Estratégia de Gavagem para Fórmula de Decocção da Medicina Tradicional Chinesa em Camundongos Modelo de Osteossarcoma
Summary
O protocolo fornece um processo detalhado de padronização da fórmula de decocção e técnica de gavagem com decocção Yiqi Jiedu no modelo de osteossarcoma de camundongos como exemplo. Descreve a proteção animal e melhora a confiabilidade dos dados de pesquisa, fornecendo estratégias eficazes para investigar a eficácia terapêutica e os mecanismos moleculares das fórmulas de decocção in vivo.
Abstract
A fórmula de decocção é a forma farmacêutica mais utilizada na medicina tradicional chinesa e aplicada na prática clínica há milhares de anos por administração transoral, que se caracteriza por efeito rápido, fácil absorção e tratamento individualizado baseado nas síndromes específicas dos pacientes. A qualidade da fórmula de decocção é diretamente responsável pela eficácia clínica da medicina tradicional chinesa; Portanto, o processo de padronização da fórmula de decocção é importante para evitar diferenças na qualidade da decocção causadas por fatores subjetivos. Enquanto isso, devido às limitações da realização de experimentos clínicos, pequenos animais portadores de doenças humanas, como camundongos, são frequentemente usados em pesquisas médicas para explorar a eficácia terapêutica e mecanismos abrangentes de diferentes intervenções, incluindo a fórmula de decocção para a medicina tradicional chinesa. Consequentemente, como um importante método de administração transoral, a técnica de gavagem habilidosa é particularmente importante para evitar possíveis danos ao esôfago e derramamento de drogas, o que garantirá uma quantidade igual de medicamento sendo administrada a cada animal modelo, levando a resultados experimentais precisos. Além disso, o método padronizado de preparação da fórmula de decocção e a estratégia de gavagem habilidosa são necessários para proteger o bem-estar animal e minimizar o número de animais utilizados. Aqui, relatamos um processo detalhado de padronização da fórmula de decocção e técnica de gavagem com decocção Yiqi Jiedu em modelo de osteossarcoma em camundongos como exemplo. A eficácia foi avaliada pelo volume tumoral. Este protocolo maximizará a proteção animal e melhorará a confiabilidade dos dados de pesquisa, fornecendo estratégias eficazes para futuras investigações da eficácia terapêutica e dos mecanismos moleculares da fórmula de decocção para a medicina tradicional chinesa in vivo.
Introduction
A fórmula de decocção é a forma farmacêutica mais utilizada da medicina tradicional chinesa e dos medicamentos líquidos 1,2. A fórmula de decocção da medicina tradicional chinesa é processada pela decodificação das ervas em água após serem embebidas e, seguidas de filtragem para descartar as borras.
Como a fórmula de decocção pode ser individualizada com base nas necessidades clínicas, especialmente de acordo com as características do tratamento baseado em evidências na medicina tradicional chinesa, essa forma farmacêutica via administração transoral tem sido aplicada na prática clínica há milhares de anos com vantagens específicas e insubstituíveis 3,4. A qualidade da fórmula de decocção está diretamente relacionada à eficácia clínica. Portanto, a fórmula de decocção deve ser preparada com base nos princípios dos métodos de decocção padronizados para garantir que os ingredientes ativos sejam maximamente extraídos e protegidos3. Enquanto isso, os medicamentos prontos para decocção são a principal forma de ervas chinesas cruas usadas na prática clínica; as normas de qualidade e os métodos de produção dos medicamentos prontos para decocção prescritos devem respeitar as disposições da Farmacopeia Chinesa2. Além disso, os medicamentos prontos para decocção prescritos devem ser embebidos em água fria por pelo menos 30 minutos antes de serem decocados em uma panela farmacêutica especial por aquecimento5. Estudos têm mostrado que a maioria dos princípios ativos pode ser extraída por decocção por duas vezes, e o Código de Prática para a Administração de Salas de Decocção de Medicamentos Tradicionais Chineses em Instituições Médicas também prescreve decocção para ser feita duas vezes 4,6,7. Se ervas chinesas especiais, como uma com textura dura ou tônicos, são prescritas, o tempo de decocção é recomendado para ser prolongado. Os utensílios de decocção e recipientes de armazenamento que entram diretamente em contato com a fórmula de decocção, a partir do recipiente em que os medicamentos prontos para decocção prescritos estão embebidos, devem ser quimicamente estáveis e ter tampas, como caçarolas, cerâmicas, vidro e aço inoxidável. No entanto, o alumínio e os produtos plásticos comuns não devem ser utilizados, enquanto o ferro e outros utensílios corrosivos devem ser proibidos para evitar possíveis reações químicas, que reduzirão a eficácia terapêutica e até produzirão efeitos nocivos 4,6,7.
Devido às limitações da realização de experimentos clínicos, pequenos animais portadores de doenças humanas, como camundongos, são frequentemente utilizados em pesquisas médicas para explorar a eficácia terapêutica e mecanismos abrangentes de diferentes intervenções, incluindo a fórmula de decocção da medicina tradicional chinesa 8,9; No entanto, ao contrário dos seres humanos, as fórmulas de decocção devem ser preparadas todos os dias, misturadas e administradas na hora 2x ao dia na prática clínica. Os animais são incapazes de tomar voluntariamente seus medicamentos a tempo com a dosagem necessária, e a maioria dos experimentos animais relacionados à medicina tradicional chinesa são administração oral baseada em gavagem das fórmulas de decocção no momento. As fórmulas de decocção utilizadas para experimentos in vivo com animais devem ser preparadas previamente, alíquotas, armazenadas a -20 °C e descongeladas imediatamente antes do uso 3,4,10. Além disso, a imobilização de animais abaixo do padrão e a manipulação com agulhas de gavagem aumentam o risco de lesões desnecessárias e emoções negativas. Portanto, como um importante método de liberação transoral de fármacos, a técnica de gavagem habilidosa é particularmente importante para evitar possíveis lesões esofágicas e derramamento de drogas, garantindo assim que cada animal modelo receba uma quantidade igual de fitoterápicos prescritos para alcançar resultados experimentais precisos. Aqui, fornecemos um protocolo de gavagem para a fórmula de decocção da medicina tradicional chinesa.
Protocol
Representative Results
Discussion
A eficácia clínica das ervas prescritas na medicina tradicional chinesa está amplamente associada com a dose administrada e forma de dosagem; Portanto, o estabelecimento de uma estratégia padronizada de decocção e um processo de administração habilidoso são necessários na prática clínica, bem como na melhoria da confiabilidade dos resultados experimentais.
Neste estudo, nós primeiro fornecemos uma estratégia detalhada para a decocção padronizada de ervas chinesas usadas na prá…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
O trabalho atual é apoiado por subsídios da (1) National Nature Science Foundation (81973877 e 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) Shanghai Top Priority Research Center building project (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation, e (5) Projetos de Pesquisa dentro do Orçamento da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
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