향상된 패치 - 클램프 녹음 압력 연마 Pipettes
Summary
이것은 유리 micropipettes의 모양을 수정하는 가이드입니다. 특히, 열 및 공기 압력을 사용하여 테이퍼가 낮은 피펫 저항을 선도 팁 오프닝을 증가하지 않고 확대됩니다. 이것은 작은 세포의 낮은 소음 녹음을 얻는 것이 중요합니다하지만 많은 응용 프로그램에서 유용합니다.
Abstract
압력 연마는 패치 – 클램프 녹음 유리 pipettes을 형성하는 방법이다. 우리가 먼저 작은 (<3m)의 연결을 세포 기관에서 녹화에 적합한 pipettes를 fabricating이 방법을 개발했습니다. 기본 교장 유리 불어와 유사하며 일반 micropipette의 풀러 준비한 패치 pipettes의 모양을 수정하는 공기 압력과 열을 결합되어 있습니다. 이것은 소위 소프트 (소다 석회)와 하드 (borosilicate) 안경에 적용할 수 있습니다. 일반적으로 압력 연마는 팁 오프닝 (굿맨과 Lockery, 2000)의 직경을 감소하지 않고 25 % 피펫 저항을 줄일 수 있습니다. 이것은 유리의 거의 모든 유형에 적용 고압 밸브와 microforge에 맞는만을 추가 요구하실 수 있습니다. 이 기술은 ultrasmall 세포 (<5m)에서 녹음을 위해 필수적이며, 또한 피펫의 저항을 최소화하여 단일 채널 녹음을 향상시킬 수 있습니다. 무딘 모양이 천공 – 패치 클램프 녹음에도 유용합니다 천공에 사용할 수있는 큰 막 물집이 끝 모양 결과 때문이다.
Protocol
Discussion
우리는 원래 C로 2-3 μm의 뉴런에서 패치 – 클램프 녹음 pipettes 유용하게이 방법을 개발 엘레간스 1. 그것은 굿맨 실험실에서 일상 사용할 수 있습니다. 작은 C.에서뿐만 아니라, 레코딩을위한 우리 압력 폴란드어 pipettes 엘레간스의 뉴런뿐만 아니라 Xenopus oocytes의 표현 이온 채널의 macropatch 및 단일 채널 녹음을 얻는. 주어진 팁 – 오프닝 지름은 뭉툭한 형태는 낮은 저항 피펫을 생?…
Acknowledgements
압력 연마 기법은 SR의 Lockery와 공동으로 개발되었습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass Capillaries | Consumable | Sutter Instruments | BF150-85-10 (or similar) | The method works with any type of capillary except those made from quartz. However, we recommend using capillaries with a filament. |
| Inverted Microscope | Microscope | Leica | DM IL (or similar) | Any simple inverted microscope will do. However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing. We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose. |
| Microforge Kit | Tool | ALA Science | CPM-2 | Supplies polishing coil, controller and foot pedal. |
| Air pressure source | Tool | ALA Science | PR-60 | Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve. Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below) |
| 4-way valve | Tool | Cole-Parmer | A-98150-01 | Fittings will be needed to couple valve to tubing |
| Pipette Holder with Luer Connector | Tool | World Precision Instruments | MPH-6S20 | Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing |
| Tygon® tubing | Tool | Cole-Parmer | 06408-62 | Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve |
References
- Goodman, M. B., Lockery, S. R. Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. . J Neurosci Methods. 100, 13-15 (2000).
