ルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子アッセイで膜の生合成を研究して

Summary

ここで、我々はプロメガからデュアルGloTMルシフェラーゼアッセイシステムを用いてルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子のアプローチで貪食誘導性遺伝子発現の変化を研究するための手順について説明します。

Abstract

膜の生合成中に別の脂質合成経路の調整を検討するためには、膜の生合成は、迅速かつ誘導的に発生した実験システムで動作するように便利です。我々は、細胞が急速に粒子の貪食時の材料のラッピングとして失わ膜プールを補充するために膜脂質を合成としてラテックスビーズの貪食は、これらの目的のために実用的であることを見出した。ここでは、プロメガからデュアルグロルシフェラーゼアッセイシステムを用いてルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子アプローチと貪食誘導性遺伝子発現の変化を研究するための手順について説明します。

Protocol

細胞の文化ヒト胚性腎臓293（HEK293）細胞の保存培養は抗生物質のカクテル（ペニシリンのmlあたり100個および100μgを添加したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）で構成される"中"、で10cmの培養皿で増殖させるストレプトマイシン硫酸のml当たり）及び10％ウシ胎児血清（FBS）。 実験用セルを設定するには、培地を吸引し、細胞をリン酸5mlで2回洗浄している生理食塩水（PBS…