica clinica; gli standard di qualità e i metodi di produzione dei medicinali pronti per il decotto prescritti devono essere conformi alle disposizioni della farmacopea cinese2. Inoltre, i medicinali pronti per il decotto prescritti devono essere immersi in acqua potabile fredda per almeno 30 minuti prima di essere decotti in una speciale pentola farmaceutica riscaldando5. Gli studi hanno dimostrato che la maggior parte dei principi attivi può essere estratta per decozione per due volte, e il Codice di condotta per la somministrazione di sale di decottaggio di medicine tradizionali cinesi nelle istituzioni mediche prescrive anche il decotto da fare due volte 4,6,7. Se vengono prescritte erbe cinesi speciali, come una con consistenza dura o tonici, si consiglia di prolungare il tempo di decotto. Gli utensili per il decotto e i contenitori per la conservazione che entrano direttamente in contatto con la formula del decotto, a partire dal contenitore in cui vengono immersi i medicinali pronti per il decotto prescritti, devono essere chimicamente stabili e dotati di coperchi, come casseruole, ceramica, vetro e acciaio inossidabile. Tuttavia, l’alluminio e i normali prodotti in plastica non dovrebbero essere utilizzati, mentre il ferro e altri utensili corrosivi dovrebbero essere vietati per evitare possibili reazioni chimiche, che ridurrebbero l’efficacia terapeutica e produrrebbero persino effetti dannosi 4,6,7.
A causa dei limiti dell’esecuzione di esperimenti clinici, i piccoli animali portatori di malattie umane, come i topi, sono spesso utilizzati nella ricerca medica per esplorare l’efficacia terapeutica e i meccanismi completi di diversi interventi, tra cui la formula del decotto della medicina tradizionale cinese 8,9; Tuttavia, a differenza degli esseri umani, le formule di decotto dovrebbero essere preparate ogni giorno, mescolate insieme e somministrate fresche 2 volte al giorno nella pratica clinica. Gli animali non sono in grado di assumere volontariamente i loro farmaci in tempo con il dosaggio richiesto, e la maggior parte degli esperimenti sugli animali relativi alla medicina tradizionale cinese sono attualmente somministrazione orale basata sul gavage delle formule di decotto. Le formule di decotto utilizzate per gli esperimenti in vivo sugli animali devono essere preparate in anticipo, aliquotate, conservate a -20 °C e scongelate appena prima dell’uso 3,4,10. Inoltre, l’immobilizzazione degli animali scadente e la manipolazione dell’ago da assembramento aumentano il rischio di lesioni inutili ed emozioni negative. Pertanto, come importante metodo di somministrazione transorale di farmaci, la tecnica del gavage è particolarmente importante per evitare possibili lesioni esofagee e fuoriuscite di farmaci, garantendo così che ogni animale modello riceva una quantità uguale di medicina erboristica prescritta per ottenere risultati sperimentali accurati. Qui, forniamo un protocollo di gavage per la formula di decotto della medicina tradizionale cinese.
Protocol
Representative Results
Discussion
L’efficacia clinica delle erbe prescritte nella medicina tradizionale cinese è in gran parte associata alla dose somministrata e alla forma di dosaggio; Pertanto, l’istituzione di una strategia di decotto standardizzata e di un processo di somministrazione qualificato sono necessari nella pratica clinica, nonché per migliorare l’affidabilità dei risultati sperimentali.
In questo studio, abbiamo prima fornito una strategia dettagliata per il decotto standardizzato di erbe cinesi utilizzate n…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
L’attuale lavoro è supportato da sovvenzioni della (1) National Nature Science Foundation (81973877 e 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) Progetto di costruzione del Shanghai Top Priority Research Center (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation e (5) Progetti di ricerca nell’ambito del budget dell’Università di Medicina Tradizionale Cinese di Shanghai (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
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