우리는 청소년 C57BL/6 마우스를 위한 가속 사회적 패배 스트레스 모델을 개발했는데, 이는 남성과 여성 모두에게 작용하고 불연속적인 청소년 기간 동안 노출을 허용합니다. 이 모델에 대한 노출은 사회적 회피를 유발하지만, 패배한 수컷과 암컷 쥐의 하위 집합에서만 가능합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
청소년기의 사회적 역경은 널리 퍼져 있으며 정신 건강 궤적에 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다. 청소년 남성과 여성 설치류의 사회적 스트레스를 모델링하는 것은 지속적인 뇌 발달 및 행동 결과에 미치는 영향을 이해하는 데 필요합니다. 만성 사회적 패배 스트레스 패러다임(CSDS)은 자신의 영역을 침범하는 침입자에 대해 성인 남성 설치류가 보여주는 공격적인 행동을 활용하여 성인 C57BL/6 수컷 마우스의 사회적 스트레스를 모델링하는 데 널리 사용되었습니다. 이 패러다임의 장점은 패배한 쥐를 마지막 패배 세션 후 24시간 후 사회적 행동의 개인차에 따라 탄력적이고 감수성이 있는 그룹으로 분류할 수 있다는 것입니다. 청소년 C57BL/6 마우스에서 이 모델을 구현하는 것은 성인 또는 청소년 마우스가 일반적으로 초기 청소년 남성 또는 여성 마우스를 공격하지 않고 청소년기는 짧은 수명이며 신중한 시간적 취약성 창을 포함하기 때문에 어려웠습니다. 이러한 한계는 CSDS의 가속 버전을 사춘기 수컷 및 암컷 마우스에 사용하도록 조정함으로써 극복되었습니다. 하루에 2번의 신체적 공격 세션으로 구성된 이 4일 스트레스 패러다임은 C57BL/6 남성 성인을 사용하여 CD-1 마우스의 공격성을 프라이밍하여 남성 또는 여성 청소년 마우스를 쉽게 공격합니다. 이 모델은 청소년 마우스에 대한 가속 사회적 패배 스트레스(AcSD)라고 불렸습니다. AcSD에 대한 청소년 노출은 남성과 여성 모두에서 24시간 후에 사회적 회피를 유발하지만, 패배한 쥐의 하위 집합에서만 유발됩니다. 이 취약성은 복구 가능한 그룹과 취약한 그룹 간의 세션 간에 일관된 공격 수에도 불구하고 발생합니다. AcSD 모델은 청소년기 내의 불연속적인 기간 동안 노출을 허용할 만큼 충분히 짧고, 사회적 회피 행동의 유무에 따라 마우스를 분리할 수 있으며, 청소년 C57BL/6 암컷 마우스의 사회적 패배 스트레스를 연구할 수 있는 최초의 모델입니다.
서론
만성 사회적 패배 스트레스 패러다임은 성인 출생 후 일(PND) >65 남성 설치류의 사회적 스트레스를 모델링하는 데 널리 사용됩니다. 이 패러다임은 침입자가 자신의 영역을 침범했을 때 성인 남성 설치류의 자연스러운 공격적인 행동을 기반으로합니다. 이 모델은 쥐, 햄스터 및 생쥐 1,2,3,4,5,6,7,8,9를 포함한 다양한 설치류 종에 사용되며, 약 10 일 동안 지속되는 신체적 공격성과 심리적 스트레스의 조합으로 구성되며, 그 동안 침입자 설치류는 거주 설치류로부터 몇 분의 신체적 공격성을 실험합니다. 두 마리의 설치류는 거주자의 집 우리에 남아 있으며, 감각은 가능하지만 신체 접촉은 허용하지 않는 칸막이로 분리되어 있습니다
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
실험 절차는 캐나다 동물 보호 협의회(Canadian Council of Animal Care)의 지침에 따라 수행되었으며 McGill University 및 Douglas Hospital Animal Care Committee(동물 실험 승인 번호: 2005-5084)의 승인을 받았습니다. 모든 마우스는 더글라스 정신 건강 대학 연구소(Douglas Mental Health University Institute)의 신경 표현형 센터(Neurophenotyping Centre)에서 온도 및 습도 조절(21-22 °C; 60%) 콜로니 룸과 12시간 연암주기 (8:00 h에 점등)에 수용되었습니다. 쥐는 실험 내내 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있었습니다. 마우스는 각 실험 조건에 무작위로 할당되었습니다. 실험 동물은 상업적인 출처로부터 얻어졌다( 재료 표 참조). 표 2 는 각 실험 단계에 대한 동물의 특성을 요약한 것이다. 총 489마리의 청소년 C57BL/6J 마우스(남성 259명, 여성 230명)가 20개의 실험 코호트에 걸쳐 사용되었습니다.
