Amperometric 전극 제작

이 프로토콜은 탄소 섬유 전극을 생성하는 방법을 설명합니다. 먼저, 크기가 제거된 탄소 섬유로 유리 모세관을 채웁니다. 다음으로 광섬유 모세관 어셈블리를 두 개의 전극으로 당기고 섬유를 절단합니다.

그런 다음 전극을 에폭시에 담그도록 배열합니다. 광섬유를 전극에 밀봉하기 위해 광섬유 전극을 뜨거운 오븐의 랙에 보관합니다. 이 전극은 이후 탄소 섬유 및 기압계를 사용하여 단일 세포의 소포에서 카테콜아민 방출을 감지하는 데 사용됩니다.

성공적인 녹음은 녹음 트레이스에서 낮은 노이즈와 잘 구별되는 상향 스파이크를 보여줍니다. 안녕하세요, 저는 세인트루이스 대학교 의과대학 약리학 및 생리과학과 에이미 하킨스 박사 실험실의 캐리 파이크입니다. 단일 세포에서 카테콜아민 방출을 측정하기 위한 고온계에 사용되는 저소음 탄소 섬유 전극을 생성하는 절차를 보여 드리겠습니다.

전극을 만들기 위해 탄소 섬유를 준비하기 시작합시다. 먼저, 탄소 섬유 다발을 흄 후드의 모세관 피펫 길이의 약 1.25배 길이로 자릅니다. 용기에 약 100ml의 아세톤을 끓이고 뜨거운 끓는 아세톤에 섬유를 30분 이상 첨가하여 크기를 제거합니다.

끓인 후 가열된 아세톤에서 섬유를 제거하고 50-100밀리리터의 새 아세톤이 들어 있는 깨끗한 비커로 옮깁니다. 섬유를 후드 밖으로 옮길 수 있는 알루미늄 호일로 다시 한 번 옮깁니다. 열린 150mm 페트리 접시에 다발을 놓고 탄소 섬유를 밤새 자연 건조시켜 섬유를 건조시킵니다.

이제 탄소 섬유가 준비되었으므로 유리 모세관 준비를 진행하여 튜브를 화재 연마합니다. 길이 7.5cm, 외경 1.5mm, 내경 1.3mm의 마이크로 헤마토크릿 유리 모세관 튜브를 사용합니다. 튜브를 중앙에 잡고 한쪽 끝을 화염에 노출시킵니다.

화염 속에 있는 동안 튜브를 약 3회 회전시킵니다. 튜브를 뒤집고 반대쪽 끝을 화염에 넣고 다시 세 번 회전합니다. 모세관 튜브의 양면은 이제 화염 연마 처리되었습니다.

유리 접시에 화재 광택 튜브를 놓고 탄소 섬유로 채울 준비가 될 때까지 오븐으로 옮깁니다. 탄소 섬유를 모세혈관에 끼우기 시작하기 전에 보호용 안면 마스크를 착용해야 합니다. 그런 다음 필터가 있는 진공 청소기에 연결된 플라스틱 튜브를 사용하여 섬유를 유리관으로 빨아들입니다.

다음으로 메스를 사용하여 섬유를 자릅니다. 튜브의 양쪽 끝에서 1/4인치의 섬유를 남겨 두십시오. 이제 나사산 탄소 섬유를 당겨 피펫 섬유 전극을 당길 준비가 되었습니다.

모세관 튜브를 전극 극성에 놓고 손잡이를 조여 모세관 튜브를 제자리에 고정합니다. 그런 다음 극성을 최적 설정으로 설정하고 스위치를 조작하여 두 개의 극을 실행합니다. 피펫이 반으로 당겨지면 중앙의 노출된 섬유를 잘라 두 반쪽을 분리합니다.

가위를 사용합니다. 각 전극 절반을 제거하고 돌출된 섬유를 당겨 유리 밀봉을 깨뜨립니다. 튜브 외부에 섬유의 8분의 1인치만 남도록 가위로 섬유를 자릅니다.

약 16세까지 이 단계를 반복합니다. 섬유 전극은 에폭시 유리 밀봉을 만들기 위해 전극을 밀봉하기 전에 당겨집니다. 첫. 섭씨 55도로 설정된 핫 플레이트에서 미리 만들어진 에폭시 부분 표본을 6분 동안 가열합니다.에폭시가 가열되는 동안 흄 후드에서 당긴 전극 중 약 16개를 묶음으로 감쌉니다.

에폭시를 6분 동안 가열한 후 테이프를 사용하여 뜨거운 에폭시에 경화제 0.7g을 추가합니다. 바이알을 휘젓아 섞습니다. 전극 다발을 뜨거운 에폭시 플러스 경화제 용액에 담그십시오.

약 5초 동안 매번 번들을 두 번 담그면 충분한 양의 에폭시가 모세관 작용을 통해 유리 팁에 들어갈 수 있습니다.번들을 풀고 전극을 슬롯이 있는 판지 홀더에 놓습니다. 이 트레이를 화씨 100도로 설정된 오븐에 넣습니다.

최소 48시간 후 해부 현미경으로 각 전극을 검사합니다. 에폭시로 채워지지 않은 전극은 폐기하십시오. 스매시 팁이 있습니다.

섬유가 두 개 이상이거나 다른 이유로 사용할 수 없습니다. 각 전극을 검사한 후 판지 홀더에 다시 놓고 오븐에 다시 넣습니다. 전극은 일반적으로 제조 후 약 1개월 동안 유효하며 셀의 고온계에 사용하기 전에 탄소 섬유를 절단해야 합니다.

탄소 섬유를 절단하려면 탄소 섬유 전극을 테프론 테이프로 유리 슬라이드에 조심스럽게 놓습니다. 해부 현미경으로 팁을 시각화합니다. 다음으로, 깨끗한 메스 날을 사용하여 탄소 섬유를 수직으로 절단하여 탄소 섬유를 셀에 배치할 수 있도록 평평하고 깨끗한 표면을 남깁니다.

녹음 직전. 충전 주사기를 사용하여 3개의 몰 염화칼륨으로 모세관을 다시 채우고 섬유 반대쪽 끝을 건조시킵니다. 과도한 소금을 제거합니다.

전극 홀더의 은, 염화은 펠릿에 전극을 놓습니다. 고온계 헤드 스테이지에 전기적으로 부착됩니다. 전극을 안정적으로 유지하기 위해 전극 홀더를 조입니다.

전극을 셀에 인접하게 배치하고 RO 메트릭 이벤트 기록을 진행합니다. 이 프로토콜은 tric 전극을 생성하고 절단하는 방법을 설명합니다. tric 녹음 중에는 탄소 섬유 전극을 분비 세포의 표면에 놓습니다.

외세포작용(exocytotic activity)은 tric spikes로 관찰되며, 이는 카테콜아민(catecholamines)의 산화 후 전자의 전달에 의해 발생하는 전기화학적 전류를 나타냅니다. EmPro 미터법 전극을 만들고 절단하는 연습을 통해 시중에서 판매되는 많은 전극에 비해 소음 수준을 크게 향상시킬 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때 탄소 섬유 전극을 제작하고 파라메트릭하는 방법을 보여드렸습니다.

일관되고 저잡음 전극을 위해 프로토콜의 세부 사항에 세심한 주의를 기울이는 것이 중요합니다. 그게 다야. 시청해 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.