Geração de Medula Óssea Derivado Células Dendríticas murino para uso em dois fótons de imagem
Summary
Apresentação de antígenos em órgãos linfóides secundários pelas células dendríticas é crucial para o início da célula T mediada resposta imune adaptativa. Aqui demonstramos a cultura de medula óssea células dendríticas derivadas de camundongos, ativação e de rotulagem para os dois fótons de imagem.
Abstract
Vários métodos para a preparação de células dendríticas murinas podem ser encontrados na literatura. Aqui, apresentamos um método que produz mais de 85% CD11c alta células dendríticas em cultura que abriga o linfonodo de drenagem após a injecção subcutânea e antígeno presente nas células T antígeno específico (ver vídeo). Além disso, usamos instrumentos Essen Incucyte para acompanhar a maturação de células dendríticas, onde, no dia 10, a morfologia das células em cultura é típica de uma célula madura dendríticas e% <85 de células são CD11chigh. O estudo da apresentação de antígenos nos linfonodos periféricos por dois fótons de imagem revelou que há três fases distintas de células dendríticas e interação célula T 1, 2. A Fase I consiste de breves contatos serial entre altamente móveis antígeno de células T específicas eo antigénio transportando células dendríticas 1, 2. A fase dois é marcado por contatos prolongados entre antígeno-específica de células T e células dendríticas antígeno tendo 1, 2. Finalmente, a fase III é caracterizada por células T destacando a partir de células dendríticas, recuperando a mobilidade e começam a dividir 1, 2. Este é um exemplo do tipo de antígeno específico interações que podem ser analisados por dois fótons de imagem de antígeno de células-carregados rastreador dye-rotulados células dendríticas.
Protocol
Discussion
As células dendríticas são mediadores-chave da resposta imune adaptativa ea célula mais eficiente do antígeno apresentando caracterizada até o momento. Métodos para humanos e cultura de células dendríticas do mouse na literatura diferem no tipo de citocinas usadas para influenciar o desenvolvimento de diferentes tipos de células dendríticas. Nomeadamente, a GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa e IFN-gama são utilizadas em diferentes combinações para produzir maduros, imaturos, inflamatórias e steady-state, como medula óssea de…
Acknowledgements
National Institutes of Health comunhão Fellowship Kirchstein predoctoral AI-64128 (MPM), GM-41514 (MDC), GM-48071 (IP)
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