الدماغ المتوسط الدوبامين الابتدائي الثقافات خلية ينفصل عن الولدان القوارض
Summary
دوبامين الدماغ المتوسط الابتدائي الثقافات الخلية فصلها تسمح لدراسة خصائص الخلايا العصبية من قبل المشبكي الدوبامين. يمكن استخدامها لرصد الوقت الحقيقي الحركية الإفراج الدوبامين والبروتين / مرنا مستويات الدوبامين إيماس من المنظمين. هنا ، ونحن تبين لكم كيف تولد هذه الثقافات من الولدان القوارض.
Abstract
القدرة على خلق ثقافات الخلية الأولية الدوبامين من الخلايا العصبية يسمح لدراسة خصائص الخلايا العصبية من قبل المشبكي الدوبامين في عزلة عن غيرها من المدخلات المنهجية في الدماغ. في المختبر ، ونحن نستخدم هذه الخلايا العصبية الحركية لتقييم إطلاق الدوبامين باستخدام الكربون amperometry الألياف ، فضلا عن مستويات التعبير عن الجينات والبروتينات ذات الصلة الدوبامين باستخدام PCR الكمي وكيمياء سيتولوجية مناعية. في هذا الفيديو ، ونحن تبين لكم كيف تولد هذه الثقافات من الولدان القوارض.
وتنطوي العملية على عدة خطوات ، بما في ذلك الطلاء من الخلايا النجمية الدبقية القشرية ، وتكييف وسائل الإعلام للثقافة العصبية خلية الركيزة الدبقية ، وتشريح الدماغ المتوسط في حديثي الولادة ، والهضم ، واستخراج والطلاء الدوبامين من الخلايا العصبية وإضافة إلى عوامل عصبية ضمان بقاء الخلية.
التطبيقات المناسبة لإعداد مثل هذه تشمل الكهربية ، كيمياء سيتولوجية مناعية ، PCR الكمي ، المجهري الفيديو (أي من الانصهار حويصلي في الوقت الحقيقي مع غشاء البلازما) ، وبقاء الخلية المقايسات شاشات السمية الأخرى.
Protocol
Discussion
وصفت وسائل تسمح للقرار هنا غرامة من الميزات المورفولوجية والكيميائية العصبية الدوبامين من الخلايا العصبية المركزية التي هي على خلاف ذلك غير متوفرة في نهج النظامية أو في الجسم الحي.
Acknowledgements
وكان يؤيد العمل DK065872 (ENP) ، ومؤسسة عائلة سميث جائزة التميز في البحوث الطبية الحيوية (ENP) ، F31 DA023760 (BMG ، ENP) وP30 NS047243 (تافتس مركز أبحاث العلوم العصبية).
References
- Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats. FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).
- Pothos, E. N. Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons. Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).
- Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size. The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).
- Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size. The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).
- Sulzer, D., Pothos, E. N. Presynaptic mechanisms that regulate quantal size. Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).