표 2: 각 실험 단계에 대한 동물 피험자. ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
청소년 C57BL/6 수컷 마우스(PND 21)에서 만성 사회적 패배 스트레스 모델을 사용하여 총 4가지 다른 실험을 수행했습니다. 그러나, 이 모델은 초기 사춘기 C57BL/6 마우스에서의 사용에 대한 중요한 제한사항을 제시하였다.
청소년 C57BL/6 마우스에 대한 장비 수정이 필요한 경우
첫 번째 한계는 사회적 패배 장치에 사용 된 장비가 성인 쥐 용으로 설계되었다는 것입니다. 그들의 크기 때문에, PND 21에서 청소년 C57BL/6 마우스는 칸막이의 천공을 통해 공격자 측으로 통과할 수 있었다. 이것은 감각 접촉의 기간을 중단시켰다. 또한, 사춘기 쥐는 철사 상판의 창살을 통해 탈출할 수 있었습니다. 따라서 쥐의 탈출을 방지하기 위해 장비를 수정했습니다(그림 1). 천공의 직경은 1.1cm에서 0.6cm로 변경되었으며(그림 1B).......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
CD-1 마우스에서 일관되고 공격적인 행동
스크리닝 단계에서는 CD-1이 나타내는 모든 행동(쫓기, 장착 동작, 킁킁거리기, 손질하기 또는 무는 행동)을 기록하고 AcSD용 CD-1 마우스를 선택할 때 이러한 기록을 면밀히 따르는 것이 매우 중요합니다. CD-1 마우스가 청소년 마우스를 공격하지 않고 상호 작용하면 프라이밍 중에 청소년 마우스에 대한 공격성이 발생할 가능성이 있습니다. 대조적으로, 성체 쥐를 공격하지만 청소년 쥐에게 접근하지 않는 CD-1 쥐는 아마도 청소년 쥐에 대한 공격성을 발달시키지 않을 것입니다.
CD-1 프라이밍 단계는 청소년 마우스에 대한 공격적인 행동을 발달시킬 수 있습니다. 따라서 동작의 정확한 등록을 갖는 것이 마우스 선택에 중요합니다. 더욱이, CD-1 마우스가 이전에 패배를 겪은 경우에도 새로운 실험을 하기 전에 항상 CD-1 마우스를 스크리닝하는 것이 중요합니다. 일부 CD-1 마우스는 일정 기간 동안 집 .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 밝힐 것이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 캐나다 보건 연구소(Canadian Institutes for Health Research, CF 보조금 번호: MOP-74709; PJT 190045), 국립 약물 남용 연구소(CF 보조금 번호: R01DA037911), 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(CF 보조금 번호: 2982226). Andrea Pantoja-Urban은 멕시코의 The National Council for Humanities, Science and Technologies/Consejo Nacional de Humanidades, Ciencias y Tecnologías(CONAHCYT) 및 FRQNT - 외국인 학생을 위한 우수 장학금 프로그램(PBEEE)의 지원을 받았습니다. 사무엘 리처(Samuel Richer)는 맥길 대학교(McGill University)의 신경과학 통합 프로그램(Integrated Program of Neuroscience)의 장학금을 받았습니다. 그림 일러스트레이션은 BioRender.com 의 템플릿을 사용하여 제작되었습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| C57BL/6 청소년 마우스 | 사내 사육 | 마우스는 Douglas Mental Health University Institute의 신경 표현형 분석 센터에서 사육되었습니다. | |
