Поведенческие Пробирной для измерения Отзывчивость данио рерио на изменения в интенсивности света
Summary
Мы разработали Visual-двигательную реакцию для количественного мощность двигателя личинок полосатого данио в ответ на свет и уменьшает шагом. Мы также рассмотрели данио видение мутантов, в том числе не optokinetic ответа (СРН) мутантов, которые, как считалось, чтобы быть полностью слепым при испытаниях, другое видение, анализ, optokinetic рефлекс.
Abstract
Optokinetic рефлекса (ОКР) является одним из основных визуальных рефлекс выставлены большинства позвоночных и играет важную роль в стабилизации глаз по отношению к визуальной сцены. Тем не менее, ОКР требует, чтобы животное обнаружения движущихся полос и не исключено, что рыбы, которые не в состоянии проявлять ОКР не может быть полностью слепым. Один данио мутант, не optokinetic ответ с (СРН) не имеет ОКР при любых условиях освещенности проверены и, как сообщается, полностью слепым. Ранее мы показали, что OFF-ганглия активность клеток могут быть записаны в этих мутантов. Чтобы определить, мутант рыба с ОКР не такие, как СРН мутант может обнаружить простым шагом свет и уменьшает мы разработали визуальные двигателя поведенческих анализа (VMR). В данном анализе одной личинки данио помещаются в каждую лунку 96-луночного планшета позволяет одновременное наблюдение личинок использованием автоматизированных видео-системы слежения. Опорно-двигательного ответов каждой личинки до 30 минут свет и 30 минут выключенным освещением были записаны и количественно. WT рыбы короткое время подскочили двигательной активности на свет, известный как старт-рефлекс, а затем вернуться к более низкие, чем базовый деятельности, называется замерзнуть. WT рыбы также резко увеличить свою двигательную активность сразу же после выключенным светом и лишь постепенно (в течение нескольких минут) возвращение к исходному двигательной активности. СРН мутантов реагировать так же, как освещение выключено WT рыбы, но выставлять небольшое снижение их средней активности по сравнению с WT рыбы. Двигательная активность в ответ на свет в СРН мутантов задерживается и вяло. Существует медленного нарастания ответ СРН мутант с включенным освещением по сравнению с WT свет на реакцию. Результаты показывают, что СРН рыбы не полностью слеп. Потому что костистых рыб можно обнаружить свет через не-сетчатки тканей, мы подтвердили, что немедленное поведенческих реакций на свет интенсивности изменения требуют нетронутыми глаз с помощью Чох (ЧК) мутантов, которые полностью лишены глаз от ранних стадиях развития. В нашем анализе VMR, CHK мутанты не проявляют испуга ответа ни свет или выключается, показывая, что боковыми отверстиями посредником этого поведения. Анализ VMR описанные здесь дополняет устоявшихся ОКР анализа, который не испытывает способности данио личинки реагировать на изменения в интенсивности света. Кроме того, автоматизация анализа VMR поддается высокопроизводительного скрининга на наличие дефектов в интенсивности света приводом визуальные ответы.
Protocol
Discussion
Экспериментальных процедур мы показываем в фильме все представитель WT рыбы. Однако, эти эксперименты можно сделать аналогично на мутанта рыбы, а (см. раздел представитель результат). Мы предлагаем пластины WT рыбы и мутантных рыб на одной тарелке в план проверки платы для целей оптимального контро?…
Acknowledgements
Работа выполнена при поддержке Национального института здравоохранения Гранты EY0081 и 5T32UY07145 и фонд офтальмологической тамплиеров. Джейсон Rihel является Бристол-Squibb член исследовательского фонда естественных наук.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Microplate devices | Tool | Whatman | 7701-1651 | |
| Transfer pipetes | Tool | VWR | 202205 | |
| Fish water | Reagent | refer to reference #4 | ||
| Recording chambers (Zebrabox) | Tool | Viewpoint Lifesciences | ||
| Videotrack Software | Tool | Viewpoint Lifesciences |
References
- Allwardt, A. B., Lall, B. A., Brockerhoff, S. E. Synapse formation is arrested in retinal photoreceptors of the zebrafish nrc mutant. J Neurosci. 21, 2330-2330 (2001).
- Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R. OFF ganglion cells cannot drive the optokinetic reflex in zebrafish. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 19126-19126 (2007).
- Prober, D. A., Rihel, J., Onah, A. A. Hypocretin/orexin overexpression induces an insomnia-like phenotype in zebrafish. J Neurosci. 26, 13400-13400 (2006).
- Westerfield, M. . The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish. , (2000).
