광학 이미징과 비침습 감지를위한 형광 염료와 함께 줄기 세포를 라벨링
Summary
이 동영상은 형광 염료와 인간 배아 줄기 세포 및 mesenchymal 줄기 세포의 라벨에 대한 기술을 보여줍니다. 이 기술은 광학 이미징과 이식 줄기 세포의 생체내 추적에와 형광 현미경과 histopathological 상관 관계에 대해 사용할 수 있습니다.
Abstract
광학 이미징 (오이)는 새로운 줄기 세포 기반 요법의 생체내 모니터링을 위해 쉽고, 빠르고 저렴한 도구입니다. 이 기술은 형광 염료, 특정 대상 기관 또는 pathologies들의 축적의 라벨 세포 및 시각화의 후속 정맥 주사와 함께 줄기 세포의 생체내 전 라벨에 따라 달라집니다. 제공 기술나요 (C67H103CIN2O3S)와 우리가 인간 배아의 줄기 세포를 (hESC) 라벨을 어떻게 FDA는 형광 염료가 그린 (ICG)을 Indocyanine 승인을 우리가 lipophilic 형광 염료와 함께 간단하게 부화하여 인간 mesenchymal 줄기 세포 (hMSC)를 분류하는 방법을 보여줍니다. 이해 메커니즘은 인지질의 세포 막 이중층에 걸쳐 lypophilic 염료의 준수 및 확산을 통해이다. 세포와 같은 혈청 함유 미디어 부화 반대로 혈청없는 미디어의 염료와 incubated하는 경우 라벨의 효율은 일반적으로 향상됩니다. 또한, transfection 에이전트 프로타민 황산의 추가가 대비 에이전트 이해를 크게 향상시킵니다.
Protocol
Discussion
오이는 형광의 감지에 따라 비교적 새로운 이미징 기술입니다. 오이는 radiotracer 기반 이미징 기술을 같이 구분하지만, 모든 방사선 노출과 관련되지 않았습니다. 오이는이를 대상 사이트에 셀 마이 그 레이션에 대한 통찰력을 제공하는 비 invasively하고 반복적으로 추적 세포의 효과적인 수단을 제공합니다. 기술 중 하나는 주요 제한은 생체내에 형광 프로브의 제한된 조직 침투입니다. 따라서 피부 표면 5-10cm에 ?…
Acknowledgements
이 프로젝트는 재생 의료에 대한 캘리포니아 연구소에서 레온 J. Thal 시드 부여에 의해 지원되었다. 토바 이어스 헤닝는 독일 연구 협회 (DFG, HE 4578/1-2)에서 급비 연구에 의해 투자되었다. 우리는 기꺼이 그 인간의 배아 줄기 세포의 문화에 대한 그의 조언 후아의 Meneses을 인정 싶어요.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Indocyanine Green (IR-125) | Reagent | Fisher Scientific | AC41254-1000 | |
| DMSO | Reagent | Sigma | D-2650 | |
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | Dilute to final concentration of 0.1% in PBS |
| PBS, Mg and Ca free | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FCS, characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Reagent | BD Falcon | 352340 | |
| DiD | Reagent | Molecular Probes | V-22887 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine 200mM | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Protamine Sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners Inc. |
References
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