De FAE au Matrigel 3: Le repiquage du Matrigel CSEh sur Matrigel
Summary
Cette vidéo montre comment maintenir la croissance de cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) dans le chargeur sans cellules conditions et la manière de CSEh passage en continu dans le chargeur sans cellules conditions. Confirmation de CSEh pluripotence grandi dans le chargeur sans cellules par microscopie d'immunofluorescence conditions est également démontrée.
Abstract
Cette vidéo montre comment maintenir la croissance de cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) dans le chargeur sans cellules conditions et la manière de CSEh passage en continu dans le chargeur sans cellules conditions. Confirmation de CSEh pluripotence grandi dans le chargeur sans cellules par microscopie d'immunofluorescence conditions est également démontrée.
Protocol
Discussion
Cette série de 3 vidéos démontre comment faire pousser des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sur fibroblastes de souris embryonnaires des cellules nourricières (MEF) (vidéo 1), comment les passage à Matrigel sans cellule d'alimentation des plaques (vidéo 2), et comment maintenir CSEh par passage dans le chargeur Matrigel sans cellules conditions (vidéo 3). De nombreuses études antérieures ont montré que l'entretien de viable, CSEh indifférenciées nécessite la culture sur cellules nourricières inactivées …
Acknowledgements
Embryonnaires humaines études de cellules souches dans le laboratoire Teitell sont soutenus par un California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Subvention de démarrage RS1-00313. Nous remercions les membres du grand centre de médecine régénérative et de recherche sur les cellules souches à l'UCLA, en particulier le Dr Clark Amander, le Dr Jerome Zack, et des membres de l'UCLA large souches Facilité Institut noyau cellulaire pour leur soutien de nos études.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
References
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