在体外分化的小鼠胚胎干细胞（MES）使用悬滴法
Summary
本视频演示了如何在小鼠胚胎干细胞体外分化胚体采用悬滴法进行。
Abstract
干细胞具有显着的潜力发展成许多不同的细胞类型。当一个干细胞分裂时，每个新细胞的潜力仍然是一个干细胞，或成为另一个类型的细胞与一个更专业的功能，这是有前途的科学顶尖科学家研究细胞疗法来治疗疾病的可能性。当没有暂停antidifferentiation因素文化时，胚胎干细胞自发分化和形成立体的多细胞聚集。这些细胞聚集被称为胚体（EB）。悬滴文化是一种广泛使用的EB形成诱导方法。悬滴的圆形底部，使胚胎干细胞，它可以提供一个良好的环境，形成EBS mES细胞的聚集。在悬滴aggregatied的ES细胞的数量是可以控制的不同细胞的数量在最初的细胞悬液，将挂在培养皿的盖子下降。使用这种方法，我们可以再现的形式从同质分化的ES细胞的预定人数。
Protocol
涂胶T75烧瓶中，在37℃，5％的CO 2组织培养箱培养过夜之一的前一天使用0.1％的明胶溶液和孵化板。 取出孵化mES细胞，吸出培养基，用PBS冲洗胚胎干细胞培养，加入0.05％胰蛋白酶溶液大衣的菜（2 ml/100mm板）底部。 孵育在37 ° C约1分钟，待细胞塌板。 轻轻磨碎（吸管向上和向下）的4至6倍，以分散与巴斯德吸管插入的ES细胞的胰酶消化细胞，。分散的ES细胞转移到15毫升锥?…
Discussion
悬滴法的缺点如下：不超过50ul，由于维持表面张力的盖子上悬滴一滴的液体的体积是有限的，它不可能改变中期挂滴。形成胚滴直接用显微镜观察也很难在种植。更进一步，悬滴法是由两个步骤组成，因此，悬滴法的一系列步骤可能会很麻烦。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Reagent | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum(FBS) | Reagent | Hyclone | SH30070.03 | |
| L-Glutamine | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Non-Essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| Penicllin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Sodium Pyruvate | Reagent | Gibco | 11360-70 | |
| β-mercaptoethanol | Reagent | Chemicon | ES-007-E | |
| leukemia inhibitory factor(LIF) | Reagent | Chemicon | LIF2005 | |
| 96-well ultralow attachment plate | Tool | Corning | 3474 |
References
- Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48, 173-182 (1991).
- Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells. J Cell Biol. 126, (1994).
Cite This Article
Wang, X., Yang, P. In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method. J. Vis. Exp. (17), e825, doi:10.3791/825 (2008).