Geliştirilmiş Patch-kelepçe kayıt için Basınç-parlatma Pipetler
Summary
Bu cam mikropipetler şeklini değiştirerek bir kılavuzdur. Özellikle, ısı ve hava basıncı ile konik pipet direnci azaltmak için, ucu açıklığı artırmadan genişletilinceye. Bu küçük hücrelerin düşük gürültü kayıtları elde etmek için kritik öneme sahiptir, ancak birçok uygulamada yararlıdır.
Abstract
Basınç-parlatma yama klemp kayıt için cam pipetler şekillendirmek için kullanılan bir yöntemdir. Biz ilk olarak küçük (<3 m) nöronal hücre gövdeleri kayıt için uygun pipetler imalatı için bu yöntemi geliştirdi. Temel prensip, cam üfleme benzer ve geleneksel bir mikropipet çektirmenin tarafından hazırlanan yama pipetler şeklini değiştirmek için, hava basıncı ve ısı birleştirir. Bu sözde yumuşak (kostik soda) ve sert (borosilikat) gözlük uygulanabilir. Genel olarak konuşmak gerekirse, basınç parlatma ucu açıklığı (Goodman ve Lockery, 2000) çapı düşürmeden, pipetle direnci% 25 oranında azaltabilir. Hemen her tür cam uygulanan ve bir yüksek basınç valfi ve bir microforge monte sadece ek gerektirir. Bu teknik ultrasmall hücreleri (<5 m) kayıt için gerekli ve ayrıca pipet direnci en aza indirerek, tek kanallı kayıt artırabilirsiniz. Künt şekli delikli yama kelepçe kayıt için de yararlıdır perforasyonu için daha büyük bir membran bleb bu ucu şeklini sonuçları.
Protocol
Discussion
Biz aslında C. 2-3 mikron nöronlardan gelen patch-klemp kayıt için pipetler yararlı hale getirmek için bu yöntem geliştirdi elegans 1. Goodman laboratuvarda rutin olarak kullanılması. Biz sadece kayıt için küçük C. basınç lehçe pipetler elegans nöronlar, aynı zamanda iyon kanalları Xenopus oositleri ifade macropatch ve tek kanallı kayıtları elde etmek için. Belirli bir ucu açılması çapı için, künt şekli, düşük bir direnç pipet oluşturur. Alt pipet direnci d…
Acknowledgements
SR Lockery ile işbirliği içinde basınç parlatma tekniği geliştirildi.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass Capillaries | Consumable | Sutter Instruments | BF150-85-10 (or similar) | The method works with any type of capillary except those made from quartz. However, we recommend using capillaries with a filament. |
| Inverted Microscope | Microscope | Leica | DM IL (or similar) | Any simple inverted microscope will do. However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing. We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose. |
| Microforge Kit | Tool | ALA Science | CPM-2 | Supplies polishing coil, controller and foot pedal. |
| Air pressure source | Tool | ALA Science | PR-60 | Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve. Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below) |
| 4-way valve | Tool | Cole-Parmer | A-98150-01 | Fittings will be needed to couple valve to tubing |
| Pipette Holder with Luer Connector | Tool | World Precision Instruments | MPH-6S20 | Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing |
| Tygon® tubing | Tool | Cole-Parmer | 06408-62 | Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve |
References
- Goodman, M. B., Lockery, S. R. Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. . J Neurosci Methods. 100, 13-15 (2000).
