Kultur av myeloisk dendritiska celler från benmärg prekursorer

Summary

Denna video demonstrerar förfarandet för att skilja myeloisk dendritiska celler från benmärg från mus. Isolering av mus skenbenet och lårbenet, och bearbetning av benmärg demonstreras. Bilder visar cellmorfologin före och efter differentiering och figurer föreställande cell fenotyp och IL-12 produktionen efter mognad med CpG visas.

Abstract

Myeloisk dendritiska celler (DC) används ofta för att studera samspelet mellan medfödda och adaptiva immunförsvaret mekanismer och de tidiga svar på infektion. Eftersom dessa är de mest potenta antigenpresenterande celler, är DC alltmer används som ett vaccin vektor att studera induktion av antigen-specifika immunsvar. I denna video visar vi förfarandet för skörd skenben och lårben från en donator mus, bearbetning benmärgen och differentierande utvecklingsländernas in vitro. Egenskaperna hos utvecklingsländernas förändring efter stimulering: omogna dendritiska celler är potenta fagocyter, medan mogna Utvecklingsländerna kan antigen presentation och interaktion med CD4 + och CD8 + T-celler. Denna förändring i funktionell aktivitet motsvarar det uppreglering av markörer cellytan och cytokin produktion. Många agenter kan användas för att mogna utvecklingsländerna, inklusive cytokiner och Toll-like ligander receptorn. I denna video visar vi flödescytometrisk jämförelser av uttrycket av två co-stimulerande molekyler, CD86 och CD40, och cytokin, IL-12, efter natten stimulering med CpG eller modeller behandling. Efter differentiering kan utvecklingsländernas ytterligare manipuleras för att användas som ett vaccin vektor eller för att generera antigenspecifika immunsvar genom in vitro pulserande använda peptider och proteiner, eller transduced med rekombinanta, virala vektorer.

Protocol

Detta protokoll är en anpassning av Lutz et al. 1 Skörd och bearbetning av benmärg Isolering av skenbenet och lårbenet: euthanize givaren musen och spraya benen med 70% etanol. Fatta det första vristen ordentligt med trubbig pincett och börjar skära bort huden och underliggande muskulatur att exponera skenbenet. För att undvika skador på ben, skära långsamt och parallellt med skenbenet och lämnar knäleden intakt. För att reng?…

Discussion

Utvecklingsländerna är användbara för studier av medfödda och adaptiva immunförsvaret interaktioner, och kan användas som ett vaccin vektor. I den här filmen har vi visat att åtgärder för att isolera benmärg och differentiera myeloisk dendritiska celler in vitro. Efter kultur perioden, kan dessa celler kan visualiseras i mikroskop både som anhängare celler, som ofta har dendriter, och icke-häftande celler runt. DCS kan ytterligare manipuleras för antigen-presentation av pulserar med antigen eller stimuleras vid cytokin produ…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
recombinant murine GM-CSF	Reagent	Peptrotech	315-03