Studieren Membrane Biogenesis mit einem Luciferase-Based Reporter Gene Assay

Summary

Hier beschreiben wir Verfahren für die Untersuchung von Veränderungen in Phagozytose-induzierte Genexpression mit einem Luciferase-basierten Reportergen-Ansatz mit dem Dual-GloTM Luciferase Assay System von Promega.

Abstract

Zur Untersuchung der Koordination der verschiedenen Lipid-Synthesewege in Membran-Biogenese ist es sinnvoll, mit einem experimentellen System, in dem Membran-Biogenese erfolgt schnell und in einem induzierbaren Weise zu arbeiten. Wir haben festgestellt, dass die Phagozytose von Latex-Beads praktisch für diese Zwecke als Zellen schnell synthetisieren Membranlipide zu Membran-Pools als Verpackungsmaterial während Partikel engulfment verloren aufzufüllen. Hier beschreiben wir Verfahren für die Untersuchung von Veränderungen in Phagozytose-induzierte Genexpression mit einem Luciferase-basierten Reportergen-Ansatz mit dem Dual-Glo Luciferase Assay System von Promega.

Protocol

Cell Culture Stammkulturen von humanen embryonalen Nierenzellen 293 (HEK293-Zellen) sind in 10-cm Kulturschalen in "Medium A ', bestehend aus Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit einem Cocktail von Antibiotika (100 Einheiten pro ml Penicillin und 100 ug ergänzt gewachsen pro ml Streptomycin-Sulfat) und 10% fötalem Rinderserum (FBS). Zum Einrichten Zellen für ein Experiment, das Medium wird abgesaugt, und die Zellen werden zweimal mit 5 ml Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PB…