Encyclopedia of Experiments: Biology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- ابدأ الإجراء بوضع سمكة بالغة مخدرة على كومة من الورق الماصة. نقل مقطع الذيل إلى أنبوب نظيف يحتوي على عازل تحلل. يحتوي مخزن التحلل المؤقت على المنظفات غير الأيونية، التي تعمل على تليين غشاء البلازما والغشاء النووي للخلية. ويحتوي العازل أيضا على إنزيم يسمى proteinase K يكسر البروتينات ويمكن من إطلاق الحمض النووي في الليسات. الهضم.
الآن، وترك أنابيب مع مقاطع الذيل في حاضنة بين عشية وضحاها لكسر تماما أسفل الأنسجة في 55 درجة مئوية مع دوران مستمر. بعد ذلك ، سخني الأنبوب عند 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة لتثبيط البروتين K. Centrifuge الأنبوب إلى الكريات المواد غير المهضومة ونقل الناطقة التي تحتوي على الحمض النووي إلى أنبوب آخر.
- في يوم إعداد الحمض النووي، أضف بروتينا طازجا K إلى حاجز التحلل بتركيز 1 ملليغرام لكل ملليلتر.
أولا، تخدير الأسماك في حل tricaine. انتظر حتى حركات الخياشيم بطيئة. ثم، وضع السمك على كومة من الأنسجة، ومع شفرة حلاقة معقمة، وقطع قطعة صغيرة من زعنفة الذيل حوالي 2 إلى 3 ملليمترات طويلة.
التقط مشبك الزعنفة بطرف ماصة معقم ونقله إلى أنبوب مليء بمائة ميكرولتر من مخزن تحلل الحمض النووي.
بعد الحضانة، تعطيل البروتين K عن طريق تسخين الأنابيب في 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
