从MEFs基质胶3：传代的胚胎干细胞从基质胶到基质胶
Summary
本视频演示了如何维持人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）在馈线无细胞的条件和如何在馈线不断通过人类胚胎干细胞的无细胞条件的增长。在馈线无细胞的条件下，免疫荧光显微镜确认的人类胚胎干细胞的全能性增长也表明。
Abstract
本视频演示了如何维持人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）在馈线无细胞的条件和如何在馈线不断通过人类胚胎干细胞的无细胞条件的增长。在馈线无细胞的条件下，免疫荧光显微镜确认的人类胚胎干细胞的全能性增长也表明。
Protocol
分割胚胎干细胞从基质胶基质胶通常一个融合的6孔盘基质胶上的人类胚胎干细胞可以分裂1:3到1:5到另一个基质胶盘，井成为融合再次分裂后的4-5天。 CM和基质胶板准备上述分裂之前。 当天分裂，分裂洗每口井用1 × PBS，PH7.4，加1mg/ml的Dispase（稀释原液的DMEM/F12媒体5mg/ml）1ml到每口井，并在37 ° C 3分钟。 每口井三次洗1 × PBS，PH7.4，无碱性成纤维细胞?…
Discussion
这一系列3视频演示如何成长人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）对小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层细胞（视频1），如何通过他们基质胶馈线无细胞板（视频2），以及如何维护人类胚胎干细胞在基质胶馈线无细胞（视频3）的条件下传代。许多以前的研究表明，可行的，未分化的胚胎干细胞的维护需要灭活MEF饲养层细胞培养。然而，许多实验，纯免费接驳细胞污染的人类胚胎干细胞的人口是必需的。为了实现这一目…
Acknowledgements
在Teitell实验室的人类胚胎干细胞研究是由加州再生医学研究所（CIRM）种子批RS1 – 00313的支持。我们感谢的再生医学和干细胞研究的加州大学洛杉矶分校，特别是博士Amander克拉克，博士杰罗姆扎克，和加州大学洛杉矶分校的Broad研究所干细胞核心设施为支持我们的研究成员的广泛中心的成员。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
References
- Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts . Science. 282, 1145-1147 (1998).
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Cite This Article
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e832, doi:10.3791/832 (2008).