הדמיה מפעיל T זיכרון תאים באוזן לאחר אינדוקציה של DTH המאמצת
Summary
כאן אנו להדגים שיטה גרימת הקלטה ההתקדמות של הצתה מאוחרת (DTH) סוג רגישות יתר באוזן חולדה. זה ואחריו הפגנה של הכנת רקמות האוזן עכברוש הדמיה שני הפוטונים של התגובה מפעיל T / תא זיכרון.
Abstract
סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה חיסונית שבה השחקנים העיקריים הם CCR7 – מפעיל / זיכרון לימפוציטים מסוג T. הנה, אנחנו מדגימים שיטה גרימת הקלטה התקדמות התגובה DTH באוזן חולדה. זה ואחריו הפגנה של הכנת רקמות האוזן עכברוש הדמיה שני הפוטונים של CCR7 – תגובה T זיכרון מפעיל / התא.
DTH המאמצת הוא המושרה על ידי הזרקת intraperitoneal של ה-GFP שכותרתו הסגלגל ספציפי CCR7 – קו T זיכרון מפעיל / תא (ביטון, סי ג'יי ניסויים דמיינו, גיליון 8). תאים מותר אז לאזן בחולדה עבור 48 שעות לפני לאתגר על ידי הזרקת אוזן אחת עם מי מלח (באוזן מלאה) והשני עם תערובת 01:01 של מצומדות הסגלגל ואת הביציות כדי טקסס אדום (הסגלגל-TR) כדי לאפשר ויזואליזציה של אנטיגן הצגת תאים תושב.
אנו מתארים שיטת הכנה רקמות שימושי הדמיה תנועתיות של תאים בתוך שכבת הדרמיס עמוק במהלך תגובה חיסונית, בשיתוף עם ויזואליזציה של סיבי קולגן על ידי דור הרמונית השני. רקמת האוזן הוא חתך לתוך 5 × 5 ריבועים מ"מ (מעט גדול יותר הוא טוב יותר) ו רכוב על גבי תלושי כיסוי הפלסטיק באמצעות Vetbond ™, אשר מובטחות אז באמצעות גריז סיליקון בחדר הדמיה superfused על ידי החמצן מבעבע בינוני בתרבית רקמה על 37 ° C .
Protocol
References
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
