Membran Biyogenez bir Lusiferaz Tabanlı Reporter Gen Testi ile incelenmesi

Summary

Burada, Promega Çift GloTM Lusiferaz Testi Sistemi kullanılarak bir lusiferaz tabanlı muhabiri gen yaklaşımı ile fagositoz indüklenen gen ekspresyon değişiklikleri incelemek için prosedürler açıklanmaktadır.

Abstract

Membran biyogenezi sırasında farklı lipid sentez yollarının koordinasyon çalışma için, membran biyogenezi indüklenebilir bir şekilde ve hızla oluşan bir deneysel sistemi ile çalışmak için yararlıdır. Biz hücreler hızla parçacık engulfment sırasında malzeme sarma gibi kayıp membran havuzları doldurmak için membran lipidleri sentez olarak lateks boncuk fagositoz bu amaçlar için pratik olduğunu bulduk. Burada, Promega Dual-Glo Lusiferaz Testi Sistemi kullanılarak bir lusiferaz tabanlı muhabiri gen yaklaşımı ile fagositoz indüklenen gen ekspresyon değişiklikleri incelemek için prosedürler açıklanmaktadır.

Protocol

Hücre Kültürü İnsan embriyonik böbrek 293 (HEK293) hücreleri Stok kültürler antibiyotik bir kokteyl (penisilin ml başına 100 birimleri ve 100 mikrogram ile desteklenmiş Dulbecco'nun Modifiye Kartal Kullanıcı Orta (DMEM) oluşan 'orta A', 10-cm kültür yemekleri büyüdü. başına ml streptomisin sülfat) ve% 10 fetal sığır serumu (FBS). Bir deney için hücreler kurmak için, orta emdi, ve hücreler 5 ml fosfat ile iki kez yıkanır tamponlu salin (PBS) çözümü. </li…