改进的膜片钳记录的压力抛光移液器

Summary

这是一个指导修改形状的玻璃微量。具体来说，通过热和空气压力的锥度不增加尖端张开扩大，导致较低的吸液管电阻。这是至关重要的，以获得小细胞低噪音录音，但在许多应用中非常有用。

Abstract

压力抛光塑造膜片钳记录玻璃移液器的方法。首先，我们开发了适合小（<3米）的神经元细胞体的录音编造移液器此方法。基本原理是类似玻璃吹制，并结合空气的压力和热量，修改形状由传统的微量车夫准备的补丁移液器。它可以应用到所谓的软（碱石灰）和硬（硼硅）眼镜。一般来说，抛光压力，可以减少25％，吸液管电阻不减少的尖端张开“（Goodman和Lockery，2000）直径。它可以适用于几乎任何类型的玻璃，只需要增加一个高压阀门及配件一个microforge。这种技术是必要的记录，从超小细胞（<5米）和，还可以通过单声道录音，最大限度地减少吸液管电阻。钝的形状也很有用穿孔膜片钳记录，因为这在一个较大的膜穿孔的气泡的笔尖形状结果。

Protocol

拉移液器使用灯丝一个车夫，如萨特的P – 97火焰山/布朗微电极拖轮，拉约10-20移液器。 选择你的玻璃。我们使用硼硅（BF150 – 86 – 10，OD = 1.5毫米，编号= 0.86毫米）。商店的玻璃，仔细，所以保持清洁和无尘。 设计一个拉动的程序。其主要目的是尖端张开约所需的大小，这将取决于应用程序。萨特的 P – 97移液器食谱 2是一个很好的参考。 在显微镜下?…

Discussion

我们最初开发这种方法使移液器有用2-3μm的神经元在 C片钳记录线虫 ^1。它是在古德曼实验室常规使用。我们的压力不仅波兰移液器录制从微小的C。线虫的神经元，但也获得macropatch表示在爪蟾卵母细胞的离子通道和单通道录音。对于一个给定的尖端开口直径，生硬的造型产生一个低电阻的吸管。下吸液管电阻会导致较低的串联电阻和低噪声录音。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Glass Capillaries	Consumable	Sutter Instruments	BF150-85-10 (or similar)	The method works with any type of capillary except those made from quartz. However, we recommend using capillaries with a filament.
Inverted Microscope	Microscope	Leica	DM IL (or similar)	Any simple inverted microscope will do. However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing. We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose.
Microforge Kit	Tool	ALA Science	CPM-2	Supplies polishing coil, controller and foot pedal.
Air pressure source	Tool	ALA Science	PR-60	Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve. Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below)
4-way valve	Tool	Cole-Parmer	A-98150-01	Fittings will be needed to couple valve to tubing
Pipette Holder with Luer Connector	Tool	World Precision Instruments	MPH-6S20	Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing
Tygon® tubing	Tool	Cole-Parmer	06408-62	Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve