Denna video visar tekniker för märkning av mänskliga embryonala stamceller och mesenkymala stamceller med fluorescerande färger. Denna teknik kan användas för en in vivo-spårning av transplanterade stamceller med optisk avbildning och för histopatologisk samband med fluorescensmikroskopi.
Abstract
Optisk avbildning (OI) är ett enkelt, snabbt och billigt verktyg för in vivo-övervakning av nya baserade stamcellsterapi. Tekniken bygger på ex vivo märkning av stamceller med en fluorescerande färg, därefter intravenös injektion av de märkta cellerna och visualisering av deras ackumulering i specifika målorgan eller sjukdomar. De presenterade tekniken visar hur vi märker mänskliga mesenkymala stamceller (hMSC) genom en enkel inkubering med lipofila fluorescerande färg gjorde (C67H103CIN2O3S) och hur vi märker mänskliga embryonala stamceller (hESC) med FDA godkända fluorescerande färg indocyaningrönt (ICG). Upptaget mekanismen är via vidhäftning och spridning av lypophilic färgämnet över fosfolipid cellmembranet tvåskiktsmembran. Märkningen effektiviteten är oftast bättre om cellerna inkuberas med färgen i serum-fria medier i motsats till inkubation i serum innehållande media. Dessutom förbättras tillägg av transfektion agenten protaminsulfat signifikant upptag kontrastmedel.
Protocol
Märkning av mesenkymala stamceller med fluorescerande färg DiD Till att börja proceduren för märkning av mesenkymala stamceller, trypsinize och räkna cellerna för att få en suspension med ett definierat antal celler. Ta cellerna ur kuvösen och aspirera ut gamla media från flaskor som innehåller de celler som ska märkas Tvätta cellerna med 10 ml Mg / Ca-fri PBS. Sug ut PBS. Den Mg och Ca skulle hindra trypsin, därför använder vi PBS utan dessa. Lägg förvärmda 0,0…
Discussion
OI är en relativt ny bildteknik, som bygger på detektering av fluorescens. OI är lika känslig som radiotracer-baserade avbildningstekniker, men inte associerat med någon bestrålning exponering. OI ger ett effektivt sätt att spåra celler icke-invasivt och upprepade gånger, vilket ger en inblick i cell migration till målsidan. En stor begränsning av tekniken är den begränsade vävnaden penetration av fluorescerande prober in vivo. Således, ett spårämne ackumulering i djupa vävnader, mer än ca 50-10 cm från huden inte kan up…
Acknowledgements
Projektet fick stöd av en Leon J. Thal SEED anslag från California Institute för regenerativ medicin. Tobias Henning har finansierats av ett Research stipendium från den tyska Research Association (DFG, HE 4578/1-2). Vi vill tacksamt erkänna Juanito Meneses för hans råd om odling av mänskliga embryonala stamceller.
Boddington, S., Henning, T. D., Sutton, E. J., Daldrup-Link, H. E. Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging. J. Vis. Exp. (14), e686, doi:10.3791/686 (2008).