माउस भ्रूणीय स्टेम (एमईएस) हैंगिंग ड्रॉप विधि का उपयोग कोशिकाओं की इन विट्रो भेदभाव में
Summary
इस वीडियो को दर्शाता है कैसे माउस भ्रूणीय स्टेम कोशिकाओं की इन विट्रो भेदभाव में embryoid निकायों को फांसी ड्रॉप विधि का उपयोग आचरण.
Abstract
स्टेम सेल उल्लेखनीय कई अलग अलग प्रकार की कोशिकाओं में विकसित करने की क्षमता है. जब एक स्टेम सेल बिताते हैं, प्रत्येक नया सेल करने के लिए या तो एक स्टेम सेल रह सकता है या एक अधिक विशिष्ट समारोह के साथ सेल का एक प्रकार बन क्षमता है, विज्ञान के इस होनहार वैज्ञानिकों सेल आधारित चिकित्सा की संभावना की जांच करने के लिए बीमारी का इलाज अग्रणी है. जब antidifferentiation कारकों के बिना निलंबन संस्कृति में, भ्रूण स्टेम कोशिकाओं अनायास अंतर और तीन आयामी multicellular समुच्चय के रूप में. ये सेल समुच्चय embryoid निकायों (EB) कहा जाता है. हैंगिंग ड्रॉप संस्कृति एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया EB गठन प्रेरण विधि है. फांसी बूंद के गोल नीचे ES कोशिकाओं का एकत्रीकरण जो एमईएस कोशिकाओं बनाने ईबीएस के लिए एक अच्छा माहौल प्रदान कर सकते हैं अनुमति देता है. एक फांसी ड्रॉप में aggregatied ES कोशिकाओं की संख्या प्रारंभिक सेल पेट्री डिश के ढक्कन से एक बूंद के रूप में लटका दिया जा निलंबन में कोशिकाओं की संख्या अलग से नियंत्रित किया जा सकता है. इस पद्धति का उपयोग करके हम reproducibly ES कोशिकाओं के एक पूर्व निर्धारित संख्या से सजातीय ईबीएस फार्म कर सकते हैं.
Protocol
Discussion
फांसी ड्रॉप विधि के नुकसान के रूप में निम्नानुसार हैं: एक बूंद के तरल मात्रा 50ul कम से कम करने के लिए सीमित की वजह से सतह तनाव द्वारा ढक्कन पर फांसी बूँदें बनाए रखने के लिए, और यह असंभव है बूँदें फांसी के लिए मध्यम ?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Reagent | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum(FBS) | Reagent | Hyclone | SH30070.03 | |
| L-Glutamine | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Non-Essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| Penicllin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Sodium Pyruvate | Reagent | Gibco | 11360-70 | |
| β-mercaptoethanol | Reagent | Chemicon | ES-007-E | |
| leukemia inhibitory factor(LIF) | Reagent | Chemicon | LIF2005 | |
| 96-well ultralow attachment plate | Tool | Corning | 3474 |
References
- Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48, 173-182 (1991).
- Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells. J Cell Biol. 126, (1994).
