Давление полировки Пипетки для улучшения Патч-зажим Запись
Summary
Это руководство к изменению формы из стекла микропипетки. В частности, с помощью тепла и давления воздуха конус расширяется без увеличения наконечник открытие, что приводит к снижению сопротивления пипетки. Это очень важно для получения низких записи шума из мелких клеток, но полезно во многих приложениях.
Abstract
Давление полировки является методом для формирования стекла пипетки для патч-зажим записи. Сначала мы разработали эту методику изготовления пипеток подходит для записи от небольших (<3 м) тела нейронов. Основной принцип похож на стеклодувные и сочетает в себе давление воздуха и тепла для изменения формы патч пипетки подготовленный обычным съемником микропипетки. Он может быть применен к так называемой мягкой (соды извести) и жесткие (боросиликатного) очков. Вообще говоря, давление полировка может уменьшить сопротивление пипетки на 25%, не уменьшая диаметр кончика открытия (Goodman и Lockery, 2000). Он может применяться практически в любой тип стекла и требует только добавления высокого давления клапан и установки на microforge. Эта техника необходима для записи из клеток сверхмалых (<5 м), а также может улучшить одноканальной записи, минимизируя пипетки сопротивления. Тупой формы также полезно для перфорированной-патч зажим записи, так как это формы иглы приводит к увеличению мембранного пузырь для перфорации.
Protocol
Discussion
Мы изначально разработали этот метод, чтобы сделать пипетки полезно для патч-зажим записи от 2-3 мкм нейронов в C. Элеганс 1. Он регулярно используется в Гудман лаборатории. Мы давления польский пипетки не только для записи от крошечных C. Элеганс нейронов, но и для получения macropatch и од?…
Acknowledgements
Давление полировки техника была разработана в сотрудничестве с Lockery SR.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass Capillaries | Consumable | Sutter Instruments | BF150-85-10 (or similar) | The method works with any type of capillary except those made from quartz. However, we recommend using capillaries with a filament. |
| Inverted Microscope | Microscope | Leica | DM IL (or similar) | Any simple inverted microscope will do. However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing. We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose. |
| Microforge Kit | Tool | ALA Science | CPM-2 | Supplies polishing coil, controller and foot pedal. |
| Air pressure source | Tool | ALA Science | PR-60 | Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve. Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below) |
| 4-way valve | Tool | Cole-Parmer | A-98150-01 | Fittings will be needed to couple valve to tubing |
| Pipette Holder with Luer Connector | Tool | World Precision Instruments | MPH-6S20 | Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing |
| Tygon® tubing | Tool | Cole-Parmer | 06408-62 | Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve |
References
- Goodman, M. B., Lockery, S. R. Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. . J Neurosci Methods. 100, 13-15 (2000).
