マトリゲル上にマトリゲルからの継代ヒトES細胞：MEFのからマトリゲル3〜
Summary
このビデオでは、フィーダー細胞を含まない条件とどのように継続的にフィーダー細胞を含まない条件で継代ヒトESにおけるヒト胚性幹細胞（ヒトES）の成長を維持する方法を示します。免疫蛍光顕微鏡法でフィーダー細胞を含まない条件で増殖させた多能性hESCの確認にも示されている。 3のパート3。
Abstract
このビデオでは、フィーダー細胞を含まない条件とどのように継続的にフィーダー細胞を含まない条件で継代ヒトESにおけるヒト胚性幹細胞（ヒトES）の成長を維持する方法を示します。免疫蛍光顕微鏡法でフィーダー細胞を含まない条件で増殖させた多能性hESCの確認にも示されている。
Protocol
マトリゲルからマトリゲルへの分割ヒトES細胞通常、マトリゲル上でヒトES細胞のコンフルエント6ウェルプレートのウェルに4-5日を分割した後、再びコンフルエントになると、別のマトリゲルプレートは1:5〜1:3に分割することができます。 CMとマトリゲルプレートは分割前に上記のように調製されています。 分割の日に、、× 1で分割するためにPBS、pH7.4の?…
Discussion
3つ作品のこのシリーズは、どのように通過それらのフィーダー細胞フリープレート（ビデオ2）、およびどのように維持することをマトリゲルために、マウス胚性線維芽細胞（MEF）フィーダー細胞（ビデオ1）にヒト胚性幹細胞（ヒトES細胞）を成長する方法を示していますマトリゲルフィーダー細胞を含まない条件（ビデオ3）に継代してヒトES細胞。数多くの先行研究では、実行可能な、未分化ヒトES細胞?…
Acknowledgements
Teitellラボでヒト胚性幹細胞研究は再生医療のためのカリフォルニア工科大学（CIRM）種子助成RS1 – 00313でサポートされています。我々は、UCLA、特に博士Amanderクラーク博士ジェロームザック、そして我々の研究の支援のためのUCLAのブロード研究所の幹細胞の中核施設のメンバーで、再生医療と幹細胞研究のブロードセンターのメンバーに感謝。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
References
- Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts . Science. 282, 1145-1147 (1998).
- Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells Nature Biotechnology 19. Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).
Cite This Article
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e832, doi:10.3791/832 (2008).