और compartmented संस्कृतियों में पृष्ठीय रूट ganglia न्यूरॉन्स की तैयारी रखरखाव
Summary
यहाँ हम तैयारी और पृष्ठीय रूट ganglia के संवेदी न्यूरॉन्स संवर्धन के लिए compartmented कक्षों को बनाए रखने की तकनीक का वर्णन.
Abstract
न्यूरॉन्स axonal प्रक्रियाओं है कि सेल शरीर से दूर हटा रहे हैं करने के लिए लक्ष्य के ऊतकों, जहां लक्ष्य व्युत्पन्न वृद्धि कारक neuronal अस्तित्व और समारोह के लिए आवश्यक हैं अंदर आना विस्तार. Neurotrophins विशेष रूप से और संवेदी न्यूरॉन्स innervating के अस्तित्व और भेदभाव को बनाए रखने के लिए आवश्यक हैं, लेकिन कैसे ये लक्ष्य प्राप्त neurotrophins innervating न्यूरॉन्स की सेल शरीर के लिए संवाद का सवाल 30 से अधिक वर्षों के लिए सक्रिय अनुसंधान के एक क्षेत्र कर दिया गया है. कैसे neurotrophin संकेतों सेल शरीर तक पहुँचने का सबसे अधिक स्वीकार किए जाते हैं मॉडल का प्रस्ताव है कि सिगनल यह संकेत अक्षतंतु साथ ले retrogradely endosomes. आदेश में प्रतिगामी परिवहन का अध्ययन करने के लिए, एक संस्कृति प्रणाली मूल रॉबर्ट Campenot, जो सेल शरीर में उनके axons से अलग कर रहे हैं द्वारा तैयार किया गया था. संवर्धन न्यूरॉन्स संवेदी न्यूरॉन टर्मिनलों के चुनिंदा उत्तेजना का स्मरण दिलाता है कि लक्ष्य प्राप्त neurotrophins के vivo निम्न रिलीज में होता है के लिए इन compartmented कक्षों की तैयारी की तकनीक. प्रतिगामी संकेत घटनाओं है कि लंबी दूरी microtubule निर्भर प्रतिगामी परिवहन की आवश्यकता neurodegenerative विकारों के उपचार के लिए महत्वपूर्ण प्रभाव है.
Protocol
Discussion
इस वीडियो में, हम का प्रदर्शन किया है कैसे तैयार करने और संवर्धन DRG न्यूरॉन्स में उपयोग के लिए compartmented कक्षों को बनाए रखने. ठीक से हो गया, इस प्रणाली अक्षतंतु से सेल शरीर की जुदाई की अनुमति देता है क्रम में करने के लि…
Acknowledgements
हम Katharina Cosker और स्टेफ़नी Courchesne उपयोगी विचार – विमर्श के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | 기타 | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