| C57BL/성인 마우스 6마리 | Charles River Laboratories | 스트레인 코드: 027 | 마우스는 PND>65에 도달하도록 주문되며 표준 마우스 케이지에 그룹 수용(케이지당 4개의 마우스)됩니다. |
| C57BL/6J 청소년 마우스 | Jackson Labs | 스트레인 코드: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664 | 마우스는 PND 24에 도착하도록 주문되며 표준 마우스 케이지에 그룹 수용(케이지당 4개의 마우스)됩니다. |
| CD-1 마우스 | Charles River Laboratories | 스트레인 코드 : 022 | 생쥐는 3 개월 이상 된 사육자를 은퇴하고 전체적으로 독신으로 사육했습니다. |
| 세척액 | Virox Animal Health | DIN 02537222 | 우선: 가속 과산화수소. 소독제 클리너 및 탈취제. |
| 투명 퍼포레이티드 아크릴 유리 분배자 | 더글러스 병원에서 제조, 맞춤 주문 | 0.6 cm (w) × 45.7 cm (d) × 22.23 cm (h); 0.6 cm 직경의 천공. 칸막이에는 구멍이 뚫려 있어 한 쌍의 생쥐 사이에 감각적이지만 물리적 접촉은 없습니다. | |
| 투명한 직사각형 쥐 케이지 | 앨런 타운 | 24cm (w) × 48.3 cm (d) × 22.23 (h). | |
| 침구 용 코튼 스퀘어 | Inotiv Envigo | T.6060 iso-BLOX | 2.5 cm x 2.5 cm. 사회적 패배 장치에 추가되었습니다. |
| 단단한 나무 조각 침구 | Inotiv Envigo | Teklad 7090, 7115 | Sani 칩 침구. |
| 강철 와이어 상판을 고정하기 위한 대형 바인더 클립 | STAPLES | 품목 #: 132429, 모델 #: 24178-CA | 51mm |
| 강철 와이어 상판을 고정하기 위한 중간 바인더 클립 | 품목 #: 132367, 모델 #: 24172-CA | 32mm, 쥐 케이지의 덮개 뚜껑이 큰 클립으로 닫히지 않는 경우 | |
| 연고가 아님), 2 항생제와 리도카인 염산염 | |||
| 쌍을 이룬 스틸-와이어 상판 | 24 cm (w) × 그릴 사이에 0.6 cm (w) 간격이 있는 48 cm (d) | ||
| 탈착식 와이어 메쉬 인클로저 | 존스턴 산업용 플라스틱 | 11 cm (w) × 6.8 cm (d) × 42 cm (h) 맞춤 주문; 사전 절단된 투명 폴리카보네이트에 고정된 사회적 상호작용 테스트 경기장당 두 개 | |
| 사회적 상호작용 오픈 필드 경기장 | PEXIGLAS | 45 cm (w) × 45 cm (d) × 49 cm (h), 불투명한 아크릴 유리 (Plexiglas)로 맞춤 제작 | |
| 스톱워치 | 타이밍 패배 세션용 | ||
| 적외선이 있는 비디오 카메라 | 스완 | SRDVR-44580V | Swann 카메라 - 4채널 1080p 디지털 비디오 레코더 및 2 x PRO-T853 |
| 비디오 추적 소프트웨어 | Topscan | 2.0 영리한 체계 Inc. |
참고문헌
- Miczek, K. A. A new test for aggression in rats without aversive stimulation: Differential effects of d-amphetamine and cocaine. Psychopharmacology. 60, 253-259 (1979).
- Kudryavtseva, N., Bakshtanovskaya, I., Koryakina, L. Social m....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
