Fare Meme Epitel Hücreleri lactogenic Farklılaşma sırasında Mammospheres formu

Merhaba, ben Sağlık Bilimleri Tekdüzen Hizmetler Üniversitesi Patoloji Bölümü'nde Dr.Mary Lou Cutler'ın laboratuvarından Bethany Morrison. Bugün size HC 11 fare meme epitel hücrelerinden mamut kürelerinin geliştirilmesi için bir prosedür göstereceğiz. Bu prosedürü laboratuvarımızda lakto farklılaşmasını incelemek için kullanıyoruz.

Öyleyse başlayalım Bu protokolü başlatmak için. HC 11 hücreleri, mililitre başına beş mikrogram insülin, 10 mikromolar Heiss ve mililitre başına 10 nanogram olmak üzere% 10 fetal buzağı serumu ile desteklenen RPMI 1640 ortamında altı gün boyunca birleşecek şekilde büyütülür. Epidermal büyüme faktörü EGF yetkinlik oluşturmak için.

Bu hücreler, Nancy Hines ve Bernard Groner'in laboratuvarları tarafından doku kültürü başlığındaki genetik farklılaşmanın düzenlenmesini incelemek için yaygın olarak kullanılmıştır. Hücreler daha sonra PBS ile yıkanır ve 24 saat boyunca EGF'siz büyüme ortamında tutulur. Bu inkübasyonu takiben, hücreler, inkübasyondan sonra lakto farklılaşmasını indüklemek için deksametazon, insülin ve prolaktin ile desteklenmiş RPMI'den oluşan farklılaşma ortamında inkübe edilir.

Farklılaşma ortamında, mamo kürelerini fotoğraflamak ve numaralandırmak için dijital kamera ile donatılmış bir Olympus IX 71 mikroskobu kullanılır. Faz kontrast mikroskobu ile mamo küreleri, indüksiyondan 120 saat sonra birden çok kez fotoğraflanır ve numaralandırılır. Bu görüntü, normal bir belleğin düşük güç büyütmesini göstermektedir.

Epitel hücreli tek tabaka hücreleri, genik hormonlarla stimülasyondan önce yaklaşık üç gün boyunca birleşim yerinde tutulmalıdır. İşte indüksiyondan üç gün sonra düşük güçte büyütmede oluşan yeni mamut kürelerine bir bakış. Epitel hücreleri boyunca rastgele aralıklarla yerleştirilmiş küçük kubbe benzeri yapılar olarak görünmeye başlarlar.

Yine düşük güçte. İşte indüksiyondan beş gün sonra gelişen çoklu mammo kürelerine bir bakış. Mamos küreleri burada yüksek büyütmede hem boyut hem de sayı olarak büyümeye devam etti, mamos küresinin karakteristik özelliği kabarcık veya kubbe benzeri açıkça görülebiliyor.

Size az önce hafıza epitel hücrelerini nasıl indükleyeceğinizi gösterdik, böylece bunlar mamut küreleri oluşturacak, bu hücreler genetik farklılaşmanın belirteçleri olarak kullanılacak. Bu prosedürü yaparken, indüksiyondan önce birleşme hücrelerini korumayı hatırlamak önemlidir, çünkü bu süre zarfında hücreler, genetik hormonlara yanıt verme konusunda tamamen emin olmak için etkileşime girmeleri gereken matris proteinleri üretirler. Tedaviden önce EGF'yi ortamdan çıkarmayı hatırlamak da önemlidir, çünkü EGF farklılaşma sürecini engelleyecektir.

İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde iyi şanslar.