Encyclopedia of Experiments: Biology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Plaats om te beginnen een natte spons met een spleet op een Petrischaal. Verdoof vervolgens een volwassen vis met tricaïneoplossing en breng deze voorzichtig over in de spleet met de ventrale kant naar boven gericht. Plaats de Petrischaal onder een stereomicroscoop en observeer de beweging van het kloppende hart onder de huid.
Plaats een mincroinjectienaald onder een hoek van 45 graden van de lichaamsas boven het kloppende hart tussen het operculum en de borstgordel. Breng de naald voorzichtig door de huid naar het pericard, een dun membraan dat het hart omringt. Lever het injectiemengsel af in het pericard.
Het schot bevat een tracerkleurstof zoals fenolrood om de beweging van de oplossingen te volgen. Trek de naald uit de thorax. Breng de vis onmiddellijk over in de terugwinningstank met systeemwater en controleer deze op volledig herstel van anesthesie. In het volgende protocol zullen we een intrathoracale injectie uitvoeren om een testverbinding af te leveren en de effecten ervan op de hartregeneratie te onderzoeken.
- Gebruik een net om een volwassen vis te vangen en breng deze over in de verdovingsoplossing. Na één tot twee minuten, wanneer de vis stopt met zwemmen en de beweging van het operculum wordt verminderd, raakt u de vis aan met een plastic lepel om ervoor te zorgen dat deze niet reageert op contact. Breng de vis vervolgens snel en voorzichtig over in de groef van de natte spons met de ventrale kant naar boven. De kop van de vis moet weg wijzen van de dominante hand van de operator.
Onder de stereomicroscoop, observeer zorgvuldig de beweging van het kloppende hart onder de huid van de vis. Bepaal visueel het injectiepunt boven het kloppende hart en in het midden van de driehoek gedefinieerd door de ventrale kraakbeenplaten. Plaats de punt van het capillair onder een hoek tussen 30 en 45 graden ten opzichte van de lichaamsas. Penetreer voorzichtig de huid met de punt van het microcapillair in het pericard.
Zodra de naald zich in het pericard bevindt, drukt u op het pedaal van het micro-injectorapparaat om de injectie te voltooien. Trek na de injectie het capillair voorzichtig uit de thorax en breng de vis onmiddellijk over in een tank met systeemwater voor herstel. Controleer de vis tot het totale herstel van anesthesie. Om de effecten van de injectie te analyseren, verzamelt u het hart op het gewenste tijdstip en bereidt u het voor op verdere analyse.
