동종이식 거부 반응 연구를 위한 간절개술을 활용하는 이주제 보조 전체 간 쥐 이식 모델

Bret Verhoven; Weifeng Zeng; Peter Chlebeck; Kristina Matkowskyj; Heather Jennings; Samuel Poore; David Al-Adra

doi:10.3791/66516

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방법 논문

동종이식 거부 반응 연구를 위한 간절개술을 활용하는 이주제 보조 전체 간 쥐 이식 모델

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DOI:

10.3791/66516

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2024년 3월 8일

Bret Verhoven¹ , Weifeng Zeng² , Peter Chlebeck¹ , Kristina Matkowskyj³^,⁴^,⁵ , Heather Jennings¹ , Samuel Poore² , David Al-Adra¹

¹Department of Surgery, School of Medicine and Public Health, University of Wisconsin-Madison, ²Department of Surgery, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, University of Wisconsin, ³Department of Pathology and Laboratory Medicine, School of Medicine and Public Health, University of Wisconsin-Madison, ⁴UW Carbone Cancer Center, ⁵William S. Middleton Memorial Veterans' Hospital

이 논문에서

요약

여기에 설명된 쥐 이소성 보조 간 이식 프로토콜은 간 동종이식 거부 반응의 메커니즘을 탐색하기 위한 실용적인 조사 도구를 제공합니다. 이 모델은 쥐의 정형소 간 이식의 수술 장애물과 동물의 스트레스를 완화하는 데 도움이 됩니다.

초록

소동물 이식 모델은 전임상 연구에서 실현 가능한 치료 개입을 조사하는 장기 내성 연구에 필수적입니다. 쥐 간 이식(LTx) 프로토콜은 일반적으로 수혜자의 원래 간을 제거하고 기증자 간으로 대체하는 정형외과 모델을 사용합니다. 기술적으로 까다로운 이 수술 절차는 고급 미세 수술 기술을 필요로 하며 장시간의 무간 및 하체 허혈로 인해 더욱 복잡합니다. 이로 인해 무간 또는 하체 허혈 시간 없이 더 빠르게 수행할 수 있는 덜 복잡한 이종 요법의 개발이 촉진되어 이식 동물의 수술 후 스트레스를 줄일 수 있습니다.

이 이종성 LTx 프로토콜에는 두 가지 주요 단계가 포함됩니다: 기증자 쥐에서 간을 절제하고 간 전체를 수혜자 쥐에 이식하는 것입니다. 기증자의 간을 절제하는 동안 외과의는 상간대정맥(SHVC)과 간동맥(HA)을 결찰합니다. 수혜자 측에서 외과의는 왼쪽 신장을 제거하고 기증자의 간을 문맥(PV), 하부간대정맥(IHVC) 및 담관이 신장 혈관을 향하도록 배치합니다. 또한, 외과의는 간의 IHVC로 수혜자의 신정맥을 끝에서 끝까지 문합하고 스텐트를 사용하여 PV를 신장 동맥과 동맥화합니다. 간절개술은 담관을 수혜자의 요관으로 문합하여 담즙이 방광을 통해 담즙이 배출될 수 있도록 하여 담즙 배출에 사용됩니다.

평균 이식 시간은 130분, 냉허혈 기간은 약 35분, 온열 허혈 기간은 25분 미만이었습니다. 신유전자 이식으로 인한 보조 간의 헤마톡실린(Hematoxylin)과 에오신 조직학(eosin histology)은 이식 후 30일 동안 유의한 실질 변화 없이 정상적인 간세포 구조를 보여주었다. 대조적으로, 이식 후 8일 후 동종 이식편 표본은 Banff Schema 거부 반응 활성 지수 점수가 9로 광범위한 림프구 침투를 보여주었습니다. 따라서 이 LTx 방법은 정소성 LTx에 대한 낮은 이환율 거부 모델을 용이하게 합니다.

서론

소동물 LTx는 간 거부 반응을 일으키는 기전을 조사하는 데 매우 유용한 모델입니다. 쥐에서 문맥 동맥 삽입술을 동반한 이소성 보조 간 이식(HALT-PVA)은 1968년 Lee와 Edgington1에 의해 소개되었는데, 당시 수혜자의 신장 정맥과 동맥을 사용하여 이식된 보조 간을 재혈관화한다고 보고했습니다. 그 후, Hess 등^[2]은 기증자 담관 연결을 재구성하는 것과 함께 본래 간과 기증자 간 크기를 줄임으로써 본래 간과 보조 간 간의 기능적 경쟁을 완화하여 프로토콜을 강화하여 이식편의 장기 생존을 초래했습니다. 커프 문합 ^3,4의 도입으로 추가적인 개선이 이루어졌으며, Schleimer 등5은 생리학적 문맥 흐름을 얻고 이식편의 과관류 또는 저관류를 피하기 위해 혈류를 조절하기 위한 최적의 스텐트 직경^{을 결정했습니다.} 다른 연구자들은 이식 혈액 공급을 위해 비장⁶ 또는 총장골⁷ 동맥을 사용하여 방법을 크게 변경....