Name: Longo prazo células de mamíferos utilizando imagens do Largo-Campo Microscopia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: Aprenda a realizar imagem de longo prazo em células de mamíferos usando microscopia de campo amplo invertida a 37°C. Este método permite estudar divisão celular e progressão mitótica em tempo real.

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Os autores não têm nada a declarar.

longo prazo células de mamíferos utilizando imagens do largo-campo microscopia

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Longo prazo células de mamíferos utilizando imagens do Largo-Campo Microscopia

Na verdade, o que vou fazer é montá-lo aqui primeiro e depois substituir você. Então, agora vou aspirar, tentando ser o mais delicado possível. Ok. Alguns segundos apenas segurando. Ok. Tudo bem.Portanto, as características importantes da nossa grade de imagem em tempo real são: trata-se de um microscópio invertido, o que significa que a objetiva, as amostras aqui na objetiva estão abaixo. Assim, a objetiva está voltada para cima e todo o microscópio, ou praticamente todo, incluindo as objetivas e a amostra, está a 37 graus. Portanto, tudo dentro desta caixa de plástico está a 37 graus.E logo acima do estágio temos uma mistura de ar e CO2. Isso é 5% de CO2. A ideia é que a amostra esteja efetivamente em uma célula, como num incubador de células.E então temos, este é o nosso misturador para o ar e o CO₂, e ele é umidificado e aquecido, e depois conduzido até a amostra na platina. Ok. E hoje vamos fazer apenas fluorescência em um canal, fluorescência GFP. Esta é a mangueira por onde entra o CO₂, com 5% de CO₂, e ela se encaixa simplesmente no suporte da platina.Isso é importante. E então podemos fechar esses, retirá-los, e depois passamos para a nossa primeira posição. E o que vou fa

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Imagem tecido embrionário em tempo real, é um desafio durante longos períodos de tempo. Aqui nós apresentamos um ensaio para o monitoramento das alterações celulares e sub-celular na medula espinhal pinto por longos períodos com resolução espacial e temporal. Esta técnica pode ser adaptado para outras regiões do sistema nervoso e embrião em desenvolvimento.

De alta resolução de imagem ao vivo de comportamento de células no desenvolvimento neuroepitélio

Lapso de tempo de imagem é utilizado para avaliar o comportamento dos principais pré-neoplásicas células epiteliais mamárias derivados de modelos de ratos geneticamente modificados de risco de câncer de mama para determinar se há correlação entre os parâmetros específicos de comportamento e distintas lesões genéticas.

Lapso de tempo de imagem de pré-neoplásicas primárias células epiteliais mamárias derivados de modelos de rato geneticamente modificado do cancro da mama

A matriz extracelular sofre remodelação substancial durante a cicatrização de feridas, inflamação e tumorigênese. Nós apresentamos uma abordagem microscopia de imunofluorescência intravital romance de visualizar a dinâmica de fibrilar, bem como componentes da matriz de malha-like com resolução espacial e temporal alta usando epifluorescência ou microscopia de dois fótons.

Longo prazo intravital Imunofluorescência imagem do tecido componentes da matriz com epifluorescência e microscopia de dois fótons

Imagens ao vivo da cóclea de mamíferos embrionária é um desafio porque os processos de desenvolvimento na mão operam em um gradiente temporal, ao longo de dez dias. Aqui é apresentado um método para a cultura e, em seguida, imagiologia embrionário tecido de explante da cóclea retirado de um rato repórter fluorescente ao longo de cinco dias.

Longo prazo Time Lapse Imagem do mouse cocleares explantes

Este protocolo descreve o uso de microscopia multifotônica para realizar imagens de célula única de alta resolução de longo prazo do pulmão intacto em tempo real usando uma janela de imagem estabilizada a vácuo.

De longo prazo de alta resolução Intravital Microscopia no pulmão com um vácuo estabilizado Janela de imagem

O método aqui apresentado utiliza micropadronização em conjunto com a imagem quantitativa para revelar a organização espacial dentro das culturas de mamíferos. A técnica é fácil de estabelecer em um laboratório de biologia celular padrão e oferece um sistema tratável para estudar padronização in vitro.

Mapeando a organização espacial emergente de células de mamíferos usando Micropatterns e imagens quantitativas

Apresentado aqui é um protocolo para a implantação de uma janela craniana crônica para a imagem longitudinal de células cerebrais em camundongos acordados e com a cabeça.

Implantação de uma janela craniana para imagem repetida em vivo em ratos acordados

Uma abordagem é aqui apresentada para imagens intravitais de longo prazo usando janelas de silicone opticamente claras que podem ser coladas diretamente ao tecido/órgão de interesse e à pele. Essas janelas são mais baratas e mais versáteis do que outras atualmente utilizadas no campo, e a inserção cirúrgica causa inflamação e angústia limitadas aos animais.

Imagem intravital longitudinal através de janelas de silicone claras

Este protocolo descreve uma nova janela de imagem mamária com uma tampa substituível (R.MIW). A microscopia intravital após a implantação do R.MIW permite imagens longitudinais e de vários dias da glândula mamária saudável e doente com resolução celular durante os diferentes estágios de desenvolvimento.

Microscopia intravital longitudinal usando uma janela de imagem mamária com tampa substituível

O presente protocolo descreve a confecção de uma grande janela craniana (6 x 3 mm2) usando envoltório de alimentos, silicone transparente e vidro de cobertura. Esta janela craniana permite experiências de imagem de cálcio in vivo de campo largo e de dois fótons no mesmo rato.

In vivo Imagem de cálcio de campo amplo e de dois fótons de um rato usando uma grande janela craniana

Os protocolos descritos são novos métodos de visualização de estruturas periféricas na lente ocular com métodos de quantificação de imagens. Estes protocolos podem ser utilizados em estudos para melhor compreender a relação entre as estruturas da microescala do cristalino e o desenvolvimento/função do cristalino.

Imagens de montagem completa para visualizar e quantificar a estrutura da lente periférica, a morfologia e a organização da célula

Aprenda a realizar imagem de longo prazo em células de mamíferos usando microscopia de campo amplo invertida a 37°C. Este método permite estudar divisão celular e progressão mitótica em tempo real.

Longo prazo células de mamíferos utilizando imagens do Largo-Campo Microscopia

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